全 文 ：表 1　国内常见菊花品种含量测定结果 (n= 3)　 (% )
样品 (产地 ) 金合欢素 -7-O-β -
D -葡萄糖苷
芹菜素 -7-O-β
-D-葡萄糖苷
亳菊 (安徽亳州 ) 0. 124 9 0. 027 4
滁菊 (安徽全椒 ) 0. 082 6 0. 012 6
杭白菊 (浙江桐乡 ) 0. 015 7 0. 587 7
贡菊 (安徽歙县金竹岭 ) 0. 033 5 0. 117 7
济菊 (山东嘉祥 ) 0. 085 1 0. 016 3
祁菊 (河北安国 ) 0. 257 3 0. 107 5
野菊 (安徽全椒 ) 0. 016 5 0. 044 6
杭黄菊 (浙江桐乡 ) 0. 018 8 0. 077 0
表 2　国内主要商品菊花药材含量测定结果 (n= 3)　 (% )
样品 (市场 ) 金合欢素 -7-O-β -
D -葡萄糖苷
芹菜素 -7-O-β
-D-葡萄糖苷
亳菊 (安徽亳州市场 ) 0. 126 0 0. 013 5
滁菊 (安徽全椒市场 ) 0. 078 9 0. 013 6
杭菊 (安徽亳州市场 ) 0. 023 4 0. 699 7
贡菊 (安徽亳州市场 ) 0. 035 8 0. 124 8
2. 6　加样回收试验:称取已测知含量的贡菊粉末 6
份 ,每份 1 g ,分别加入对照品金合欢素-7-O-β-D-葡
萄糖苷 ( 0. 18 mg /mL) 1. 5, 2. 0 mL;芹菜素 -7-O-β -
D-葡萄糖苷 ( 0. 58 mg /mL) 1. 0, 2. 0 mL,按样品测
定项下方法进行测定、分析 ,结果平均回收率金合欢
素 -7-O-β -D-葡萄糖苷为 99. 74% , RSD= 0. 69%
(n= 6) ; 芹菜素 -7-O-β -D-葡萄糖苷为 98. 48% ,
RSD= 1. 30% (n= 6)。
2. 7　检测波长的选择:对照品芹菜素-7-O-β-D-葡
萄糖苷的紫外最大吸收峰为 333 nm,金合欢素 -7-
O-β -D-葡萄糖苷的紫外最大吸收峰为 324 nm ,经实
验 ,选用 333 nm为检测波长 ,效果较好。
2. 8　稳定性试验: 将同一样品溶液 (亳菊 ) ,于 1, 2,
3 d分别测定峰面积 ,结果金合欢素 -7-O-β-D-葡萄
糖苷 RSD= 2. 53% (n= 3) ;芹菜素 -7-O-β -D-葡萄
糖苷 RSD= 2. 86% (n= 3)。
3　讨论
3. 1　样品的制备:曾试用 25 mL量瓶超声提取 ,因
不同菊花粉末加甲醇后溶胀的残渣体积差别较大 ,
影响提取液体积的变化 ,因而采用索氏回流提取法 ,
回流 4 h后 ,所测化学成分已经提取完全。
3. 2　从含量结果分析 ,亳菊、滁菊中金合欢素 -7-O-
β-D-葡萄糖苷的含量明显高于芹菜素 -7-O-β -D-葡
萄糖苷 ,杭菊和贡菊则相反 ,这可能与菊花的产地有
关。亳菊、滁菊产于长江以北 ,杭菊、贡菊产于长江以
南。从济菊与祁菊的结果分析 ,也有这种趋势。另外 ,
杭白菊与杭黄菊之间差别较大 ,杭白菊中的芹菜素-
7-O-β -D-葡萄糖苷比杭黄菊高出近 8倍 ,商品杭菊
主要来自杭白菊 ,各商品菊花药材含量与产地菊花
品种之间差别很小。
3. 3　运用 HPLC同时测定菊花中金合欢素 -7-O-β-
D-葡萄糖苷和芹菜素 -7-O-β -D-葡萄糖苷的含量 ,分
离良好、快速、准确、重现性好 ,对菊花药材的质量控
制 ,专属性较强 ,为全面有效地建立菊花药材的质量
标准提供了依据。
参考文献:
[1 ]　江苏新医学院 . 中药大辞典 (下册 ) [M ] . 上海:上海科技出版
社 , 1997.
[ 2]　张广强 ,刘　伟 ,常广福 .不同产地菊花中挥发油含量测定及
GC分析 [ J ]. 中药材 , 1990, 13( 2): 31-33.
[ 3 ]　邢振荣 ,马全民 ,浓雁书 ,等 . 不同品种及产地杭菊成分测定
[ J ]. 中草药 , 1992, 23( 3): 129-130.
[4 ]　汪民海 . 安徽产三种菊花总黄酮量的比色测定 [ J ]. 基层中药
杂志 , 1997, 11( 2): 37-38.
RP-HPLC法测定不同部位灵芝中灵芝酸 B含量
丁　平 ,张丹雁 ,徐鸿华
(广州中医药大学中药学院 ,广东 广州　 510405)
摘　要: 目的　测定灵芝中具有苦味的成分灵芝酸 B在灵芝中不同部位的含量。 方法　采用 RP-HPLC法测定灵
芝菌盖的表皮层、木栓层、菌柄、孢子粉、菌盖子实体等部位中灵芝酸 B的含量。结果　灵芝药材中灵芝酸 B主要集
中在灵芝的表皮部位 ,其它部位则较少。 结论　为寻找灵芝的有效成分分布规律提供了客观依据。
关键词: RP-HPLC法 ;灵芝 ;灵芝酸 B。
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 04 0310 03
·310· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 4期
收稿日期: 2000-06-12基金项目:广东省科委资助项目 9773003-02-01作者简介:丁　平 ( 1965-) ,女 , 35岁 ,副研究员 ,主要从事中药资源及药材质量标准的研究工作。
Determination of ganoderic acid B in different parts of Ganoderma lucidum
DING Ping , ZHANG Dan-yan, XU Hong-h ua
　　 ( Co lleg e o f Chinese Materia Medica, Guang zh ou Univ ersity of TCM , Guang zhou Guangdong 510405, China)
Abstract: Object　 To explo re the dist ribution o f the bit ter principle ganoderic acid B in di fferent par ts
o f Ganoderma lucidum ( Leyss. ex Fr. ) Karst. . Methods　 Ganoderic acid B in epidermis, phellem , stipe,
spo re and pi leus w ere determined by RP-HPLC. Results　 Ganoderic acid B w as found to be mainly concen-
trated in the enti re surface o f the basidioca rp, o ther parts contained much less amount. Conclusion　 Re-
sul t of the study may provide references for the search of such activ e principle f rom this fungus.
Key words: RP-HPLC; Ganoderma lucidum ( Leyss. ex Fr. ) Karst. ; g anoderic acid B
　　灵芝为灵芝科真菌赤芝 Ganoderma lucidum
( Leyss. ex Fr. ) Karst.及紫芝 G. japonicum ( Fr. )
Lioyd的干燥子实体 [1, 2 ] ,应用较多的为赤芝。 灵芝
无论作为保健品还是药品 ,其深刻的印象就是灵芝
的苦味。据文献 [3 ]报道灵芝的苦味成分主要是三萜
酸类 ,具有抗组织胺、抗炎的作用 ,近期研究表明灵
芝酸 B等还具有抗伤害性作用 ,是灵芝药用功效的
主要物质基础之一 [4, 5 ] ,因此 ,为了更深入地了解灵
芝中三萜酸成分的来源以及分布规律 ,我们在实验
中分离和提取了灵芝的苦味成分。本研究以灵芝中
具有苦味作用的灵芝酸 B为指标 ,应用 RP-HPLC
法对灵芝不同部位中灵芝酸 B的含量进行测定 ,现
报道如下:
1　仪器与试剂
LC-10A高效相色谱仪 (日本岛津公司 ) ;
CLASS-10A检测器 ;色谱预柱: E. Merck Lichro-
spher 100RP-100( 4 mm× 4 mm, 5μm): 色谱柱 ;
E. Merck Lich rospher ( 250 mm× 4 mm , 5μm);甲
醇为色谱纯 ,氯仿为分析纯 ,水为双蒸水。
2　实验部分
2. 1　实验材料:样品为经筛选的日本灵芝菌种进行
椴木栽培后 ,至成熟采收期的灵芝样品 ,分别为灵芝
菌盖的表皮层、木栓层、菌柄、孢子粉、菌盖子实体全
部 (菌盖的表皮层和木栓层 )、赤芝发酵菌丝体和紫
芝。栽培地点为本校药圃 ,样品经徐鸿华教授鉴定为
赤芝 G. lucidum 的不同部位及赤芝发酵菌丝体和
紫芝 G. japonicum ( Fr. ) Llo yd的菌盖子实体。以
上样品经 80℃烘干后备用 ,凭证标本存于中药资源
研究室。对照品: 灵芝酸 B,从日本菌种中筛选的优
良菌种 [6 ] ,以椴木培养的灵芝中提取而得 ,经四大光
谱鉴定核实 (由河南中医学院刘延泽教授鉴定 ) ,纯
度经 HPLC检查大于 98% 。
2. 2　色谱条件: 检测波长 254 nm;灵敏度 0. 05
AU FS; 流速 0. 7 mL /min; 柱温: 40℃ ;流动相:
0. 5%高氯酸 -甲醇 ( 50∶ 50)。
2. 3　供试液的制备: 均匀取以上样品粉末 ( 40目 )
0. 5 g,精密称定 ,置索氏提取器中 ,以 80 mL氯仿提
取 4 h,取出提取液 ,蒸干溶剂 ,残留物以甲醇溶解 ,
定容至 2 mL量瓶中 ,摇匀 ,以 0. 45μm微孔滤膜过
滤 ,作为供试液。
2. 4　标准曲线的制备: 精密称取对照品灵芝酸 B
适量 ,置 10 mL量瓶中 ,以甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,即得 (每 1 m L含灵芝酸 B 0. 16 mg ) ,以 0. 45
μm微孔滤膜过滤。 精密吸取对照溶液 1, 2, 3, 5, 7
μL,按上述色谱条件测定。以对照品 X (μg )为横坐
标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得
回归方程 A= 64 460+ 1 694 900X , r= 0. 999 9,表
明灵芝酸 B在 0. 16～ 1. 12μg范围内呈线性关系。
2. 5　精密度试验:重复量取供试液 8μL,注入液相
色谱仪 ,测定峰面积 ,计算平均含量为 0. 29 mg /g,
RSD= 0. 93% (n= 5)。
2. 6　样品测定:按以上色谱条件测定样品 ,进样量
为 8μL,用外标法根据峰面积计算样品中灵芝酸 B
的含量。 图 1为对照品及样品的色谱图。
a-灵芝酸 B( tR 24. 41 min)
图 1　灵芝酸 B对照品及样品色谱图
2. 7　加样回收率试验: 采用加样回收法 ,取已知含
量的样品约 0. 25 g ,精密称定 ,精密加入含有 0. 050
mg灵芝酸 B对照溶液 ,自然挥干后 ,按供试品溶液
方法制备并测定 ,按公式 R% = ( A- B) /C× 100%
( A:加入对照品后总量 , B:样品中所含被测成分量 ,
C: 加入对照品量 ) ,计算平均回收率为 102. 6% ,
RSD为 2. 41% (n= 3)。
　　测定了 6个样品中灵芝酸 B的含量 ,见表 1。
3　结果与讨论
·311·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 4期
表 1　灵芝不同部位中灵芝酸 B的含量 (n= 3)
　样品 灵芝酸 B( mg /g ) RSD(% )
菌盖表皮层 0. 56 2. 01
木栓层 0. 19 1. 78
菌柄 0. 29 1. 22
菌盖子实体全部 0. 53 1. 82
孢子粉 0. 087 1. 27
赤芝发酵菌丝体 未测出
紫芝菌盖 极微量
3. 1　由于野生灵芝来源有限 ,现进行人工培养及发
酵培养。我们在进行椴木培养灵芝的同时 ,对其有效
成分进行了研究 ,提取分离和鉴定了灵芝中具有苦
味的成分之一的灵芝酸 B,本研究以其为指标 ,测定
了灵芝中灵芝酸 B主要分布在灵芝子实体的表皮 ,
其含量顺序如下:菌盖表皮层> 菌盖子实体> 菌柄
> 木栓层> 孢子粉。同时 ,我们还检测了赤芝发酵菌
丝体和紫芝 ,赤芝发酵菌丝体中未测出灵芝酸 B,紫
芝中含有极其微量的灵芝酸 B,因此该成分同时可
做为区别赤芝及其发酵菌丝体的指标之一。
3. 2　在进行灵芝 (赤芝 )的保管和贮藏过程中 ,我们
发现灵芝由于含有丰富的营养成分 ,较易生虫 ,并且
虫蛀的部分多发生在木栓层部位 ,而灵芝子实体的
表皮一般不易发生虫蛀 ,是否由于表皮部位含有较
多苦味成分 ,尚待进一步研究。
参考文献:
[1 ]　吴兴亮 . 灵芝及其他真菌彩色图志 [M ] . 贵州:贵州科技出版
社 , 1997.
[2 ]　严永清 . 中药辞海 (第二卷 ) [ M ] . 北京:中国医药科技出版
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acids A and B, tw o new lanostan e typ e bi t ter tri terpen es f rom
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1982, 65( 2): 611-619.
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ponen ts of Ganoderma lucidum [ J] . Planta Maccica, 1997,
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[ 5 ]　 Kiroshi K, Wak ako T, Kiyoe S, et al . Th e Biologically active
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[6 ]　徐鸿华 ,丁　平 ,贺红等 . 灵芝优良菌株的引进与开发 [ J ]. 中
药材 , 1998, 21( 8): 383-385.
薄层色谱 -分光光度法测定黄芪粉针剂中黄芪甲苷的含量
杨春欣 ,孙丽霞 ,许根英
(复旦大学医学院附属中山医院 ,上海　 200032)
摘　要: 目的　建立黄芪粉针剂的质量控制方法。方法　采用薄层色谱 -分光光度法对黄芪粉针剂中的主要成分黄
芪甲苷进行含量测定 ,展开剂为氯仿 -甲醇 -水 ( 65∶ 30∶ 10) ,测定波长为 418 nm。 结果　回归方程 A= 1. 538C+
0. 189,r = 0. 999 8,在 80～ 240μg点样量范围内 ,吸光度与点样量呈良好的线性关系 ,平均回收率为 98. 68% ,
RSD= 2. 52% (n= 5)。结论　本方法使用简单仪器测定 ,结果可靠 ,专属性强 ,可作为黄芪粉针剂的质量控制标准。
关键词: 黄芪粉针剂 ;薄层色谱 -分光光度法 ;黄芪甲苷
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 04 0312 03
Determination of content of astragaloside A in Astragalus membranaceus powder for
injection by TLC-spectrophotometry
Y ANG Ch un-x in, SUN Li-xia , XU Gen-ying
　　 ( Affilia ted Zhong shan Hospital, Medical Co lleg e of Fudan Univ ersity, Shanghai 200032, China)
Abstract: Object　 To develop a method fo r the quality cont ro l of Astrgalus membranaceus ( Fisch. )
Bge. powder for injection ( AM PI) . Methods　 TLC-spect ropho tometry w as used to determine the content
o f astragalo side A in AMPI. The mobile phase w as chlo roform-methano l-wa ter ( 65∶ 30∶ 10) and detected
a t the wave leng th o f 418 nm. Results　 The reg ression equation w ithin the spo tted range o f 80～ 240μg
w as A= 1. 538 C+ 0. 189, wi th good linearity, r= 0. 999 8. Th e average recovery rate w as 98. 68% and
RSD= 2. 52% (n = 5) . Conclusion　 The method used simple and easily available instruments and the
rusul ts obtained w ere reliable and specific, sui table fo r the quality cont rol of AM PI.
·312· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 4期
收稿日期: 2000-06-12作者简介:杨春欣 ( 1951-) ,男 ,上海市人 ,副主任药师。 主要从事中药和天然药物有效成分的提取分离 ,中药新剂型及其质量分析的研究。 1991年公派到日本津村生物化学研究所研修 ,现为国家自然科学基金项目 ( 3987916)负责人 ,在国内外期刊和学术会议上发表论文 30余篇。 Tel: ( 021) 64041990转 2135　 E-mai l: cx yang @ citi z. net
* 复旦大学医学院 94级药学专业本科实习生