全 文 ：中草药































年第
 卷第
 期

 ·
接种细胞密度是影响植物单细胞平板培养植板
率的又一重要 因素 。从实验结果看 , 植板率随接种细
胞密度的增大而提高 。 但是 , 接种细胞密度越大 , 细
胞之间的距离越小 , 细胞分裂不久 , 形成 的克隆就彼
此长合在一起 , 这就 给分离起源于单细胞的无性 系
带来很大困难 。 因此 , 以筛选高产细胞株为 目的设计
植物单细胞平板培养时 , 不能为 了提高植板率盲 目
增大接种密度 , 而应在保证适度植板率的前提下 , 改
善其它培养条件 , 尽可能降低接种细胞密度 , 以便分
离起源于单细胞克隆 。
参 考 文 献

中华 人 民共 和 国卫生部药典委 员会
中华人民共和国药典
一
部

北京
人 民卫 生出版社 ,







王太霞 , 李景原
植物杂志 ,
  ,




孙敬 三 , 桂耀林 , 植物 细胞工 程实验技术
北 京
科学 出版社 ,

 








一
 一
 收稿

灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化
南京理工大学化工学院




 孙 东平 ’ 潘 锋 史 小丽 杨树林
摘 要 用 正交法研究了不同条件对灵芝菌生长 影响 , 从中选 出了灵芝菌液体深层发酵的优化培养基
葡萄糖




, 蛋白陈



,




, 酵母膏



,






,

,



·








,









, 每升发酵液产
干菌丝体



, 粗多糖



。 经葡聚糖凝胶层析对灵芝胞外多糖进行了分离纯化 , 共有
个组分 , 并用红外光
谱 、紫外光谱 , 气相色谱等手段进一步分析了灵芝胞外多糖的组成 , 结果表明灵芝胞外多糖系由甘露糖 、果糖 、葡萄
糖通过糖 各
一 糖昔键构成 。
关键词 灵芝 发酵 多糖 分离纯化




























































































































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) K a r s t f e r m e n t a t i o n p o l y s a e e h a r i d e i s o l a t i o n
a n d P u r i f i e a t i o n
灵芝是我国古代劳动人民用之已久的一类珍贵
的药用真菌 , 具有补中 、 固肾 、 补肺 、 止血的功用 , 对
多种慢性病有一定疗效 。 灵芝多糖对肉瘤 51 8。、 肿瘤
A H 一 B , 埃利希氏腹水瘤及腺瘤具有 明显 的抑制活
性 , 并能迅速恢复和提高机体免疫能力 , 治疗爱滋病
的报道更引人瞩 目 , 掀起 了一场“灵芝研究热 ”川 。
灵芝及其多糖广泛应用在医药 、食品等领域 , 市
场需求量与 日俱增 , 但 目前灵芝多糖的生产几乎都
是从子实体中提取 , 灵芝野生资源缺乏 , 人工栽培的
周期长 (2 一 3 个月 以上 ) , 占地面积大 , 又受季节 限
制 , 从而影 响了灵芝的充分利用 , 而利用深层培养技
术 生产灵芝 , 周期短 (7 ~ 10 d )、 成本低 、 产量大 , 具
有工业化的生产前景 , 选取合适的培养基 、 适当的分
离纯化方法 , 提取灵芝 多糖是本研究的最终 目的 。我
, _
. 吞d少es胜 S un 阮n即ing , C g l l e g e o f C h e m i e a l E n gi n e e r 、n g , N a n j i n g U n i v e r s i t y o f T e e h n o l o g y , N a n j i n g_ 孙东半 男 , 1 9 7 。年生 , 江苏灌云人 , 现为南京理工大学化工学 院博士研究生 , 讲师 , 主要从事糖化学及微生物生理学术论文多篇 , 参与 国家 自然科学基金等多项科研 工作 。
、 生化研究工 作 , 发表

中草药 C hinese T raditionaland H erbalD rugs 2000 年第 31 卷第 12 期 · 9 4 3 ·
质呈逐渐下降趋势 ;p H 值是不断降低 的 , 说明在发
酵 中有酸类物质分泌到胞外 , 即灵芝酸 。
2
二
3 胞外多糖的分离纯化:通过紫外分析可知 , 我们
所得到的灵芝多糖在 26 0 m m 及 280 m m 处无吸收
峰 , 也就是说无核酸及蛋白质存在 , 基本上证明多糖无
其他杂质 , 且通过发酵得到的多糖提取得率为 37 . 5
g /k g干菌体 , 比文献报道川 34 .4 9 /k g 干菌体有提高 。
2
.
4 胞外多糖组分的层析分析 :通过凝胶层析所得
到的洗脱曲线见图 2 。
基的伸缩振动吸收峰 。
2
.
5
.
3 气相色谱分析 :将胞外多糖组分 1 的酸水解
液乙酞化后作气相色谱 , 其结果如表 2 所示 。 乙酞化
方法是 :取 20 m g 灵芝多糖溶于 3 m L 5 m ol /L 硫酸
中 , 封管在沸水中水解 s h , 水解液加人适量 BaC O 3
中和 , 过滤 。 滤液中加人 15 m g N aB H 、 , 放置过夜 , 然
后加人适量乙酸分解过量的 N aB H 、 , 重复 4 次 。 将上
面得到的溶液在 105 C 的烘箱 中烘干 , 冷却后转人
真空耳塞管 , 加人 1 m L 乙酸配 , 0 . 5 m I J 毗陡 , 然后
在 10 O C 下反应 Z h , 反应液冷却后加人 1 m L 水 ,
放人表面皿中蒸发至干 。 最后用 1 m l一 氯甲烷提取 ,
提取液可直接进行气相色谱分析 (见表 2) 。
表 2 胞外多糖的气相 色谱 分析
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保 留时间 峰面积
“犷寸一奋节下犷-落石一右 几 孔
洗脱管数(管)
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合计
校正因子
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含量
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1. 0 0 0 E + 0 0 0
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图 2 胞外多精的洗脱曲线
从图 2 可以看出 , 胞外多糖的成分复杂 , 分子量
大小不一 , 共有 5 个组分 。
2
.
5 多糖的单糖组成分析 :
2.5 , 1 纸层析:通过纸层析测定 R f 值与已知单糖
比较可知灵芝胞外多糖组分是由葡萄糖 、 甘露糖 、 果
糖组成的 。
2
,
5
.
2 胞外多糖红外分析 :通过胞外多糖红外光谱
看 出 840 。m 一‘及 76 1 Cm 一‘附近无吸收峰 , 8 9 2 e m 一 ‘
处有 吸收峰 , 表明灵芝胞外多糖具有 份D 一糖昔键 ;
800 cm 一 ‘处有一微弱的吸收峰表 明有甘露糖存 在 ;
1 110 om 一 ‘处有吸收表明灵芝多糖的单糖为六元环
结构 ;3 40 0 cm 一 ’处的强吸收峰为糖分子 中缔三经
从表 2 我们可以 看出 , 灵芝胞外 多糖组分 1 是
由 3 种单糖组成的 , 结合纸层析 的结果可知灵芝胞
外多糖中含有甘露糖 、果糖 、 葡萄糖 , 其 中果糖是首
次报道 。
参 考 文 献
1 黄为群 , 吴其威 , 黄瑞珊 , 等 . 上海交通 大学学报 , 1 9 94 , 2 8 (2 ) : 83
2 罗立新 , 姚汝华 , 周少奇 . 食品工业科技 , 1 9 98 , (3 ) : 6
3 孙东平 . 液体发 酵红曲的应用研究 . 南京大学硕士研究 毕业论
文 , 1 9 9 7 : 1 9
4 袁 玉荪 , 朱婉华 , 陈钧辉 . 生 物化学实验 . 北京 :高等教育 出版
社 , 1 9 9 5 : 1 3
5 袁玉荪 , 朱婉华 , 陈钧辉 . 生 物化学 实验 , 北京 :高等教育出版
社 , 1 9 9 5 : 6 5
6 张承圭 , 王传怀 , 袁玉荪 , 等 . 生 物化学仪器分析 . 北 京:高等教
育出版社 , 1 9 9 0 : 2 0 3
( 1 9 9 9
一
1 1
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2 4 收稿)
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( 上接第 898 页)
醇棕桐酸醋一致咖〕。 由此 , 确证 刊 为 件香树脂 醇棕
桐酸醋 。
化 合 物 V :白色 晶体 , m p Z o o C 一 201 ℃ 。
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8 5
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3 7
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2 5 )
,
5 个 次
甲基 (79.08 , 5 5 . 3 5 , 4 7 . 7 8 , 1 2 1 . 6 5 , 4 7 . 4 0 ) , 7 个 季
碳 (38.75 , 4 0 . 0 9 , 3 7 . 2 5 , 1 4 5 . 2 5 , 4 2 , 0 1 , 3 2 . 8 0 ,
3 1
·
0 6 )
,
1 4 5
·
2 5 和 121 · 6 5 显示有一个双键存在 , 其
, 3
C N M
R 与文献报道的 p一香树脂醇一致阶〕, 故推测
其结构为 尽一香树脂醇 。
致谢 :云 南大学生 物 系胡志浩教授鉴 定植物样
品 , 在此衷心感谢!
参 考 文 献
1 Subarnas A , T a d a n o T . J P h a r m P h a r m a e o l , 1 9 9 3 , 4 5 ( 6 ) : 5 4 5
2 刘 明生 , 谷黎红 , 陈英杰 , 等 , 中国药物化学杂志 , 19 93 , 3( 1 ) : 42
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,
5 6 ( 2 4 )
:
3 1 2 1
4 齐一萍 , 郭舜民 , 夏志林 , 等 . 中国中药杂志 , 19 96 , 2 1 ( 4) : 2 34
5 龚运淮 甲 天然有机化合物的 ‘3 C 一核磁共振位移 , 昆明 :云南科技
出版社 , 1 9 8 6 : 1 3 1 , 1 2 ,
( 1 9 9 9
一
1 1
一
0 2 收稿)