全 文 ：· 药剂与工艺 ·
H P L C直接测定血清阿魏酸— 方剂血样预处理新方法 ( I )△
第 四军医大学 西京医院 (西安 7 10 0 32 )黄 熙 家 任 平 张 莉 吴少华 陈建宗
摘 要 建立了沸水浴去 血清蛋 白质后 用 H P L C直接 测定阿魏酸 (F A )方法 : 方剂 的血样预处理
新方法分别用 二维 、 三维 H P L C和分光光度计定性测定 F A后 , 用内标 (香豆精 )法定量 。 甲醇 一乙 酸
一水 ( 3 8 : 0 . 3 : 6 1 . 7 )为流动相 , C l。 ( O D S Z )柱 ( 1 5 0 m m 火 4 . 6 m m , 5 拜m )为固定相 时 , F A 的最低检
测限 6 n g ;沸水浴 l o m i n 的最低检测血清浓度是 Zo . Z n g /m L , 线性范围 3 3 . 7~ 2 1 5 6 . 8 n g / m L , r
= 0
.
9 9 9 3 ;方法平均 回收率 (9 3 . 59 士 1 . 93) % , 日间及 日内精密度 R S D 值均 为 8 . 4 % 。 上法 已用于
人服川芍 汤后经时变化的血清 F A 浓度测定 。
关键词 阿魏酸 血药浓度 样 品预处理 水浴法 H P L C
虽然 “ 复方 效应 成分药动 学 ( P K ) ” 〔`一 4〕
认为复方进人体内成分 能定性定量 ; 国内外
文献 〔5一 g 〕也提供 了佐证 , 但没有 现存 的特别
适应方剂效应成分 P K 研究的新方法 。 其关
键之一是样品预处理 。 笔者用乙睛 〔l0j 等萃取
服用川芍后血清 中的阿魏酸 ( F A )失败后 , 改
用水浴法 ,经 H P L C 测定初获成功 。
1 仪器 、 试药与受试对象
1
.
1 仪 器 : W a t e r s 9 9 0 高效 液 相 色 谱 , 配
W at er
s 9 9 1 光 电二级 管 阵 列检 测 器 (3 D -
H P L C )
, 用于复方体 内成分峰纯度鉴定 。 贝
克曼 6 4 0 分光光度计 , 用于化学成分 的紫外
扫描 。 贝克曼 H P L C 仪 , 1 65 可变波长双通道
紫外 一可见检测器 ,用于 F A 定量 。
1
.
2 试药 、 试 剂和药材 : F A 对照 品 (批号 :
7 7 3
一
9 2 0 3 )
: 中国药品生物制品检定所提供 。 香
豆 精 对 照 品 (批 号 8 8 0 6 6 1 5 ) : 含 量 9 9% ,
m p 6 8
·
9℃一 7 0 · 0℃ ,购于中国医药公司北京
采购供应站 。 醋酸 、 甲醇 、 乙睛均为 A R 级 。 川
芍购 自四川都江堰市医药公司 , 由西北大学植
物解剖学研究室胡正海教授鉴定为伞形科植
物川芍 L i g u s t i c u m c h u a n x i o n g H o r t . 的干燥
根茎 。 健康人空白混合血清 : 本院血库提供 。
.1 3 标准溶液制备 : 精称 F A 3 · 3 7 m g 于 50
m L 棕色容量瓶 中 , 用流动相稀释至刻度 为
母液 1 ( 67 . 4 拼g /m L ) 。 母液 1 稀释 20 倍后为
母液 2 ( 3 . 3 7 m g /m L ) 。 精称香豆精 5 . 0 3 m g
于 1 0 0 m L 棕色容量瓶 中 , 加 0 . 3 m L 无水甲
醇助溶 后 用 双蒸 水 稀 释 至 刻 度 ( 50 · 3 拼g /
m L ) 为母液 3 。 上述配制好 的标准溶液密封
后置 4 ℃冰箱待用 。
1
.
4 受试对象 : 健康 自愿者 4 男 2女 , 年龄
1 7 至 3 8 岁 , 平均年龄 ( 2 8 . 7 士 7 . 1 ) 岁 , 体重
5 0 至 7 2 . 5 k g , 平均体 重 ( 5 8 . 3 士 1 0 . 5 ) k g 。
血压 、 心率 、 脉搏均正常 , 无心 、 肝 、 肾和 胃肠
道等疾患 。 服药前空腹 14 h 并未饮含酒精类
饮料 ,未吸烟 ,受试期间正常饮水 。
2 实验方法
A d d r e s s
:
H u a n g X i
,
X i jin g H o s p i t a l o f F o u r t h M i l i t a r y M e d i e a l S e i e n e e s
,
X i
一 a n
黄 熙 男 , 39 岁 , 中医学学士 ; 中药 临床药理硕士 ; 心血管生理博士 ;中西医结合博士后 ;专业 : 中药临床药理 , 中西 医
结合基础 与临床 。 现任第四 军医大学附属一 院中药 临床药 理研 究室主任 ; 副教授 ; 硕士导师 ; 中国中西医结合学会实验 医学
专业委员会副主任委员 (筹 ) , 中国药学会药物分析 委员会 委员 , 陕西中药药理学会理事 。 研究方 向 : 中药复方药效物质及其
药动学 。 1 9 9 1 年提出 “ 证治药动学 ” ,博士后基金 资助 。 在 国内外发表相关论文 30 余篇 , 1 9 9 8 年被评 为解放 军后勤科技新星 。西苑医院博士后流动站 1 9 96 年 3 月至 1 9 97 年 12 月期 间在站博士后 。
△国家自然科学基金 资助项 目 N o : 3 9 1 0 0 13 9 , 3 9 5 7 0 8 7 0 ; 3 9 6 7 0 8 6 5 ; 3 9 8 7 0 93 2 ,博 士后基金 ( 9 6 ) 4
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 3 期 一 1 7 5 -
2
.
1实验设计 :首先统一煎煮川芍汤液的标
准并制备好足够的汤液 。 选择一例受试对象
按 19 / kg 剂量服 用 , 30 m in 内取血清 ,先用
文献 〔`。 ,方法用 乙睛进行预处理 , 用 H P L C 仪
进行测定并与化学对 照品对照 , 初步定性成
功但重 复性差后 改用水浴 法进行 样 品预处
理 。 选择受试对象再次 以 1 9 k/ g 服用川芍
汤 , 服药前及后 5 至 2 4 0 m in 内多时间点各
取血清 l m L , 其中 30 m in 组取 s m L 血清以
作为进一步定性用 。 上述 目的旨在确定服药
后的合适取血时间 、 取血量和确定标 准曲线
范围并测定 。 用 3 D 一 H P L C 和紫外扫描仪进
一步定性汤液 (体外 )与服 用汤液后血清样品
中的所测组分 。 根据上述预实验的明确结论
确定最优色谱条件 、 样 品预处理方法及标准
曲线测定方法 。
2
.
2 口服汤剂的制备 : 取干燥不规则球状川
芍 2 0 0 9 , 常水冲洗 2 次 ,放人夹层不锈钢锅
内加 1 2 0 0 0 m L 的 9 0 ℃一 1 0 0 cC 水在煮沸 2 0
m in 后滤干 ,用不锈钢刀将变软的川芍切成 1
c m X 1 c m 左右的方块 ,放人原水 中文火煮沸
30 m in
,用上法过滤 ;第二次用沸水没过药渣 ,
文火煮沸 30 m in , 过滤后 2 次药液合并 , 最后
浓缩成 0 . 5 9 /m L 。 赤芍汤的制备方法同上 ,
最终浓度为 0 . 5 9 /m L , 置 4 C 冰箱备用 。
2
.
3 紫外波长测定 : 分 2 种 , 一种用分 光光
度计进行 , 另一种用 3 D 一 H P L C 的二极管阵
列检测器进行 。 F A 、 内标香豆精对照品 、汤液
及预处理后的血清样品中的靶成分均进行紫
外扫描 以定性 。
2
.
4 色 谱 条 件 : C ,。 ( H Y P E R S IL 填 料 ,
O D S Z ) 色谱柱 1 5 0 m m X 4 . 6 m m , 5 拌m (大连
依利特科学仪器有限公司 ) 为固定相 , 流动相
参 考 文 献 用 甲 醇 一乙 酸 一水 ( 38 , .0 3 ,
6 1
.
7
,
)
, 该 流 动 相 用 于 Z D 一 H P L C ; 3 D -
H P L C 的流 动相 用 甲醇一磷 酸 缓 冲液 ( 0 . 01
m o l / L
, p H 3
.
0 )
, 流 速 1 . 0 m L /m i n , 贝克 曼
和 W at er s 仪器 自带脱气装置 , 3 D 一 H P L C 流
速 0 . 7 m L /m in 。 因 F A 和阿魏酸钠的对照紫
外 谱图有一 较高的 280 n m 左右的肩峰 , 且
·
1 7 6
·
川芍 中含有 川夸 嗓的紫 外 吸收波长 为 2 8 0
n m
,所 以 贝克曼 H P L C 设 3 2 0 和 2 8 0 n m 两
个波长 。 3 D 一 H P L C 和紫外波长为 2 0 至 4 0 0
`
n m
, 纸速 : 每屏幕 6 0 和 1 0 m i n 两种 。
2
.
5 样 品预处理方法 : 先用文献 (10 “方法 : 精
密量取 空白血清 1 m L 于 s m L 玻璃具塞锥
形离心试管 中 , 分别加一定浓度 内标 、 不同浓
度 F A 后 , 涡旋振 荡 15 5 混 匀 , 然 后加 2 . 4
m L 乙睛后再次涡旋振荡 15 5 混匀 , 3 0 0 r /
m i n 离心 1 0 m i n , 将有机层 移至另 一 5 m L
具塞锥形离心试管中 , 在 60 ℃水浴和氮气下
吹干 后用 1 0 。 拌L 甲醇 重溶 , 20 拜L 进 样测
定 。 因色谱结 果不佳 ( 图 1) 改 用水浴 法 : 10
m L 具塞锥 形 离 心试 管 内分 别加 人 30 拌L
水 、 50 拜L 内标母 液 3( 针尖插人水 中 ) 、不 同
浓度 的 F A 液和水 (使每管容积相同 ) 、 l m L
空 白血清 , 然后 涡旋混匀 15 。 , 10 0℃水浴 10
m in
, 用超微型搅拌器搅拌 l m in 制成匀浆 ,
1 2 0 0 o r /m i n 离心 1 5 m i n , 取上清液直接进
行 H P L C 测定或置于 1 m L 锥形塑料试管中
存一 1 8 C 冰箱待测 。
2
.
6 定性与定量计算及方法 比较标准 : 比较
对照 品 、 样 品所测组分的 Z D 一 H P L C 的保留
时间 、 3 D 一 H P L C 的峰纯度和紫外扫描波长
是否一致给予定性 。 以 F A 浓度为 自变量 ,峰
面积或峰高 与 内标 的 比值为 因变量 进行 回
归 ,求 出标准曲线的回归方程 ,计算 F A 的浓
度 。 以色谱图的组分峰分离情况 、峰面积的稳
定性与重复性作为乙睛法和水溶法的比较标
准 ,并 比较样品预处理方法 。
3 实验结果
3
.
1 样 品预处理方法的比较 : 图 1 中峰 1 和
2 为 F A 和内标 (下同 ) , 乙睛不能使 F A 峰与
血清内源性物质完全分开 ( 图 I B 和 C ) , 由于
除蛋白差致使保留时间到 5 m in 才使谱图接
近基线 ( 图 I A ~ D ) , 而且因内标忽高忽低使
定量结果的重复性太差 (图 I B ~ D ) 。 而水浴
法的沉淀蛋白效果 、 F A 峰与其他峰的分离均
良好 (图 I E ~ F ) , 内标峰稳定而重复性好 。
3
.
2 定性分析 : 用 Z D 一 H P L C 定性 ,结果见
l
一
F A Z
一内标
图 1
时阁 r (加。 )
A 和 E一空白血清 B 、 C 和 F 一空 白血清加 F A 和 内标 D 一人服川夸汤后的血清样 品
人血清样品 乙腑 (A ~ D )和 沸水浴 ( E ~ F )处理后的色谱图的 比较 .
图 2 , 人服川芍复方汤后
血清样品经水浴后直接
测定的 1 号峰与 F A 对
照 品保 留时 间一致 , 加
F A 对照 品后 1 号峰 明
显增高 , 可初步定性 ( 图
ZG 和 H ) 。 图 3 中的 b
和 c 说 明沸水浴 对 F A
的最 大 U V 吸 收 无 影
响 。 实验表明 F A 加人
血清的 U V 的最大吸收
亦为 3 2 0 n m , 约 2 8 0 n m
. . . . 目 , .州. 州. 白. 州. 州. . .门 白. . . - . . . . 曰卜. . ` . .
6 0
时间 t( 幻滋. )
1
一
F A Z
一内标 加 ( H ) 和
不加 ( G ) F A 对照品
图 2 人服川育汤 后血清样品经沸水浴后
的色谱图
处 的肩峰略高是 由于血清所致 (未列图 , 我们
实验证实 ) 。 图 4 为 3 D 一 H P L C 色谱结果 : 图
中 A 为空 白血清 , B 中箭头所指处的峰 ( 3 2 0
n m ) 及其水平轴随后峰 ( 2 2 0 n m ) 与 F A 对照
品的一致 。 箭头所指峰与 3 D 一 H P L C 所测出
的 U V (未列出 ) 与 F A 对照品的 U V 也一致 。
所以可将 1 号峰鉴定为 F A 。
3
.
3 标准 曲线 : 按样品预处理项下的水浴法
操 作 , F A 浓 度 线 性 范 围是 3 3 . 7 一 2 1 5 .6 8
gn /m L
。 每个浓度组 n 一 6 , 进样量 3 . 7 n g /
m L 组为 2 0 0 川 J ,余为 50 拜L 。 得标准曲线 :
Y = 0
.
0 0 2 2X + 0
.
0 7 1 3
, r
= 0
.
9 9 9 3
3
.
4 回收率及精密度试验 : 3 种浓度按样品
预处理项和标准曲线项下处理和测定 , 血清
F A 的方法回收率见表 1 。 日内精密度为 l d
内测定结果的统计分析 ; 日间精密度为 30 d
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3。 卷第 3 期
彼硬 决 (二 )
a 一流 动相 b一流动 相 中的 F A c 一 b 样 经水 浴 d 一血 清 中
F A
图 3 F A 的紫外扫描图
内日间测定结果的统计分析 ,见表 2 。
3
.
5 检测 限 : F A 的最低检出限为 6 n g 。 按
样品预处理项下操作测定 , 水浴 10 m in 时的
最低检测浓度为 20 . 2 n g /m L 。
表 1 F A 在血清测定的方法 回收率 (n 一 5)
加人量
( n g / m L )
测得值
( n g /m L )
回收率
( % )
R S D
( % )
3 3
.
7
2 6 9
.
6
2 1 5 6
.
8
3 1
.
4士 1 . 4 6
2 5 8
.
8士 1 0 . 1 3
1 9 7 2
.
8士 7 1 . 2 1
9 3
.
1 7
9 6
.
1 4
9 1
.
4 7
4
.
6 3
3
.
9 2
3
.
6 1
表 2 F A 在血清测定的精密度
’ 茄义燮川 . -一 ’一 ~ . 日内误差 -一 白间误爱
( n g /m L ) 二 R S D ( % ) n R S D (% )
3 3
.
7
2 6 9
.
6
2 1 5 6
.
9
8 4
.
5 9 5 6
.
1 8
9 3
.
8 9 5 7
.
8 9
8 3
.
6 2 5 8
.
4 4
3
.
6 专 一性 : 水浴 法处理后 色谱 图基 线平
稳 , 最先洗脱的蛋白杂峰峰面积小 ,不存在血
清中内源性成分 、 川芍中其他成分 ( 图 I E 和
,
1 7 7
·
F) 对 A F的干扰 , 而 乙睛法则存在上述干扰
I A ~ D )
(。 动
A
一空 白血清 B 一服川芍 汤后 血清样品 令一 F A 峰
图 4 人血清的三维色谱图
本方法应用 : 健康 自愿者 (n 一 6) 空腹服
图.7丫了、八j
川芍汤 ( 1 9 / k g ) 后于服 药前及 后 5 、 1 0 、 1 5 、
3 0
、
4 5
、
6 0
、
9 0
、
1 2 0
、
1 8 0 和 2 4 0 m in 取血 清 1
m L
, 置 一 1 80 ℃冰箱保 存 , 这些 样品除不 加
F A 标准液外均同样 品预处理方法 。 上述时
间 点 的 血 药 浓 度 ( n g /m L ) 均 值 分 别 为
8 1
.
7 8
、
1 1 5
.
5 4
、
1 2 7
.
8 1
、
9 4
.
1 4
、
7 2
.
7 4
、
5 5
.
1 8
、
6 1
.
9 5
、
6 7
.
3 3
、
5 8
.
4 2 和 5 5 . 9 8 。 其 P K 正在进
一步研究之中 。
4 讨论
4
.
1 学术界主流否定论认为 : 方剂在体内成
分不能 、 难 以或没有必要进行定性定量 〔,一 3〕 。
1 9 9 1 年假说〔`一 “ 〕的创新性意义如前言所述在
于提 出与其相反 的 “ 肯定论 ” 理论 。 我 国中药
的方 剂的相关研究有待进行 , 因此开创 与新
理论相称的新方法 ,具有重要意义 。
4
.
2 迄今所 有复方 P K 文献 〔 1一 3〕中的血样
预处理没有采用水浴法 。水浴法可能 “ 较适合
(应 ) ” 复方药物分析法的血样预处理 : 因为复
方水煎液 中的化学成分能耐受长时间的沸水
高温 和水解作用 , 当它们在血清 中被水浴提
取 时同样 能够耐受 ,这些成分在体 内与体外
所 面 临处理 的条 件和环境 一致 ; 另一 “ 较适
合 ” 的依据是 : 血清 中源 自复方的成分 以水溶
一
1 7 8
-
性成分为主 ,兼有双溶性成分 , 或部分脂溶性
成分 ,但能溶于热水 。而 目前西药化学药品主
体为脂溶性成分 。 这可能是 目前西药体 内药
物分析很少采用水溶法的原因 。
4
.
3 方法学色谱 图和数据 ( 图 1 ~ 4 , 表 1 ~
2 ) 表 明 : 本 文建立 了服 用 川芍复 方后 血 清
F A 测定的新方法 , 该方法特 点体现如下 : 仅
一步性萃取 , 不需要有机溶 剂一步性萃取时
的氮气 吹干并重溶 , 因此可单独大规模制备
样品 ; 水浴法不使用有机溶剂 , 因而无毒 ; 水
浴法条件易于控制 、 引入外来因素少 、 大批量
一次性完成 ,所 以该方法非常的精确 、 灵敏和
重复性好 。 这是我们 以往乙睛法 〔1。〕 、 三氯甲
烷提取补骨脂素〔“ 〕 、 川芍嚓 以〕等预处理法所
无法 比拟的 。
4
.
4 许多西药体 内药物分析的定性 , 仅用保
留时间与对照品是否一致为确定 。 而 (图 3一
4 )采用了二极管阵列检测器和光谱学数据来
鉴定川芍进 入人体 内的 F A , 可 以判 断同一
保 留时间的不同波长上是否有其他成分 , 可
以保证定性 的准确 ,为定量奠定基础 。
4
.
5 本实验仅为初步实践 。水浴法预处理复
方血清成分 , 广泛应用性如何 ?不同动物血清
中复 方来源 的 F A , 用水浴 法萃取 的规律性
如何 ? 水液时间如在本文中延长至 15 m in 如
何 ? 对色谱柱的污染如何 ? 如预柱或样品上
清液过滤后对柱子的影响如何 ? 水液加强酸
等改变条件时的萃取效果 、 除蛋白效果如何 ,
均不清楚 , 我们正在研究 中 。
参 考 文 献
1 黄 熙 ,等 . 中国中药杂志 , 19 97 , 2 2( 4) : 2 5 0
2 H u a n g X
, e t a l
.
C J I M
,
1 9 9 5
,
1 ( 4 )
:
2 9 7
3 黄 熙 ,等 . 中草药 , 1 9 9 5 , 2 6 ( 1 0 ) : 5 4 6
4 黄 熙 ,等 . 中西 医结合 , 1 9 9 5 , 6 ( 2 ) : 7 9
5 K a n o Y
, e t a l
·
S h o y a k u g a k u Z a s s h
,
19 8 9
, 4 3 ( 3 )
:
1 99
6 矢船 明史 ,他 . 日本 东洋 医学杂志 , 1 9 92 , 4 3 ( 2 ) : 2 75
7 N i s h i o k a Y
, e t a l
.
C h e m P h a r m B u l l
,
1 9 92
,
4 0 ( 5 )
:
1 3 3 5
8 K a n o Y
, e t a l
. 国外医 学 一中医中药分 册 , 19 95 , 1 7 ( 6 ) :
3 4
9 W
a n g S
, e t a l
. 国外医学 一中医中药分册 , 1 9 9 5 , 1 7 ( 6 ) :
3 4
W
e n A D
,
1 9 9
黄 熙 ,等
e t a l
.
J C h i
n P h a r m a e e u cS i e n
,
1 9 95
, 4 ( 4 )
:
中草药 , 1 9 9 1 , 2 2 ( 8 ) : 36 1
( 1 9 9 8
一
1 0
一
5 收稿 )
De te rmi na ti o no f Fe rU li CA Ci di nS e U rm
a f te r
o ra lA dmi nis t ra ti o no f TCM Pe r Pa ra ti o ns
Hu
a ng Xi
,
R e n P in g
,
Z h a n g L i
, e t a l
·
( X i ji n g H
o s p it a l o f t h e F o u r t h M il it
a r y M
e
d i
c a l U n iv e r s i t y
,
X i
一 a n
7 1 0 0 3 2 )
A b s t r a e t A n
e
w m e t h o d f o r t h e d e t e r m in a t i o n o f f e r u l ie a e id in s e r u m s a m P l e s a f t e r o r a l
a d m in i s t r a t io n o f T C M b y H P L C h
a s
b
e e n d
e v e l o p e d
.
S
e r u m s a m p l e s e o n t a in in g f e r u li e a e id ( F A ) a n d
i n t
e r n a l s t a n d a r d e o u m a r in ( 15 ) w e r e f ir s t t r e a t e d i n b o il in g w a t e r
一
b a t h t o d e p r o t e in a t e
, a n d t h e F A a n d 15 i n
t h e s u p e r n a n t a n a l y s e d b y ZD
,
3D H P L C a n d s p e e t r o m e t r y
, o n C
l: e o
l
u m n ( 1 5 0 mm X 4
.
6 m m
,
5 拼m , ) w i t h
M
e O H : HO A e : H ZO ( 3 8 : 0
.
3 : 6 1
.
7 ) a s t h e m o b il e p h a s e
, a n d d e t e e t e d a t 3 2 0 n m
.
R
e s u l t s s h o w e d th a t ( l )
t h
e m i n im a l d e t e e t a b le l im i t s o f b l a n k m e t h a n o l a n d s e r u m e o n e e n t r a t io n s o f F A w e r e 6 n g a n d 2 0
·
6 n g / m L
;
( 2 ) t h e l in e a r i t y r a n g e d f r o m 3 3
.
7 t o 2 1 5 6
.
8 n g /m L (
r = o
·
9 9 9 3 ) ; ( 3 ) t h e m e a n r e e o v e r y w a s 9 3
·
5 9 士
1
.
9 3% ;
a n d ( 4 ) RS 刀 o f w it h i n d a y a n d d a y t o d a y w e r e le s s t h a n 8
.
4 4 %
.
I n
a p i lo t s t u d y
, s e r u m s a m p le s
e o l l e e t e d f r o m h e a lt h y v o l u n t e e r s f o l lo w in g o r a l a d m in is t r a t i o n o f a d e e o e t i o n o f C h u a n x i o n g ( L ig u s t i c u 从
c h u a n x i o n g H o r t
.
) g a v e a e o n e e n t r a t i o n
一 t im e e u r v e o f F A w i t h a e e u r a t e a n d r e p r o d u e ib le r e s u lt s
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K e y w o r d
s
d
e t e r m i n a t io n o f s e r u m f e r u li e a e id b y H P L C
固相萃取结合 H P L C 法快速测定紫杉醇的含量
大连理工大学生化工程研究所 ( 1 1 0 6 1 2) 张志强 . 田桂 莲
中国科学院化工冶金研究所生化工程 国家重点实验室 韦新桂 苏志国
摘 要 采用 羊 A 12 0 3 固相萃取和 H P L C 法对 云南红 豆杉和 东北红 豆杉培养细 胞中的紫杉 醇进
行了定量分析 。 红豆杉浸膏粗品经 不 A 120 3 固相萃取柱后 , 可直接上高效液相色谱柱 。 C l , H P L C 的
最佳条件是 : 甲醇一 乙睛 一水 (2 5 : 45 : 3 0) 为流动相 , 227 n m 紫外检 测 。 该法简单 、 快速 、 准确 、 适应
性 强 , 对紫杉醇的检测范 围在 0 . 4 ~ 19 . 2 拌g 。
关键词 固相 萃取 H P L C 紫杉醇
紫 杉醇 ( p a e l i t a x e l ) 是一 种从 红豆杉 植
物中获得 的具有独特疗效的抗癌天然植物产
物 , 现 已被多个国家批 准应用于临床治疗卵
巢癌 和乳腺癌等 。 关于 紫杉醇 的 H IP J C 分
析 , 国内外 已有不少报道 〔` 一 5〕 。 由于红豆杉属
植物种类繁多 , 而这些植物中具有紫杉烷骨
架 的化合物就有 10 0 多种 ,但紫杉醇含量极
低 , 约占固体物 0 . 0 1 0%一 0 . 0 1 3% 。 同时 , 红
豆杉浸膏 中往往含有大量的蜡 、 脂类物质等 。
这些杂质 的存在 , 严重影响 了紫杉醇的准确
定性定量和分析分离所使用色谱柱的寿命 。
因此 ,寻找一种快速 、精确 、 灵敏 、 适应性强的
分析方法 , 无论是对 红豆杉细胞培养还是对
紫杉醇的大规模分离纯化 ,都显得尤为重要 。
固相萃 取其突 出的优 点是能使 H P L C 分析
复杂样 品时定性定量更准确 , 并延长色谱柱
的使用寿命 。 同常规的样品预处理方法液液
萃取相 比 , 固相萃取具有效率高 、选择性好的
特点 。 它不需要大量不互溶溶剂 , 样品处理步
骤简单 , 样品 回收快 。 固相萃取 的主要 目的是
A d d r e s s
:
Z h e n g Z h iq i a n g
,
In s t i t u t e o f B i o e h e m i e a l E n g in e e r in g
,
D a l i a n U n i v er
s i t y o f T e e h n o l o g y
,
张志强 男 ,在读博 士 , 主要研 究方向为生物产品 的制备与纯 化 。 参 加完成国家青年基金资助项 目“
D a l i a n
重组人肿瘤坏死因子的分离纯化 ” 。 现 正从事 国家 “ 九 · 五 ” 攻关项 目 “ 紫杉醇大 规模 生产 ” 的研究 。
《中草 药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 3 期 一 1 7 9 -