全 文 ：·1520· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月
s。80和H。：小鼠肿瘤细胞均可使DNA和RNA荧光
强度较生理盐水组有不同程度的降低。说明药物已
经与肿瘤细胞DNA和RNA产生了不同程度的结
合，抑制了AO与DNA和RNA的结合，导致AO
与核酸结合的复合物荧光强度有不同程度的降低；
甘草黄酮低剂量组对RNA／13NA无影响(P>
0．05)；甘草黄酮中剂量组的RNA／DNA值较生理
盐水组明显升高，可能是DNA损伤严重，合成量减
少，而RNA合成抑制程度较轻，DNA减少的程度
超过RNA；甘草黄酮高剂量组RNA／DNA值较生
理盐水组无显著差异，分析原因可能是随剂量增加
RNA损伤加重，致使RNA／DNA值与生理盐水组
接近。提示药物作用后可能是肿瘤细胞DNA先受
损，随后RNA由于没有模板合成才开始下降。环磷
酰胺组DNA和RNA荧光强度较生理盐水组降
低；RNA／DNA值较生理盐水组显著升高。有研究
报道环磷酰胺对体外淋巴细胞AO—DNA荧光抑制
率很低‘9j。结合起来看这与环磷酰胺的作用机制是
非常吻合的。环磷酰胺原无烷化活性，需在体内经代
谢成有活性的磷酰胺氮芥后发挥烷化作用。磷酰胺
氮芥性质活泼，能与DNA发生交叉联结，抑制
DNA合成+干扰DNA和RNA功能。从丽达到很
好的抗肿瘤作用。综上所述，甘草黄酮可明显抑制
S。。。和H”荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA复制与
合成，这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。
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轮叶婆婆纳中二萜类化学成分的体外抗癌活性研究
张富赓1，胡人杰2，张韶瑜3，张彦文3，高文远1，段宏采”
(1．天津大学药物科学与技术学院，天津300072·2．天津医药科学研究所．天津300070
3，天津医科大学药学院，天津300070)
摘要：目的研究轮叶婆婆纳Veronicasibirica中二萜类成分的体外抗癌作用。方法以TJ905和HeLa细胞为
研究对象，采用MTT{去对获得的化合物进行抗癌括性初筛并对初筛活性高的化合物进行剂量依赖性实验，测定
其Ic*值。结果对轮叶婆婆纳石油醚及醋酸乙酯提取物中的7个二萜共化台物：二氢丹参酮I(I)、丹参酮I
(I)、丹参酮ⅡA(Ⅱ)，隐丹参酮(IV)、婆婆纳对醌A(V)、婆婆纳对醌B(Ⅵ)、弥罗松酚(Ⅶ)进行了体外抗肿瘤活性
考察，表明化合物1和IX／具有显著的抗癌活性．化合物I对TJ905及Hel。a细胞生长的1cs。值分别为3．038、1．816
／tg／mL。化合物IV对TJ905及HeLa细胞生长的Ic5。值分别为3，637、4．391,ug／mL。结论轮叶婆婆纳中的二氢
丹参酮【和隐丹参酮对TJ905及HeLa细胞具有较强的生长抑制括性。
关麓词t轮叶婆婆纳；二萜类化合物}抗癌活性
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章缡号：0253—2670(2005)10—1520—04
鉴銎是智：癸嚣盖并吴学科研基金资助
*通讯作者段宏泉Tel：(022)23542838Fax：(028)23528891E—mail{duanhq@tijmu．educa
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月， 521·
AnticanceractivityofditerpenesfromVeronicasibiricainvitro
ZHANGFu—gen91，HURen一且e2，ZHANGShao—yu3，ZHANGYan—wall3，
GAoWen—yuanl，DUANHong—quan3
(1-CollegeofPharmaceuticalsaadB[otechno[ogy，TianiiaUniversity，Tianiin300072+Chinal2．Institute
ofMedicalandPharmaceuticalSciences。Tianjin300070，Chinal3．Col egeofPharmacy．
|IlaniinMedieaIUniversity，Tianjin300070．China)
Keywords：仉；YOnicasibi，wdL．{diterpenes；anticanceractivity
轮叶婆婆纳VeronicasibiricaI，．为玄参科婆婆
纳属植物，又名草本威灵仙，主要分布于东北、华北、
陕西北部、新疆西北部、甘肃东部、山东等省区，具有
祛风除湿、清热解毒的功效，主要用于治疗感冒风
热、咽喉肿痛、腮腺炎、风湿痹痛、虫蛇所伤⋯。文献
报道轮叶婆婆纳的乙醇提取物具有较强的抗炎、镇
痛作用，并从中分离出异阿魏酸、3一。一乙酰齐墩果
酸、3，4-二甲氧基桂皮酸、胡萝h苷、p谷甾醇、甘露
醇等6个化合物o]，其他化学成分及药理作用研究
均未见报道。
本课题组在轮叶婆婆纳的化学成分研究中分离
了7个二萜类化合物：二氢丹参酮I(1)、丹参酮I
(Ⅱ)、丹参酮Ⅱn(Ⅲ)、隐丹参酮(Ⅳ)、婆婆纳对醌A
(sibiriquinoneA，V)、婆婆纳对醌B(sibiriquinone
B，Ⅵ)、弥罗松酚(Ⅶ)，其中化合物V和Ⅵ为新化合
物”]。本实验对轮叶婆婆纳的石油醚、醋酸乙酯和正
丁醇提取物及7个二萜类化合物进行抗癌活性研
究，结果表明提取物和化学单体均有不同程度的抗
癌生物活性，其中以化合物I和Ⅳ作用最强，进而对
其进行了剂量依赖性实验研究。
l材料
芬兰LABSYSTEMSMultiskanMS酶标仪；
美国REVCOO。培养箱。胎牛血清为Hyclone公
司产品；RPMI一1640为Gibco公司产品；MTT和
DMSO为Sigma公司产品i其余试剂均为分析纯。
轮叶婆婆纳于2001年9月采自中国东北，经佳木斯
医学院王良信教授鉴定为玄参科婆婆纳属植物轮叶
婆婆纳V．sibitqcaL．Pennell，标本存放于天津医
科大学药学院。7rJ905和HeLa细胞均由天津医药
科学研究所提供。
2方法与结果
2．】 提取与分离：将轮叶婆婆纳药材2kg粉碎，
95％乙醇50c温浸提取，减压回收溶剂，得浸膏
0．5kg。依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇进行萃
取i将各部分萃取物减压浓缩后，得浸膏分别为：石
油醚部分24．3g、醋酸乙酯部分48．2g、正丁醇部
分150．9g。将石油醚和醋酸乙酷提取物反复经过
硅胶柱色谱分离，最后以反相制备HPLC分离纯
化，得化合物I～Ⅶ(质量分数均>95％)。
2．2体外抗癌活性实验：
2．2．1石油醚、醋酸己酯、正丁醇萃取物的体外抗
癌活性：取对数生长期的TJ905或Hel．a细胞，用
含10％胎牛血清的RPMI1640培养液稀释成5x
104mL单细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔
180pI．，于37C、5％CO：条件下培养24h后，加入
不同质量浓度样品液20pL，样品用DMSO溶解
(DMsO≤0．05％，实验证实该浓度对细胞生长无影
响)后，配制成终质量浓度为400、200、100pg／mI。
溶液，每个质量浓度平行4孔，对照组加入等体积
的RPMI一1640培养液。培养72h后，小心吸去上清
液，每孔加入以无血清培养液新鲜配制的lmg／mI．
MTT，37C温育4h，弃去MTT，每孔加入150pL
DMSO，于酶标仪570llm处测吸光度(A)值，并计
算细胞增殖抑制率，结果见表1。
细胞增殖抑制率一[】一(^mg／A”M)]×100％
裹1轮叶婆婆纳萃职物对TJ905和HeLa
细胞生长的抑制作用(j士j，n一4)
Table1 InhibitionofV．sibiricaextracts011TJ90$
andHeLacellgrowthh土s，n一4)
结果显示轮叶婆婆纳的各萃取部位均有较强的
抑制癌细胞生长作用，其对于Hel。a细胞作用相似，
但对TJ905细胞，以石油醚萃取物和醋酸乙酯萃取
物抑制作用较强。
2，2。2化合物的体外抗癌活性：应用MTT法对从
石油醚萃取物和醋酸乙酯萃取物分离获得的7个化
台物进行体外抗癌活性初筛，药品用DMsO溶解
万方数据
·1522· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月
(DMSO≤0．01％)后，配制成终浓度为30和10
btg／mL溶液，作用于TJ905细胞，每个质量浓度平
行4iL，其余操作方法同2．2．1项。结果见表2。结
果表明，化合物I和Ⅳ对TJ905细胞生长的抑制作
用较强。根据美国NCI推荐的细胞增殖抑制率为
50％时，药物质量浓度在10pg／mL以下值得迸一
步研究的原则，对化合物I和Ⅳ进一步进行荆量依
赖性实验。
2．2．3化台物I和Ⅳ体外抗癌活性剂量依赖性实
验；应用MTT法进行体外抗癌活性荆量依赖性实
验，给药剂量为终质量浓度30、20、10、5、2．5、1．25、
0．625Vfi／mI，，每个质量浓度平行6孔，测定A值。
重复3次。计算细胞增殖抑制率及Ic。。。结果见表
3。结果显示，化合物I和Ⅳ对TJ905和HeLa细胞
具有较强的细胞杀伤作用，与对照组比较，两化合物
(2．5vg／mL以上的药物质量浓度)均显示出显著
裹2化合物l、Ⅶ对TJ905细胞生长
的抑捌作用(i±s．n一4)
Table2 Inhibitionofc mpoundsI一ⅦOHTJ90$
cellgrowth(j土s，#一4)
化台物p／(pg·mL1)抑制率／蹦 化台物P／fpg-mL1)抑制串／蹦
j 30 99．S5士0．44V 30 {3．08士4．84
10 93．59土2．03 10 12．34±5．13
l 30 3216±244 Ⅵ 30 19 50士4．55
iO 2699士6．孙 10 1089士217
l 3D 472S士2∞ Ⅶ 30 81．77士“54
10 31．74士524 j0 】8．70士5．49
Ⅳ 30 92．98土l07
10 59．53士3．58
Ⅳ的药物质量浓度及所对应的抑制率，推算出化合
物I对TJ905和HeI。a细胞的Ic。。值分别为
1．038、1．816／tg／mL，化合物Ⅳ对TJ905和Hel。a
细胞的1Cso值分别为3．637、4．391vg／mI。。
衰3不问质量浓度的化台鞠I和Ⅳ对TJ905和HeLa细胞生长的抑耕作用(；±，．n一6)
Table3 InhibitionoFc mpounds1 andwatdifferentco een*ratlonsonT$905andHeLacellgrowth(j士s，n=6)
与对照组比较：‘P<0．05一j’<0t0I ⋯P<0001
。P<0·05。’P
应用TJ905和HeLa细胞株对轮叶婆婆纳石
油醚、醋酸乙酯、正丁醇提取物的体外抗癌活性初筛
结果显示，3部分均有明显的体外抗癌细胞生长的
活性。进一步实验表明从石油醚和醋酸乙酯萃取物
中分离得到的二氢丹参酮I(I)和隐丹参酮(Ⅳ)两
个丹参酮类化合物具有很强的体外抗癌活性。对于
丹参酮类化合物的抗癌作用，大量研究集中于丹参
酮Ⅱnn“]，Mosaddik口1的体外试验研究表明，与丹
参酮I和丹参酮Ⅱn相比．二氢丹参酮1和隐丹参
酮对P388淋巴细胞白血病细胞具有微弱的细胞毒
活性，药物质量浓度为25pg／mI。所产生的抑制率
仅为13．7l％和39．21％，并认为这类二萜类化合
物不饱和的c一15位以及饱和的A环是产生细胞杀
伤作用的重要结构。但亦有研究表明，二氢丹参酮I
对人肝癌细胞株(QGY一7703)和人肺腺癌细胞株
(SPC—A—1)有较强的细胞毒作用，半数致死剂量
LD50分别为8．86和7．736btmol,／L，且其与x射线
联合作用能增强细胞对射线的敏感性o]。本实验结
果表明化合物I和I【f对TJ905和HeLa细胞具有
强大的杀伤作用，与不加药物仅加等体积RPMI，
1640培养液的对照组比较，两化合物2．5vg／mI，
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年lo月
以上的药物质量浓度均显示出显著的差异(P<
0．001)；化合物t对TJ905和HeI，a细胞的Ic。。值
分别为1．038和1．816／19／mI．，化合物Ⅳ对TJ905
和Hel，a细胞的ICs。值分别为3．637和4．391g／
mL，而丹参酮I(Ⅱ)和丹参酮Ⅱ。(m)的初筛结果
显示其对于TJ905缅胞的杀伤作用并不明显，说明
丹参酮类化合物对于癌细胞的体外杀伤作用具有
选择性，其抗癌作用机制和构效关系值得进一步
研究。
此外，本实验研究从化合物单体水平证明药用
植物轮叶婆婆纳具有抗癌活性，从而为进一步对此
植物的开发利用奠定了一定的理论基础。
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oc一环丙氨酸对缺血性脑神经损伤的保护作用
赵铮蓉，朱沁未，朱旭祥
(浙江省医学科学院，浙江杭州310013)
摘要：目的研究中药有效成分a一环丙氨酸(1一aminocyclopropaneearboxylicacid，ACPC)对缺血性脑神经损伤
的保护作用。方{蠹采用二乙酸荧光索(FDA)和Hoechst33258DNA染色法．观察大鼠4、脑颗粒神经元存括率及
形态学特征，用琼脂糖凝胶电泳分析神经元凋亡的生化特征；采用小鼠断颅法和小鼠局灶性胺缺盘法，观察ACPC
对小鼠喘息时间和脑梗死体积的影响。结果在细胞水平上，ACPC(o．5、1mmol／L)使小脑颗粒神经元的存活率
明显提高；使200／trnol／L谷氨酸(Glu)引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失,Glu使神经元的DNA电泳图谱
出现明显的“梯形”条带，ACPC使此现象消失。在组织水平上．ACPC(200、400mg／kg)明显减小小鼠脑梗死体积．
在整体水平上．ACPC(100、200、400mg／kg)显著延长小鼠断颅后的喘息时间。结论ACPC对缺血性脑神经损伤
具有显著保护作用。
关键词心环丙氨酸(ACPC)；小脑颗粒神经元；谷氨酸
中圈分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)10—1523—05
Protectionof1_aminocyclopropanecarboxylicacidagainst
brainneurologicalimp irmentinducedbyisehemia
ZHAOZheng—rong，ZHUQin—wei，ZHUXu—xiang
(ZhejiangAcademyofMedicaiSc ences，Hangzhou310013，China)
Keywords：1一aminocyclopropanecarboxylicacid(ACPC)；cerebellargranulen urons；glutamate
研究表明谷氨酸(Glu)是脑内主要的兴奋性
神经递质，介导绝大多数兴奋性突触的正常活动，参
与可塑性的发生机制，是一种内源性神经毒性物质。
Glu介导的神经元兴奋性毒性死亡与许多神经系统
收稿日期：2005—02—23
疾病的发生、发展有着密切的关系Ⅲ。在正常生理情
况下，Glu主要储存在神经元末梢突触囊内，细胞外
Glu水平很低(o．6mol／L)。当神经束梢受到刺激
时，Glu才从突触囊内释放至突触间隙内，但很快又
万方数据
轮叶婆婆纳中二萜类化学成分的体外抗癌活性研究
作者： 张富赓， 胡人杰， 张韶瑜， 张彦文， 高文远， 段宏泉， ZHANG Fu-geng， HU Ren-jie
， ZHANG Shao-yu， ZHANG Yan-wen， GAO Wen-yuan， DUAN Hong-quan
作者单位： 张富赓,高文远,ZHANG Fu-geng,GAO Wen-yuan(天津大学药物科学与技术学院,天津,300072)
， 胡人杰,HU Ren-jie(天津医药科学研究所,天津,300070)， 张韶瑜,张彦文,段宏泉
,ZHANG Shao-yu,ZHANG Yan-wen,DUAN Hong-quan(天津医科大学药学院,天津,300070)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(10)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200510033.aspx