全 文 ：方程即为 Higuchi方程, 所得斜率 K 即为透皮速率
常数 J [Lg/ ( cm2·h) ]。
2. 3　黄芩苷渗透 5种皮肤的吸收行为:按透皮吸收
试验方法, 以乙醇-生理盐水溶液( 50∶50)为接收
液,分别对黄芩苷贴片透过小鼠皮肤、裸鼠皮肤、家
兔皮肤、大鼠皮肤及人体皮肤进行研究。每 2 h 取样
1次,连续取样 12 h,按前法处理, 计算透皮速率常
数,见表 1。
表 1　黄芩苷渗透不同动物皮肤的 Higuchi方程 (n= 5)
Table 1　Higuchi equations of baica lin of tr ansdermal
absorption per var ious skins (n= 5)
皮肤种类 　　　Higuchi方程 J / ( Lg·cm- 2·h - 1) r
小鼠 Q= 67. 31 t 1/ 2+ 28. 65 67. 31±23. 66 0. 910
裸鼠 Q= 78. 30 t 1/ 2+ 21. 07 78. 35± 3. 29 0. 990
家兔 Q= 117. 36 t 1/ 2- 39. 40 117. 35±29. 48 0. 915
大鼠 Q= 86. 25 t 1/ 2+ 27. 22 86. 25± 7. 55 0. 930
人体 Q= 84. 43 t 1/ 2+ 18. 70 84. 43±11. 27 0. 921
　　可见,黄芩苷贴片中黄芩苷透过裸鼠和大鼠皮
肤的透皮速率常数与透过人体皮肤的透皮速率常数
较为接近。从实验的重复性来看,以裸鼠为最好。
3　讨论
　　在经皮给药制剂研究中, 由于人体皮肤较难获
得, 故选取理想的实验动物皮肤代替人体皮肤进行
实验具有重要意义。本研究结果表明, 以pH 6. 8磷
酸缓冲液为接收液, 黄芩苷透过小鼠皮肤、裸鼠皮
肤、家兔皮肤、大鼠皮肤、人体皮肤透皮速率常数为
家兔> 大鼠> 人> 裸鼠> 小鼠,其中透过裸鼠和大
鼠的透皮速率常数与透过人体皮肤的透皮速率常数
较为接近,从实验的重复性来看,以裸鼠为好。结果
提示对于黄芩苷的透皮吸收研究,以裸鼠皮肤为实
验屏障较为理想, 为黄芩苷经皮给药制剂的深入研
究提供依据。
Refer ences:
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of baicalin [ J] . Chin J H osp Phar m (中国医院药学杂志) ,
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467
D101大孔吸附树脂纯化苦玄参总皂苷的研究
王力生1, 2 ,邹节明1, 2,郭亚健1X
( 1. 北京中医药大学中药学院,北京　100102; 2. 桂林三金药业股份有限公司,广西 桂林　541004)
摘　要:目的　研究 D101大孔吸附树脂纯化苦玄参总皂苷的工艺条件, 建立苦玄参总皂苷的分析方法。方法　以
TLC为检测手段, 考察 D101大孔吸附树脂对苦玄参总皂苷的吸附和洗脱条件, 并采用分光光度法测定提取物中苦
玄参皂苷的含量。结果　D101大孔吸附树脂可以将苦玄参总皂苷含量由浸膏中的 8. 7%提高至 27. 3% ,增加 20%乙
醇洗脱操作可进一步提高至 52. 1% ;苦玄参总皂苷的最大吸收波长为 261 nm, 与苦玄参苷ÉA 一致。苦玄参苷ÉA
在 4. 56～91. 2 Lg/ mL 与吸光度呈良好的线性关系,平均回收率为 96. 3%。结论　D101大孔吸附树脂能有效富集并
纯化苦玄参总皂苷;分光光度法测定苦玄参总皂苷含量具有快捷、准确的特点。
关键词:苦玄参;苦玄参苷ÉA;总皂苷; D101大孔吸附树脂;分光光度法
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670(2004) 05 0515 03
Study on purification of total saponins in Picria f el-terrae wit h D101 macroporous resin
WANG Li-sheng1, 2, ZOU Jie-ming1, 2, GUO Ya-jian1
( 1. Institute of Chinese Mat eria Medica, Beijing Universit y of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100102, China;
2. Guilin Sanjin Pharmaceutica l Co. , Ltd. , Guilin 541004, China )
Key words: P icria f el -terr ae Lour. ; picfeltarraenin ÉA; total saponins; D101 macropor ous resin;
spect rophotometry
　　大孔吸附树脂技术应用于药物的纯化开始于
20世纪 70年代。目前已较多地应用于天然成分的
分离和纯化。D101大孔吸附树脂是一种聚苯乙烯型
非极性树脂,在皂苷的纯化方面已有较多的报道。苦
·515·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 5 期 2004年 5月
X 收稿日期: 2003-09-06作者简介:王力生( 1968—) ,男,高级工程师,主要从事中药新药开发和中药生产技术应用研究。
T el: ( 0773) 5849548　E-mail : Wlsh eng2840@s ina. com
玄参皂苷最先从苦玄参具有抑菌和抗癌活性的部分
中分离得到[ 1]。药理实验表明,苦玄参苷ÉA 具有中
枢抑制作用[ 2] , 部分苦玄参皂苷还具有较强的抗补
体作用,该作用可能与苦玄参具有抗炎作用的临床
表现相关[ 3]。本实验对 D101大孔吸附树脂吸附和解
吸苦玄参总皂苷进行研究,并建立了苦玄参总皂苷
的分析方法, 为苦玄参的开发应用奠定了一定的
基础。
1　仪器与材料
UV—2401PC型紫外-可见分光光度仪(日本
岛津)。
　　D101大孔吸附树脂(天津农药股份有限公司树
脂分公司) ;苦玄参苷ÉA 对照品(桂林三金药业股
份有限公司提供, 纯度为 98. 46%)。所用试剂均为
分析纯。
　　苦玄参经桂林三金药业股份有限公司郑耀年高
级工程师鉴定, 为玄参科植物苦玄参 Picr ia f el -ter -
rae Lour.的干燥全草。
2　方法与结果
2. 1　苦玄参药液的制备:取苦玄参药材,破碎, 称取
33 kg,加水煎煮 2 次, 每次 1 h, 第一次加水 10倍
量,第二次加水8倍量。合并煎煮液, 高速离心, 离心
液冷却至室温,备用(药液含生药 0. 082 g/ mL)。
2. 2　吸附容量的测定:取大孔树脂 4 份, 每份 60
mL, 各加乙醇 100 mL,浸泡 24 h, 分别装入同样规
格的玻璃柱( 40 cm×2 cm) ,再用乙醇洗脱至流出液
与水混合后不呈混浊, 继续用蒸馏水洗至流出液中
的乙醇浓度低于 10% ,备用。洗脱流速为 5 mL/ min
(下同)。
　　取 386, 488, 610, 732 mL 苦玄参药液, 分别过
上述大孔树脂柱, 再用水 200 mL 洗脱, 收集流出
液,蒸干,加甲醇溶解, 滤过。滤液置 5 mL 量瓶中,
加甲醇至刻度。各吸取滤液 4 LL,分别点于同一硅
胶 G薄层板上, 以氯仿-甲醇-水( 4∶1∶0. 1)为展开
剂,展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,在 80
℃加热至斑点显色清晰。结果表明:药液与树脂的体
积比为 6. 4 和 8. 1时, 未见明显的紫红色斑点;为
10. 2时,隐约出现紫红色斑点;为 12. 2时, 斑点明
显。因此,本实验采用药液与树脂的体积比为 8. 1。
2. 3　洗脱条件的研究:依次用 10%, 20%, 30%,
40%, 50% , 60%, 70%, 80% , 90%乙醇各 100 mL,
洗脱药液与树脂的体积比为 8. 1的树脂柱, 分别收
集各洗脱液, TLC法检识,乙醇浓度达到 30%时,苦
玄参总皂苷开始被洗脱, 60%乙醇洗脱液的斑点最
大, 90%乙醇洗脱液中未见明显苦玄参皂苷斑点。
　　另取苦玄参药液 2份,每份 488 mL,分别过 60
mL 大孔树脂柱, 先以水 200 mL 洗脱, 再分别用
0. 5% NaOH 溶液和 0. 5% NaOH-20%乙醇溶液各
200 mL 洗脱,洗脱液用稀盐酸中和, TLC 检识, 均
未发现明显的苦玄参皂苷斑点。继续用水将树脂柱
洗至中性, 分别用 70%乙醇和 80%乙醇洗脱, 各收
集 8份,每份 100 mL, TLC法检识, 结果用 70%乙
醇洗脱 8 BV 能将苦玄参总皂苷完全洗脱, 而用
80%乙醇只需 4 BV。因此,选用 80%乙醇为洗脱溶
媒,用量为 4 BV。
2. 4　苦玄参总皂苷供试品的制备:取苦玄参药液 2
份,每份 122 L, 分别过 15 L 的大孔树脂柱,一份依
次用 4 BV 水、4 BV 80%乙醇洗脱, 另一份依次以 4
BV 水、4 BV 20%乙醇、4 BV 80%乙醇洗脱, 分别
收集 80%乙醇洗脱液,回收乙醇,喷雾干燥,得苦玄
参总皂苷粗品É、Ê。
　　剩余苦玄参药液 128 L, 浓缩成浸膏, 喷雾干
燥,作为苦玄参水煎干浸膏。
2. 5　分光光度法测定苦玄参总皂苷
2. 5. 1　预处理方法和最大吸收波长的选择:取苦玄
参水煎干浸膏 4份,每份 0. 200 g,编号为 A～D。A
份加甲醇溶解, 滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇溶解, 定
量转移至 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度。B、C、D以
20%乙醇 10 mL溶解, 分别过 D101大孔吸附树脂, B
份依次以 100 mL 20%乙醇、100 mL 80%乙醇洗
脱, C份依次以 100 mL 0. 5% NaOH 溶液、水洗至
中性、100 mL 80%乙醇洗脱, D 份依次以 100 mL
0. 5% NaOH-20%乙醇溶液、水洗至中性、100 mL
80%乙醇洗脱。3份样品均收集 80%乙醇洗脱液, 蒸
干, 残渣加甲醇溶解, 分别定量转移至 10 mL 量瓶
中,加甲醇至刻度,作为供试品溶液。
　　将上述 4份供试品溶液与苦玄参苷ÉA 对照品
溶液于分光光度仪上 190～500 nm 进行扫描, 结
果, 供试品 A 和 B的曲线相似,在 200～400 nm 波
长, A 的吸光度明显大于 B; C的曲线稍高于 D, 二
者的最大吸收波长与苦玄参苷对照品ÉA的最大吸
收波长一致,均为 261 nm。因此,选用 261 nm作为
测定波长。为减少浪费,样品的预处理方法采用供试
品溶液C的处理方法。
2. 5. 2　线性关系的考察:称取苦玄参苷ÉA 对照品
22. 8 mg, 置 50 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 作为对
照品溶液。精密量取 0. 05, 0. 1, 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 75,
1. 0 mL 分别置 5 mL 量瓶中,加甲醇至刻度。以甲
·516· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 5 期 2004年 5月
醇为空白,在 261 nm波长处测定吸光度。以吸光度
为纵坐标,浓度为横坐标, 绘制标准曲线, 得回归方
程为:Y= 0. 013 1 X+ 0. 015 1, r= 0. 999 5,线性范
围: 4. 56～91. 2 Lg/ mL。
2. 5. 3　精密度试验:精密量取苦玄参苷ÉA对照品
溶液 0. 2 mL,加甲醇至 5 mL, 进样 5次, 测定吸光
度,计算得 RSD为 2. 4%。
2. 5. 4　稳定性试验:取苦玄参苷ÉA 对照品溶液和
供试品溶液,分别于 0, 2, 4, 6, 8 h测定吸光度。结果
表明,吸光度值的 RSD 分别为 1. 6%和 1. 8%。
2. 5. 5　回收率试验:取苦玄参药液 5份,每份 1. 2
mL, 除第 1份外, 分别加入苦玄参苷ÉA 对照品溶
液 4 mL,依含量测定方法预处理操作制成供试品溶
液,测定吸光度,对照工作曲线求出苦玄参总皂苷含
量。结果平均加样回收率为 96. 3% , RSD为 2. 3%。
2. 6　苦玄参总皂苷的测定:取苦玄参总皂苷粗品
É,Ê和水煎干浸膏各 0. 100 g,加 20%乙醇溶解,
分别过大孔树脂柱, 依次以 0. 5% NaOH 溶液、水、
80%乙醇各 200 mL 洗脱,收集 80%乙醇洗脱液,水
浴蒸干,加甲醇溶解,滤过, 置 100 mL 量瓶中, 加甲
醇至刻度,于 261 nm 处测定吸光度, 对照工作曲线
计算苦玄参总皂苷的含量, 结果见表 1。
　　由表 1可见, 经过大孔树脂纯化处理, 苦玄参干
浸膏中苦玄参总皂苷含量由 8. 7%提高到 27. 3%。
干浸膏得率由 18. 50%下降至 5. 65%, 说明大孔树
脂对苦玄参总皂苷纯化效果较好。如果在 80%乙醇
洗脱前,增加 20%乙醇洗脱操作以除去部分非皂苷
部分, 苦玄参总皂苷含量可进一步提高到 52. 1%,
从而为新药开发提供更多的选择。
表 1　苦玄参总皂苷的分析结果 (n= 3)
Table 1　Analysis r esult of tota l saponin
of P . f el- ter ra e (n= 3)
样品 质量/ g 得率/ % 苦玄参总皂苷/ % RSD/ %
水煎干浸膏 1 940 18. 50 8. 7 2. 5
粗品É 　565 5. 65 27. 3 3. 2
粗品Ê 　276 2. 76 52. 1 2. 3
3　讨论
　　测定树脂的吸附容量和研究洗脱条件时, 一般
测定指标成分的变化[ 4]。但本实验以苦玄参总皂苷
为指标,如果将各样品直接采用分光光度法测定, 干
扰较大;若精制后测定, 又比较繁琐, 所以选用简单
直观的TLC法。
　　采用较常用的高氯酸-香草醛-冰醋酸法[ 5]测定
苦玄参总皂苷含量,虽然该显色方法的吸光度值比
直接测定法高 1. 5倍左右, 但最大吸收波长偏差较
大( 553±5 nm)、供试品稳定性差(放置 1 h 后吸光
度下降了 12%)。故本实验直接测定。
Refer ences:
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灯盏花素骨架缓释微丸释药机制的研究
张彦青1 ,解军波1,陈大为2X
( 1. 天津商学院 制药工程系,天津　300134; 2. 沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳　110016)
　　灯盏花素是从灯盏花中提取的黄酮类有效部
位,主要为灯盏花乙素和灯盏花甲素的混合物, 其中
灯盏花乙素含量占95%以上。灯盏花素在治疗心脑
血管疾病方面具有独特的疗效。目前在临床上应用
的只有灯盏花素的片剂和注射液,存在诸多不便:片
剂服用次数多,生物利用度低;注射剂使用又受到一
定限制,不适于长期给药。本实验对挤出滚圆法制备
的骨架缓释微丸的药物释放动力学过程进行常用模
型拟合,并观察溶出前后微丸微观结构的改变,以探
讨其释药机制。
1　药品与仪器
灯盏花素缓释微丸[ 1] (自制) ; 乙基纤维素
·517·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 5 期 2004年 5月
X 收稿日期: 2003-07-03