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Quantitative Analysis of Raddeanoside D in Radde Anemone Rhizome (Anemone raddeana) from Different Habitats by HPLC

HPLC法对不同产地两头尖中皂苷D的定量分析



全 文 :·药剂与工艺·
HPLC法对不同产地两头尖中皂苷 D的定量分析△
长春中医学院中药系 ( 130021)  李 勇  张 惠 刘大有
摘 要 以两头尖皂苷 D( raddeano side D)为含量测定指标 ,采用 HPLC法测定了产于黑龙江、吉林、辽宁、山
东共 10个药材中皂苷 D的含量 ,分别为 0. 355 0% 、 0. 321 3% 、 0. 280 7% 、 0. 219 6% ,本法快速、简便、重现性
好 ,为两头尖质量控制和评价提供了可靠的依据。
关键词 两头尖 皂苷 D  HPLC 定量分析
Quantitative Analysis of Raddeanoside D in Radde Anemone Rhizome
(Anemone raddeana ) from Different Habitats by HPLC
Department of Tradi tional Chinese M ateria M edica, Changchun Col leg e o f TCM ( Changchun 130021)
Li Yong , Zhang Hui and Liu Dayou
Abstract   Using raddeanoside D, th e main activ e constituent o f Anemone rad deana Regel, as the
quality cont ro l cri teria , 10 samples o f the herbal drug collected from dif ferent lo calities of Heilong jiang,
Ji lin, Liaoning and Shandong provinces w ere analy sed by HPLC. Results show ed that the average rad-
deanoside D contents w ere 0. 355 0% , 0. 321 3% , 0. 280 7% and 0. 219 6% respectiv ely. This method w as
proved to be quick, simple and reproducible, and provided a reliable basis for the quali ty cont rol and evalu-
ation of A . raddeana.
Key words   Anemone raddeana Regel  raddeanoside D  HPLC quanti tativ e analy sis
  中药两头尖为毛茛科银莲花属植物多被银莲花
Anemone rad deana Regel的干燥根茎 ,首载于明代
刘文泰所著《本草品汇精要》中 ,临床上具有“祛风
湿、消痈肿”的作用 ,用于风寒温痹、四肢拘挛、骨节
疼痛、疮痈溃烂 [ 1]等症。两头尖皂苷 D( raddeano sede
D)为其主要活性成分 [2 ]。药理研究表明皂苷 D具有
抗肿瘤、抗炎、镇痛、镇静、抑菌、溶血作用 [3, 4 ]。 我们
选用两头尖皂苷 D为含量测定指标 ,对我国东北及
山东四省产两头尖中皂苷 D进行了 HPLC法定量
分析 ,为两头尖内在质量控制提供了科学依据。
1 仪器与试药
LC-6A高效液相色谱仪 (日本 ): 包括 LC-6A
高压溶剂输送泵 , SPD-6A紫外 -可见检测器、 CR-
4A色谱数据处理机 ;两头尖皂苷 D对照品由长春
中医学院明兴药物研究室自制 ,经光谱鉴定 ,并经
HPLC分析为单一峰 ,纯度为 98. 5471% ; 10个两头
尖的产地和采集时间见表 1,经长春中医学院邓明
鲁教授鉴定为多被银莲花 Anemon raddeana Regel
的根茎。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件:色谱柱为 Shimpack C18柱 ( 4. 6 mm
× 200 mm , 5μm);流动相为甲醇 -水 ( 7∶ 3) ;流速为
1 m L /min;检测波长为 207 nm;纸速为 1. 0 mm /
min;灵敏度为 0. 30 AUFS。
2. 2 标准曲线的制作:精密称取干燥至恒重的两头
尖皂苷 D对照品 2 mg,加流动相溶解并定容至 1
mL,作为对照品溶液。 分别以 2, 4, 6, 8, 10μL进样
测定 ,以皂苷 D的峰面积积分值为纵坐标 ,皂苷 D
对照品的量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得一不通过原
点的直线 ,其回归方程为: Y= 38 747. 9X - 654. 9,
r= 0. 999 8。皂苷 D标准品在 4. 0~ 20. 0μg范围内
与峰面积呈良好的线性关系。
2. 3 样品的测定: 取两头尖于 60℃烘干 24 h,粉碎
过 60目筛。精密称取 10种不同产地采集的两头尖
样品各 1. 5 g ,分别置于索氏提取器中 ,加甲醇回流
提取 4 h ,提取液浓缩至干 ,残渣加少量水溶解 ,用
乙醚萃取 4次 ,乙醚层用水洗 3次 ,合并水层 ,再用
水饱和的正丁醇萃取 5次 ,合并正丁醇层 ,减压浓缩
至干。残渣用甲醇溶解 ,定容于 10 mL容量瓶中 ,摇
匀 ,用 0. 45μm微孔滤膜过滤 ,吸取 5μL进样测定 ,
·15·中草药  Chinese Tradi tional and Herbal Drug s  2000年第 31卷第 1期
Address: Li Yong, Departmen t of Chines e Materia Medica, Changch un Col lege of Tradi tional Chin es e Medicine, Changchun△国家“九· 五”攻关项目“中药材质量标准规范化研究”资助项目
结果见表 1和图 1。
表 1  10个两头尖样品产地、采集时间和皂苷 D的含量
产地 采集时间
( 1997年 )
平均含量
(% )
RSD
(% )
吉林左家 05-11 0. 318 4 1. 32
吉林靖宇 05-13 0. 320 6 2. 67
吉林桦甸 05-15 0. 324 9 3. 97
吉林天岗 05-12 0. 328 4 2. 73
黑龙江阿城 05-15 0. 352 7 3. 39
黑龙江一面坡 05-14 0. 355 2 4. 41
黑龙江亚伯利 05-07 0. 357 3 3. 89
辽宁凤坡 05-08 0. 280 2 4. 37
辽宁清原 05-06 0. 281 2 2. 52
山东昆嵛山 05-04 0. 219 6 4. 55
A-标准品  B-两头尖样品  C-皂苷 D
图 1 两头尖皂苷 D和两头尖样品 HPLC图
2. 4 加样回收率试验:精密称取已知皂苷 D含量
的吉林省桦甸产两头尖样品粉末 1. 5 g 3份 ,分别
精密加入皂苷 D对照品 5 mg ,按照样品测定项下方
法进行处理 ,残渣用甲醇定容于 5 mL容量瓶中 ,用
0. 45μm微孔滤膜过滤后 ,测定 ,计算回收率 ,结果
平均回收率: 100. 41% ,RSD= 0. 83%。
2. 5 精密度试验:在上述色谱条件下 ,对同一浓度
的对照品溶液连续 5次进样 ,得峰面积 X 为 6 462,
RSD为 2. 06% 。
2. 6 重现性试验:按照样品测定方法 ,对桦甸产两
头尖样品进行 5次平行试验 ,皂苷 D的含量 RSD
为 1. 68%。
2. 7 稳定性试验:在室温条件下 ,将样品溶液在 1,
2, 3, 4, 12, 24 h进样测定 ,含量不变 ,说明样品溶液
在 24 h内稳定。
3 讨论
3. 1 我们曾对两头尖药材进行冷浸、渗漉、加热回
流等提取方法的比较试验研究 ,结果以索氏提取器
加热回流提取测得的两头尖皂苷 D含量最高。
3. 2 中药两头尖产于吉林、黑龙江、辽宁和山东四
省 ,对我国四省产两头尖中皂苷 D含量测定的结果
表明 ,上述四省分布的两头尖有从南向北依次增高
的趋势 ,这一结果是否与气候、土壤等因素的影响有
关 ,有待进一步深入研究。
参 考 文 献
1 中华人民共和国药典 (一部 ) . 广州:广东科技出版社 , 1995: 143
2 刘大有 ,等 .中草药 , 1984, 15( 4): 34
3 刘大有 ,等 .长春中医学院学报 , 1987, 2( 3): 58
4  Wang Benxiang, at al . J Traditi onal Chin es e Medicin e, 1985, 5
( 1): 61
( 1999-04-05收稿 )
施康复颗粒剂 (Ⅱ )中苦参碱的含量测定
湖南省药品检验所 (长沙 410001)  李瑞莲  苏健俊
摘 要 用薄层扫描法测定施康复颗粒剂 (Ⅱ )中苦参碱的含量。 用甲苯 -丙酮 -乙醇 -浓氨试液 ( 20∶ 20∶ 3∶
1)为展开剂 ,在硅胶 G薄层板上分离苦参碱 ,以改良碘化铋钾为显色剂 ,采用双波长反射法锯齿扫描测定其
含量 ,λS= 515 nm,λR= 650 nm,结果表明 ,苦参碱在 2. 328~ 6. 984μg范围内呈线性关系 ,回归方程为 Y=
2886. 06X - 2066. 96, r= 0. 9980。 加样回收率为 97. 7% ,R SD= 2. 31%。 本法简便、快速。
关键词 施康复颗粒剂 (Ⅱ ) 苦参碱 含量测定 薄层扫描法
Quantitative Analysis of Matrine in Shikangfu GranulesⅡ
Hunan Institute fo r Drug Control ( Changsha 410001)  Li Ruilian and Su Jianjun
Abstract   A TLC method fo r the quanti ta tion of matrine in Shikang fu g ranulesⅡ was described. A
mixed so lv ent of toluene-acetone-ethanol-concentrated ammonia so lution ( 20∶ 20∶ 3∶ 1) w as emplo yed as
the developer, and dected at 515 nm. Co lour developing agent wa s modi fied bismuth po tassium iodide. Re-
·16· 中草药  Chinese Tradi tional and Herbal Drug s  2000年第 31卷第 1期
Address: Li Ruilian, Hunan Ins ti tute fo r Drug Cont rol , Ch ang sha李瑞莲  1987年毕业于中国药科大学药学系 ,主管药师。主要从事药品检验及中药新药的研究工作。参加中药三类新药研究工作 6项 ,中药四类新药研究工作 10项 ,均主持药学部分的研究开发 ,并均获批文投产。 起草药典品种 5项。