全 文 ：·制剂与质量·
喂饲补阳还五汤的大鼠血清中阿魏酸的高效毛细管电泳分析
罗奇志 1,佟　丽 2,杨蒙蒙 2,刑学峰 2,马安德 1
( 1. 第一军医大学 中心实验室, 广东 广州　 510510; 2. 第一军医大学 中医系, 广东 广州　 510510)
摘　要: 目的　采用高效毛细管电泳法测定补阳还五汤及给药大鼠血清中阿魏酸的含量。 方法　以毛细管区带电
泳分离分析待测样品中的阿魏酸, 内标法定量,紫外检测,缓冲液为 25 mm o l/L硼砂 -甲醇 ( 85∶ 15), 未涂层融硅毛
细管 ( 52 cm× 50μm, 有效长度 30 cm ), 分离电压 20 kV,压力进样 3 s,检测波长 320 nm,温度 30℃。结果　在上述
条件下, 阿魏酸在 6 m in内得到很好的分离,血清中阿魏酸的加样回收率为 97. 20% , 补阳还五汤中阿魏酸的回收
率为 103. 28% , RSD分别为 3. 73%和 0. 91% (n= 3)。结论　该方法可为血清样品及复方制剂中阿魏酸的含量测定
提供参考。
关键词: 补阳还五汤;阿魏酸; 高效毛细管电泳
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 04 0388 03
H igh-performance capillary electrophores is m ethod for ferulic acid assay
in serum of rats treated w ith BuyangHuanwu Decoc tion
LUO Q i-zh i
1
, TONG L i
2
, YANG M eng-m eng
2
, X ING X ue-feng
2
, M A A n-de
1
( 1. C enter Labo ra to ry; 2. D epa r tm en t o f T rad itiona l C hineseM edicine, F ir st
M ilitary M edica lU n ive rsity, Guang zhou 510510, Ch ina)
Abstract: Object　T o develop a h igh-perfo rm ance cap illa ry e lect ropho resis m ethod to determ ine fer-
u lic acid con cen tra t ions in se rum o f rats trea ted w ith Buyang H uanw u Decoct ion (BHD ). M ethods　C ap il-
lary zone e lect ropho resisw as applied fo r feru lic acid assay, quan t itat ive determ inat ion w as based on in ter-
na l standard and detect ion w as car ried on by d irect UV. T he e lectro ly te bu f fer w as com posed o f 25mm o l /
L bo rax-m e thano l ( 85∶ 15). C ap illa ry e lec tropho resis w as per fo rm ed u sing a 52 cm ( 30 cm to de tec to r)×
50μm fused-silica cap illa ry tube. S epara tion vo ltage w as 20 kV, sam p ling t im e w as 3 s, de tect ion w ave-
leng th w as 320 nm, and the tempe ra tu re w as 30℃. Results　Feru lic acid w as successfu lly separa ted w ith-
in 6m in, the recover ies w ere 97. 2% in se rum and 103. 28% in BHD, respect ive ly. RSD w ere 3. 73% and
0. 91% (n= 3), respect ive ly. Conclusion　T h is m e thod can supp ly re ference fo r the de term inat ion o f fer-
u lic acid in se rum sam p les and BHD.
Keywords: Buyang H uanw u Decoct ion (BHD ); feru lic acid; h igh-per fo rm ance cap illary e lect ropho re-
sis (HPCE )
　　补阳还五汤为清代名医王清任创制的名方,对
治疗中风、中风后遗症等气虚血瘀症疗效显著。该方
由黄芪 120 g、川芎 3 g、当归 6 g、赤芍 6 g、桃仁 3 g、
红花 3 g、地龙 3 g组成, 其中阿魏酸为川芎、当归药
材的主要有效成分,有抑制血小板聚集,降低血小板
活性和改善微循环等作用。 阿魏酸含量测定常用薄
层色谱 [1 ]、高效液相色谱 [2 ]等方法。但该复方中成分
复杂,阿魏酸含量较低,因此本实验采用高效毛细管
电泳法分离测定该复方及给药大鼠血清中阿魏酸的
含量, 为生物样品及复方制剂中阿魏酸的含量测定
提供参考。
1　仪器与试剂
270A— HT 型高效毛细管电泳仪 (美国 A p-
plied B io sy stem s公司 ), 毛细管: 未涂层融硅毛细管
( 52 cm× 50μm, 有效长度 30 cm,河北永年锐沣色
谱器件有限公司 ), HW— 2000色谱工作站数据处理
系统 (南京千谱软件有限公司 ); M illipo re— Q 纯水
器。
甲醇色谱纯, 乙醇、硼砂均为国产分析纯; 葛根
素 (批号: 753-200007)、阿魏酸 (批号: 0773-9910)对
·388· 中草药　Ch ine se T raditiona l and H erba l D rug s　第 35卷第 4期 2004年 4月
收稿日期: 2003-07-06基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 39970900);广东省中医药管理局基金资助项目 ( 100006)作者简介:罗奇志 ( 1976— ),女,湖南新化人,助教,药学硕士,主要从事药物分析研究。
T e l: ( 020) 61648172　 Fax: ( 020) 61648173　E-m ail: qiq i1377@ sina. com
照品均购于中国药品生物制品检定所。黄芪、川芎、
当归、赤芍、桃仁、红花、地龙药材均购自广东省药材
公司,经本校中药鉴定教研室刘传明讲师鉴定, 分别
为豆科植物蒙古黄芪 A straga lus m em branaceus
(F isch. ) Bge. va r. mongholicus (Bge. ) H siao干燥
根茎、伞形科植物川芎 L ig usticum chuanx iong
Hor t. 干燥根茎、伞形科植物当归 A ngelica sinensis
D iels干燥根茎、毛茛科植物川赤芍 P aeonia v ei tch ii
Lynch干燥根茎、蔷薇科植物山桃 P runus dav id i-
ana ( C arr. ) F ranch. 成熟种子、菊科植物红花
Car tham us tinctor ius L. 干燥花、钜蚓科动物参环毛
蚓 Pheretima asp erg i llum ( E. Pe rrie r )干 燥全
虫体。
　　SD大鼠, 10只,雌雄各半,体重 250～ 280 g,由
第一军医大学实验动物中心提供。
2　方法与结果
2. 1　供试品溶液的制备 [3, 4 ]: 按处方配比取补阳还
五汤各味药饮片,常规煎煮,浓缩至含生药 3 g /mL。
取浓缩液加 30%乙醇超声提取 2次, 每次 15m in,
离心, 上清液加入内标葛根素, 定容后 0. 45μm 微
孔滤膜滤过,即得补阳还五汤供试品溶液。大鼠按临
床等效量 (组Ⅰ )及 2倍等效量 (组Ⅱ ) ig给药 (空白
组 ig生理盐水 ), 2次 /d, 连续 3 d,于末次给药 1 h
后, 无菌条件下,腹主动脉取血,离心分离后大鼠血
清于 56℃水浴中灭活, 0. 45μm 微孔滤膜滤过除
菌, 即得血清供试品溶液。 分装, - 20℃冰箱保存
备用。
精密量取空白及给药血清各 1m L,加入内标物
葛根素,用乙腈共 5m L涡旋混合 10m in提取 2次,
3 000 r /m in离心 5m in, 合并两次的上清液, 室温
N 2吹干,残渣以甲醇溶解, 0. 45μm微孔滤膜滤过,
备用。
2. 2　电泳条件 [5 ]: 缓冲液: 25mm o l /L硼酸-甲醇
( 85∶ 15), 分离电压 20 kV, 进样 3 s, 检测波长 320
nm,温度 30℃。在所选条件下, 血清和补阳还五汤
中阿魏酸实现了基线分离,空白血清没有干扰峰。色
谱图见图 1。
2. 3　标准曲线
1-葛根素　 2-阿魏酸
1-pu erar in　 2-feru l ic acid
图 1　补阳还五汤 (A )、给药血清 (B )和空白血清 (C)的毛细管电泳图谱
F ig. 1　HPCE chrom atogram s of BHD (A), serum w ith BHD (B), and b lank serum (C)
2. 3. 1　体外工作曲线: 精密称取阿魏酸对照品
0. 166 7m g置 10mL量瓶中,用甲醇溶解并加至刻
度,制得储备液; 精确量取该液 0. 6, 1, 2, 4, 6, 8m L
于 10m L量瓶中,加入内标葛根素, 甲醇定容, 依次
进样,以内标浓度为 1计,测得阿魏酸峰面积与内标
葛根素峰面积之比 (A )。以阿魏酸与内标浓度 (计为
1)之比 (C )对 A 进行线性回归, 得回归方程 C=
0. 017 9+ 0. 228 7 A , r= 0. 999 5,线性范围: 1. 00～
10. 00μg /mL。
2. 3. 2　体内工作曲线:依次精确量取阿魏酸储备液
于空白血清中, 加入内标,按 2. 1项下方法处理,配
成 1. 00～ 10. 00μg /m L系列浓度, 依次进样, 以内
标浓度为 1计,测得阿魏酸峰面积与内标葛根素峰
面积比 (A )。以阿魏酸与内标浓度之比 (C )对 A 进
行线性回归, 得回归方程 C= 0. 019 3+ 0. 226 1 A,
r= 0. 999 1。
2. 4　精密度试验:取同一供试品溶液,连续测定 5
次,得各自的峰面积,求出阿魏酸峰面积与内标峰面
积之比, 其 RSD为 1. 65% , 迁移时间的 RSD 为
1. 08%。将同一供试品溶液连续测定 3 d,求得阿魏
酸峰面积与内标峰面积之比的 RSD为 3. 25% , 迁
移时间的 RSD为 2. 23%。
2. 5　稳定性试验: 取同一供试品溶液, 在 1 d内 3
个不同时间进样, 测得阿魏酸与内标物的峰面积比
的 RSD为 2. 15% 。表明在 1 d内供试品溶液稳定。
2. 6　回收率试验:取已测含量补阳还五汤及血清样
品各 3份,分别加入适量的阿魏酸对照品,用选定的
电泳条件测定并计算。结果补阳还五汤及血清样品
的平均回收率分别为 103. 28%和 97. 20% , RSD分
别为 0. 91%和 3. 73% (n= 3)。 结果见表 1。
·389·中草药　Ch ine se T raditiona l and H erba l D rug s　第 35卷第 4期 2004年 4月
　　　表 1　样品中阿魏酸的回收率测定结果 (n= 3)
Tab le 1　R ecover ies of f eru lic ac id in samp le s (n= 3)
样　品 加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /% RSD /%
补阳还五汤 1. 000 1. 024 9 103. 28 0. 91
1. 043 1
1. 030 3
血　清 0. 440 0. 426 8 97. 20 3. 73
0. 444 0
0. 412 2
2. 7　样品的测定: 供试品溶液平行 3份, 每份测 3
次。将峰面积与内标物峰面积之比代入各自标准曲
线方程,求得各自的浓度,测定结果见表 2。
表 2　样品中阿魏酸的含量测定结果 (n= 3)
Tab le 2　Contents of feru lic ac id in samp les ( n= 3)
　样　品 阿魏酸浓度 /(μg· mL- 1 ) RSD /%
组Ⅰ 血清 0. 306 8 2. 42
组Ⅱ血清 0. 636 3 2. 37
补阳还五汤 4. 754 0 2. 91
3　讨论
　　补阳还五汤由 7味药组成, 成分复杂, 而其中含
阿魏酸的川芎、当归药材用量较少,因此给该复方,
特别是 ig给药大鼠血清中阿魏酸的含量测定带来
一定困难, 高效毛细管电泳法作为一种新型的分离
分析技术,分离效率高,对于多成分的复杂样品的分
离具有独特优势, 而且其样品处理简单, 分离时间
短,在中药复方研究中将有广泛的应用前景。
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青藤碱缓释片释放度影响因素的研究
任福正 1,景秋芳 1,孙淑英 2,沈永嘉 1
( 1. 华东理工大学化学与制药学院, 上海　 200237; 2. 沈阳药科大学药学院, 辽宁 沈阳　 110016)
摘　要: 目的　考察各处方和工艺因素对以羟丙基甲基纤维素 (HPM C )为骨架材料的青藤碱缓释片中药物释放的
影响。 方法　采用不同黏度级 (K 4M , K 15M 和 K 100M )和不同用量 HPM C及不同的制备工艺制备青藤碱缓释片。
结果　不同黏度级的 H PM C在用量为 30%时对青藤碱的释放度影响不大; 当 H PM C 的用量小于 30%时, 随着
HPM C用量增大,释放速度减慢, 但 H PM C的用量大于 30%时释放速度变化不明显; 当青藤碱和 HPM C的比例为
1∶ 1. 5时, 片重从 280 m g增大到 360 m g, 青藤碱释放速度减慢; HPM C粒度及片剂的硬度对青藤碱的释放速度影
响较小。 结论　制备青藤碱缓释片应考虑选择合适的片重及 H PM C的用量。
关键词: 青藤碱;羟丙基甲基纤维素; 缓释片;释放度
中图分类号: R283. 3; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 04 0390 04
Influence factors on sinom enine releas ing rate from Sinom en ine Sustained-release Tablet
REN Fu-zheng1, JING Q iu-fang1, SUN Shu-y ing2, SHEN Y ong-jia1
( 1. S choo l o f C hem istry and Pha rm acy, E ast Ch in aU n ive rsity o f Science and T echno log y, Sh angha i 200237, Ch ina;
2. S choo l o f Ph arm acy, Shenyang Pharm aceu tica l U n iv er sity, Shenyang 110016, C h ina)
Abstract: Object　 T o study the p reparat ion and techno logy on sinom enine ( SM ) re lea se f rom
S inom enine Susta ined-release T ab lets (SST s) in w h ich hyd roxyp ropy lm ethy l ce llu lose (HPM C ) w as used
as the pr im a ry excipien ts. Methods　 SST s w ere p repared w ith d if feren tHPM C v isco sity o fK 4M, K 15M ,
and K 100M , d ifferen t HPM C con ten t, and p reparing techno logy. Results　L it t le ef fec t w as ob serv ed on
the re leasing rate o f SM w ith d if feren tH PM C v isco sity w hen the con ten t o f HPM C w as 30% . SM re lea s-
ing ra te increa sed w ith the decreasing o f p ropo rt ion o f HPM C w h ile the con ten t o f HPM C w as less than
·390· 中草药　Ch ine se T raditiona l and H erba l D rug s　第 35卷第 4期 2004年 4月
收稿日期: 2003-06-04作者简介:任福正,男,讲师,主要从事新剂型研究。 T el: ( 021) 64252241　E-m ail: ren fz@ yah oo. com