全 文 ：正交试验表进行试验 ,分别提取 (提取时间为每次 1
h ) ,提取液按含量测定方法制备样品 ,测定麦冬皂
苷 D的含量 ,结果见表 3, 4, 5。
表 3　因素水平表
水平 因　　素
A加溶剂量 (倍 ) B药材粒度 C提取次数 (次 )
1 10 10～ 24目 1
2 8 5～ 10目 2
3 6 压扁整粒 3
表 4　麦冬皂苷提取正交试验表
试验号 A B C D(误差 ) 麦冬皂苷 D
(μg /20μL)
1 1 1 1 1 3. 803 4
2 1 2 2 2 4. 498 8
3 1 3 3 3 4. 093 9
4 2 1 2 3 3. 919 6
5 2 2 3 1 5. 169 6
6 2 3 1 2 3. 194 1
7 3 1 3 2 4. 535 8
8 3 2 1 3 3. 738 6
9 3 3 2 1 3. 101 8
Ⅰ 12. 396 1 12. 258 8 10. 736 1 12. 074 8 C T= 144. 445 1
Ⅱ 12. 283 3 13. 407 0 11. 520 2 12. 228 7
Ⅲ 11. 376 2 10. 389 8 13. 799 3 11. 752 1
R 0. 340 0 1. 005 7 1. 021 1 0. 158 9
表 5　方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 0. 208 5 2 0. 104 3 5. 283 7
B 1. 546 1 2 0. 773 1 39. 164 1 P < 0. 05
C 1. 688 1 2 0. 844 1 42. 760 9 P < 0. 05
D(误差 ) 0. 039 5 2 0. 019 7
　　F 0. 05 ( 2, 2)= 19　F 0. 01 ( 2, 2)= 99
　　从正交试验优选结果可见: 影响麦冬皂苷提取的
因素为提取次数> 药材粒度> 所用溶媒量 ,其中提取
次数、药材粒度对麦冬皂苷的提取有显著影响。最佳提
取条件为 A3B2 C3 ,即用 5～ 10目药材 ,加 10倍量溶
媒 ,提取 3次 ,每次 1 h ,基本能提尽麦冬皂苷 D。
4　讨论
目前麦冬皂苷单体的含量测定方法有 HPLC-
UV法、薄层扫描法、等吸收双波长消去法等 ,也有
水解后测定皂苷元含量的方法 ,但水解法操作繁琐 ,
且无法避免因水解不完全而引入的误差。由于麦冬
皂苷在紫外区的吸收弱 ,仅在 208 nm处有末端吸
收 ,用 HPLC-UV法检测 ,也有一定难度。
ELSD是一种通用型检测器 ,流动相雾化后在
加热管中蒸发 ,而流动相中的被检测物形成细小的
颗粒 ,颗粒通过一狭窄检测光束时形成散射光 ,由光
电倍增管收集放大 ,转换成电信号。 ELSD对不挥发
性的被检测物均产生响应 ,因而适用范围较广 [1, 2 ]。
本实验采用 HPLC-ELSD法测定麦冬皂苷 D取得
了较好效果。该法对麦冬药材及制剂的含量测定有
一定应用价值。
实验中 5～ 10目药材提取量比 10～ 24目药材
多 ,原因可能是:药材粒度小 ,表面积大 ,药渣吸附量
增加 ,此外 ,提取时细小的麦冬药材颗粒中有粘性物
渗出 ,相互间易粘结 ,对充分提取可能有影响。验证
试验证实 ,按以上条件提取 ,药材中的麦冬皂苷可被
基本提取完全。
致谢:麦冬皂苷 D对照品为日本昭和大学药学
院生药及天然药化研究室伊田喜光教授提供。
参考文献:
[1 ]　魏　泱 ,丁明玉 . 蒸发光散射检测技术 [ J ] . 色谱 , 2000, 18
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测器检测性能基本因素的考察 [ J] . 药物分析杂志 , 1996, 16
( 6): 414-417.
HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量
孙远明 ,余红英* ,杨跃生* * ,杨金易 ,张　明
(华南农业大学食品科学学院 ,广东 广州　 510642)
摘　要: 目的　考察蛇足石杉不同产地、不同部位中石杉碱甲 ( Hup A)和总碱含量 ;比较不同提取方法对石杉碱甲
含量的影响。方法　采用 RP-HPLC法测定 Hup A的含量。结果　 Hup A在根、茎、叶中的含量为茎、叶> 根 ;贵州、
广东和安徽产地的 Hup A含量分别为 0. 018% , 0. 021% , 0. 020% ,提取方法之间差异不显著。 结论　 Hup A含量
在蛇足石杉中的分布为地上部分大于地下部分。不同产地 Hup A含量有一定差异。
关键词: 蛇足石杉 ;石杉碱甲 ;石杉总碱 ;高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 12 1078 03
·1078· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
收稿日期: 2002-04-17
* 现在广东工业大学轻工化工学院　* * 本校生命科学学院
Determination of hupzine A inHuperz ia serrata by HPLC
SUN Yuan-ming, YU Hong-ying, Y AN G Yue-sheng , Y ANG Jin-yi, ZHANG Ming
( Co lleg e of Food Science, South China Ag riculture Univ er sity , Guang zhou 510642, China )
Abstract: Object　 To compare the hupzine A ( Hup A) in Huperz ia serrata ( Thunb. ) Trev . obtained
by dif ferent ex t racting methods and investiga te the amount of alkaloids and the content of Hup A from dif-
ferent parts of the plants and from di fferent places. Methods　 Using HPLC for the determination of Hup
A. Results　 The content of Hup A in the stem and leaf is richer than tha t in the ro ot. The content o f Hup
A from Guizhou, Guangdong and Anhui Prov inces is 0. 018% , 0. 021% and 0. 020% repectiv ely; The dif-
ference of ex tract method o f Hup A is no prominence. Conclusion　 The content of Hup A in the g round is
richer than that of underg round, and there are some dif ference in the content of Hup A obtained from dif-
ferent places.
Key words: Huperzia serrata ( Thunb. ) Trev. ; hupzine A ( Hup A) ; total alkloids; HPLC
　　蛇足石杉 Huperzia serrata ( Thunb. ) Trev .为
蕨类植物 ,又名千层塔、蛇足草。 《中药大辞典》记载
其具有消瘀 ,止血 ,清热解毒的功能。 近年发现其酚
性部位生物碱石杉碱甲 ( Hup A)具很强的抗胆碱酯
酶作用 ,其乙酰胆碱酯酶的抑制活性为毒扁豆碱的
3倍 ,临床证实石杉碱甲片对治疗重症肌无力 [ 1]和
早老性痴呆病 ( Arzheimo r)有显著疗效 [2 ] ,已通过卫
生部审批上市。蛇足石杉生长缓慢 ,繁殖困难 ,为了
科学地利用蛇足石杉资源 ,本实验对蛇足石杉总碱
的提取工艺进行比较 ,并采用 HPLC法测定了蛇足
石杉全草及其根、茎、叶中的 Hup A含量。
1　仪器与试药
　　 TSP4000系列高效液相色谱仪 ( Thremoquest
Co. ) , UV 6000紫外检测器。
　　甲醇、乙腈为色谱级 ,水为双蒸水 ,其余试剂均
为分析纯。 Hup A对照品由浙江温岭制药厂提供。
贵州产蛇足石杉样品由浙江温岭制药厂提供 ,广东
产样品由作者于 2000年 5月采自广东南昆山自然保
护区 ,华南农业大学李秉滔教授鉴定为蛇足石杉。安徽
样品由中国科技大学鲁润龙教授提供。将鲜样分成根、
茎、叶部分于 50℃烘干粉碎后过 40目筛备用。
2　方法及结果
2. 1　色谱条件: C18柱 ( 5μm, 250 mm× 4. 6 mm ) ,
流速: 1 mL /min,进样量 10μL,流动相: 乙腈 -
KH2 PO4溶液 ( 12∶ 88) ,检测波长 310 nm。
2. 2　线性关系考察:精取 Hup A对照品 10 mg ,以
无水乙醇配制成 1 mg /mL的贮备液 ,再稀释成 5,
10, 15, 20, 25μg /mL溶液 ,以进样量为横坐标 ,峰
高为纵坐标 ,进行线性回归 ,得标准曲线: Y=
98 135. 5X+ 28 111. 78, r= 0. 995 4。 Hup A在 5～
25μg /mL呈良好线性关系。
2. 3　精密度考察:精密称取 Hup A供试溶液 ,重复
进样 5次 ,峰面积的 RSD为 0. 32%。
2. 4　稳定性考察:广东样品供试品溶液放置 2, 4,
8, 16, 24 h进样测定 ,结果峰面积的 RSD= 0. 8%。
2. 5　回收率考察:精密称取已知 Hup A含量的蛇
足石杉样品 ,加一定浓度的对照品溶液 ,按样品含量
的测定方法提取 ,测定 ,计算回收率 ,结果为
99. 52% , RSD为 1. 21% (n= 5)。
2. 6　样品测定
2. 6. 1　提取方法优选:参照文献 [ 3, 4]。
Soxhlet抽提法:精密称取样品干粉 2 g置于纸
筒 ,分别用甲醇、 95%乙醇和氯仿浸泡过夜 ,回流提
取至 Dragendorf fo r s反应呈阴性 , 50℃真空浓缩 ,
再用 0. 5 mol /L HCl溶解 ,过滤 ,氯仿萃取 ,取酸水
层调 pH= 9～ 10,氯仿萃取 ( 5次 ) ,无水 Na2 SO4干
燥 ,回收溶剂 ,得蛇足石杉总碱。
稀盐酸水浸提法: 0. 5 mol /L HCl摇床振荡浸
提 48 h,滤渣重复 2次以上 ,酸水液用氯仿萃取弃
去 ,同 Soxhlet抽提法酸水层至结束。
4种提取物用无水乙醇溶解 ,定量转至 10 mL
容量瓶中定容 ,以微孔滤膜过滤 ,取滤液进样 10
μL,按 HPLC测定条件进行 ,以外标法计算 Hup A。
结果见表 1。
表 1　不同提取方法和溶媒的比较 (n= 3)
提取方法 溶媒 总碱 (% ) Hup A(% )
索氏抽提 甲醇 0. 560 0. 016 6
乙醇 0. 425 0. 014 1
氯仿 0. 575 0. 019 6
酸水浸提 0. 5 mol /L HCl 0. 476 0. 013 2
　　注:样品为广东样品。
2. 6. 2　样品测定: 取蛇足石杉样品细粉 2 g ,精密称
定质量 ,用 Soxhlet抽提法提取 ,氯仿做溶剂 ,提取
物用无水乙醇溶解 ,定量转至 10 m L容量瓶中定
容 ,用无水乙醇稀释至刻度。 取 10μL进样 ,测定结
·1079·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
果见表 2, 3和图 1。
表 2　不同产地蛇足石杉总碱及 Hup A的含量 ( n= 3)
产地 总碱 (% ) Hup A(% )
贵州 0. 418 0. 018
广东 0. 587 0. 021
安徽 0. 576 0. 020
　　注:提取溶剂为氯仿
表 3　 Hup A在蛇足石杉中的分布
产地 部位 Hup A(% )
广东　 根 0. 002 0
南昆山 茎 0. 012 3
叶 0. 012 9
安徽　 根 0. 003 5
茎 0. 013 2
叶 0. 006 3
3　结论与讨论
3. 1　 HPLC法测定石杉碱甲 ,方法简单 ,线性范围
广 ,灵敏度高 ,是目前测定 Hup A药源的快速灵敏
的一种有效方法。 测定中比较了 3种流动相: 甲醇 -
水 ( 50∶ 50,含 0. 01%三乙胺 )、甲醇 -乙腈-水 ( 40∶
10∶ 50,含 0. 01%三乙胺 )、乙腈 -KH2 PO4 溶液
( 12∶ 88) ,结果乙腈 -KH2 PO4溶液 ( 12∶ 88)为流动
相分离效果最好。 其中三乙胺的浓度对出峰影响较
大 ,浓度增大 ,不出峰。这与周芝芳等 [5 ]对 Hup A胶
囊的测定结果一致。
3. 2　蛇足石杉总碱的几种提取方法结果表明 ,各提
取方法之间并无显著差异。
3. 3　 Hup A测定结果表明 ,广东南昆山样品、贵州
1-根　 2-茎　 3-叶
4-Hup A对照品
图 1　蛇足石杉不同部
位 中 Hup A的
HPLC图
样品和安徽样品的石杉碱
甲含量之间稍有差异。
3. 4　 Hup A在两个产地的
蛇足石杉植株中的含量分
布为地上部分大于地下部
分。 但 Hup A在茎和叶中
的分布差别较大 ,对此只有
通过对不同产地蛇足石杉
植株不同部位 Hup A含量
的进一步调查才能解决。同
时也说明 Hup A可能在蛇
足石杉的叶中合成 ,而后通
过茎向地下部根中运输。
3. 5　蛇足石杉广布于全国
各地 ,目前药源产地主要为
云南、四川、贵州 ,作者将进
一步开展对不同产地药源含量的测定工作。
参考文献:
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[ J] .药物分析杂志 , 1998, 18( 2): 104-106.
苦豆子种子生物碱离子交换分离的因素研究
王洪新 ,王　键
(江南大学食品学院 天然资源研究室 ,江苏 无锡　 214036)
　　苦豆子 Sophora alopecuroides L.又名苦甘草、
嘎顺—包日其格 (蒙药名 ) ,是豆科槐属植物 ,在我国
主要分布于西北沙漠地带 ,其种子、根茎及全草都是
我国西北地区常用的中药材 ,有清热解毒、祛风燥
湿、止痛杀虫等作用 [1 ]。研究发现苦豆子富含生物
碱 ,特别是苦豆子种子中的生物碱含量高达
8. 11% 。苦豆子种子中生物碱以氧化苦参碱、氧化槐
果碱、苦参碱、槐定碱、槐果碱等喹喏里西定 (quino-
lizidine)型生物碱为主 [2 ]。由于该类生物碱的极性较
大 ,因此在水中的溶解性较好 [3 ]。因此可以利用离子
交换树脂法 ,经过酸水提取、离子交换与碱化洗脱三
步处理得到纯度较高的总生物碱 ,成本低、操作简
便 ,适于工业生产。本研究利用静态法和动态法进行
了离子交换树脂的筛选 ,并利用加助溶剂的方法改
善了苦豆子生物碱的分离效果。并利用液质联用
( HPLC-M S)仪分析了离子交换洗脱液的成分。
·1080· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
收稿日期: 2002-07-19作者简介:王洪新 ( 1964-) ,男 , 1991年于无锡轻工大学获食品工程博士学位 ,研究方向为天然资源 ,主持省部级项目 4项 ,发表科技论文 20余篇。 Tel: ( 0510) 5887517