全 文 ：· 药剂与工艺 ·
H PI
,
C 法测定成药二妙丸 、三妙丸 、四妙丸及知柏
地黄丸中IJ、案碱 、掌叶防己碱和药根碱的含量
南京中医药大学 (2 1 0 0 29) 潘 杨 米 王天 山 马国祥 郭立玮
摘 要 建立了反相高效液相法测定成药二妙丸 、三妙丸 、四妙丸及知柏地黄丸中小璧碱 、 掌叶防
己碱和药根碱含量的方法 。 固定相为 N ov a 一Pa k c : 8 , 4 拜m , 3 . 9 m m (i . 〔1. ) x 1 5 0 m m HP L c 柱 ; 流动
相为乙睛 一水 (1 : 1 , 每 1 0 0 0 m l 含磷酸二氢钾 3 . 4 9 及十二烷基硫酸钠 1 . 7 9 ) ; 检测波长为 3 45
n m ; 小壁碱 、 掌叶防 己碱和 药根碱的加样回收率分别为 9 8 . 67 士 2 . 3 8 % , 9 8 7 5 士 1 . 67 % , 98 . 38 士
北. 3 1% 。
关键词 HPI 尤 法 二妙丸 三妙丸 四妙丸及知柏地黄丸 小璧碱 掌 叶防己碱 药根碱
成药二妙丸 、三妙丸及知柏地黄 丸为药
典方 , 四炒丸为部颁标准方 , 四者的主要组成
药物之一均为黄柏 , 主要含小璧碱 , 其次为掌
叶防 己碱 、药根碱等 。关于三个生物碱和药根
碱含量的测 定方法 , 已报道的有薄层扫 描
法 〔‘’、高效液相法 〔2J 等 。 我 们在有关文献 〔3 j的
基础 上 , 建立 了一 种灵敏 、专属 、 一可靠的高效
液相色谱法 , 用 以同时测定二妙 丸 、三妙丸 、
四妙丸及知柏地黄丸中这三种生物碱的含
量 。
1 实验部分
1
.
1 仪器和材料 : 成药样品 , 见表 4 。
1
.
1
.
1 标准品与试剂 : 盐酸小璧碱对照 品
(中国 药品生物制 品检 定所 , 标 准号 7 1 3 -
87 02 )
, 经 H P L C 定量纯 度约为 98 . 2 2 % ;盐
酸掌叶防己碱 、盐酸药根碱对照品 (光谱纯 ,
由中国药科大学赵守训教授提供 ) , 经 H P I一
定量纯度分别约为 98 , 76 %和 96 . 05 % ;关黄
柏药材对照品 (由本校 中药鉴 定教研室提
供 ) , 经 鉴定 为芸 香 科植 物黄 柏 尸he l od , -
d ro n a m u 、n , 己 R u p r . 除去栓皮的干燥树皮 ;
二妙丸 、三妙丸 、四妙丸及知柏地黄丸阴性对
照品 (自制 ) , 成药为市售品 ;川黄柏药材对照
品 (由成都中医学院中药鉴定教研室提供 ) ,
经 鉴 定 为 芸 香 科 植 物 黄 皮树 尸 . ch in en se
S c h n ei d
. 除去栓皮的干燥树皮 。
1
,
1
.
2 仪器 及测 试条件 : 高效液相色谱仪
— W a t e r 。 5 10 泵 , W a t e r S U 6 K 进样 器 ,W at er s 4 8 6 可调 节紫外检测仪 ; C Y 一 1 0 超
远高级色谱工作站 (北京超远电子技术研究
所 ) 。 5 1: im a d z u L ib r o r A E I 一 4 oS Ki 精 密 (十
万分之一 )天平 。 H 6 6 0 2 5 超声清洗机 (无锡
市超声电子·设备厂) 。
1
.
1- 3 色谱条件的选择 : 固定相 : N ov a 一Pak
C
18 柱 , 4 拜m , 3 . 9 m m 冰 1 5 rn 、n (W a t e r s 公
司 ) ;流动相 : 乙睛一水 (1 : 1 , 1 0 0 0 m l一 含磷酸
二氢钾 3 . 4 9 及十二烷基硫酸钠 1 . 7 9 ) ;检
测波长 : 3 t15 n m ;柱温 : 室温 ; 流量 : 0 . 9 m L /
m in ;理论塔板数按小壁碱 、掌叶防 己碱和药
根碱计算不得低于 9 0 0 、 7 5 0 0 和 6 0 0 0 , 此条
件一F 3 种对照品与其它组分达到基线分离 。
1
.
2 标准 曲线的制备 : 精密称取小璧碱 、掌
叶防 己碱和 药根碱对照 品各约 1] . 28 m g 、
1 0
.
4 5 m g 和 n . 07 m g , 用 甲醇 定 容 至 10 0
m L
, 作为储备液 。 分别量取上述溶液 1 m L ,
定容至 25 m L , 作为对照品溶液 。精密吸取对
未 A dd r e s s
:
Pa n Y a n g
,
In s tit u t e o f T r a d lt xo n a l C h in e s e
T r a d itio n a l C h in e se M
e die in e
,
N a n jin g
M
ed ie in e 邑 Ph a r m a e o lo g y , N a n 一in g U l飞iv e r s ity o f
·
1 4 2
·
照品溶液 i 、 2 、 5 、 6 、 1 0 、 1 5 、 3 0 、 4 0 和 6 0 , , L 进
样 , 按上述色谱条件测定峰面积 , 分别以小巢
碱 、掌叶防己碱和药根碱进样量 X (拌g )为横
座标 、峰面积值 Y 为纵座标进行回归计算 ,
结果小聚碱回归方程 Y 一 一 1 67 十一 1 6 6 5 3 9X ,
r 一 0 . 9 9 8 8 ;掌叶防己碱回归方程 Y 一 1 3 50 十-
18 6 8 55 7 X
, r = 0
.
9 9 9 2 ;药根碱回归方程 Y =
1咬场 7 + 1 9 4 3 9 5 0 X , r = 0 . 9 9 9 3 。
1
.
3 进样重现性和稳定性考察 : 精密吸取上
述对照品 5 拜L , 分别于 o 、 1 5 、 3 0 、 6 0 、 1 8 0 和
1 4 4 0 m ih 重复进样 6 次 , 结 果表明 : 小璧碱 、
掌 叶 防 己碱和 药根碱其 R SI ) 、% )分 别 为
]
.
2 8
、
1
.
1 1 和 1 . 1 9 。
1
.
4 样品提取率的考察 : 小璧碱 、 ‘拿叶防己
碱 、药根碱易溶于水 、 甲阵等溶剂 , 我们采用
甲醇作为提取溶媒 , 超声波处理 , 结果表明 :
处理 3 次后 3 种生物碱均可完全提尽 。
1
.
5 样 品测定方法拟定 : 取黄柏药材对照
品 、二妙丸 、三妙丸 、 四妙丸 、知柏地黄丸适
量 , 精密称重 , 置 10 m L 具塞离心管 内 , 加 5
m L 甲醇超 声 提取 1 5 m in , 离 心 (3 0 0 O r / ‘
m in )5 m in
, 倾取上清液 , 过滤 。 重复操作 3
次 , 合并滤液 , 滤纸及残渣用 甲醇清洗 , 过滤 ,
并入上液 , 定容至 25 m L ;用微孔滤膜过滤 ,
弃去初滤液约 3 m l、 , 取续滤液 5 n ll , 备用 。
1
.
6 干扰因素考察 : 取二妙丸 、三妙丸 、四妙
丸 、知柏地黄丸阴性对照品 , 按照样品测定方
法的条件进行试验 , 发现在小璧碱 、 掌叶防己
碱和药根碱处 , 色谱中无干扰峰出现 。
1
.
7 加样回收率试验 : 取已知含量的二妙丸
7 份 , 精密称定 , 其中 6 份加入小璧碱 、掌叶
防 己碱和药根碱对照 品储备液 各 2 、 1 、 。. 2
m l
, , 1 份不加 。 用上述操作条件提取 、测定 ,
计算加样 回收率 : 小璧碱 、掌叶防己碱和药根
碱的加样 回收率 (% )分别为 98 · 6 7 士 2. 38 、
9 8
.
7 5 士 1 . 6 7 士和 9 8 . 3 8 土 2 . 3 1 。
1
.
8 样品中小聚碱 、掌叶防己碱和药根碱的
定性和定量分析 : 精密吸取供试品溶液 , 注入
H P LC 仪中 , 按上述色谱条件测定峰面积 , 用
标准曲线法计算样品中小璧碱 〔(C Z。H 18 N 0 4 )
弋中草药 》1 9 9 7 年第 2 5 卷第 3 期
C I
·
ZH
Z
O 〕、 掌叶防 己碱 〔(C 2 1 H 2 2 N O ; )C I ·
3 H
Z
O 〕和药根碱〔(C 20 H Z oN O ; )C I〕的含量 。 样
品测定结果见表 l 。
表 l 样品中 3 种成分的含量测定结果
掌叶 防己碱
_ 妙丸
妙丸
四妙丸
知柏地黄丸
P c h i刀‘n s e
尸 . a 树 u r 理”子s 召
小璧碱
门 . 艺8 5
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药根碱
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O
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0 0 0 5
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.
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微量
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0
。
0 0 6
0
,
0 10
微量
微 量
微量
0
.
0 0 6
2 结论与讨论
2
.
1 川黄柏 、关黄柏 , 二者成分相似 , 含多种
生物碱 , 但 川黄柏 中小璧碱含 量 (4 . 。% ,
8 0 % )比关黄柏的 (0 . 6 % , 2 . 5 % )高 〔‘J , 我们
的实验结果也证明了这一 点 。小璧碱 、掌叶防
己碱 、药根碱为季钱类生物碱 , 水溶性较好 ,
制剂过程中容易被破坏 ;而它们的抗菌作用
已被确认 , 因此 , 测定其含量对控制成药二妙
丸 、三妙丸 、四妙丸及知柏地黄丸的质量具有
重要意义 。
2
.
2 上述结果表明 , 除知柏地黄丸可能含川
黄柏外 , 其余的成药均含关黄柏 ;粉末的显微
观察结果也支持这一结论 。
·
14 3
.
2
.
3 药典和部颁标准规定 , 黄柏含量二妙丸
为 50 % , 三妙丸为 3 % , 四妙丸为 3 % , 知
柏地黄丸为 7% 。 前三者为水泛丸 , 后者为水
蜜丸 (河南产的知柏地黄丸为浓缩丸 ) 。 对 32
种成药的含量测定结果表 明 , 大部分成药中
含有小璧碱 、掌叶防己碱和药根碱 。
2
.
4 试验中还曾使用 0 . 4 m ol / L 硝酸馁一 甲
醇 一四氢吠喃 (7 0 : 2 0 : 1 0 ) 、 0 . 1 m o l/ L 酒石
酸 一甲醇 一十二烷基磺酸钠 (3 。 : 70 , 1 ) 、水 -
乙睛一四氢吠喃 (5 o : 45 : 5) 和 甲醇一水一乙睛
(4 0
: 3 0 : 3 0
,
1 0 0 0 m L 含磷酸二氢钾 3 . 4 9
及十二烷基硫酸钠 1 . 7 9 )等进行洗脱 , 但出
峰或分离情况均不如现在的流动相好 。
参 考 文 献
l 袁蔼芝 . 浙江药学 , 1 9 8 6 , (上l ) : 10
2 邱晓星 , 等 . 药学学报 , 19 8 6 , 2 1 (6 ) : 6 5 8
3 日本药局方. 第十 二改正 , 第二部 : 18 9
4 全国中草药汇编编写组 . 全 国中草药汇编 . 上册 . 人 民卫
生出版社 , 1 98 6 . 7 6 9
(1 9 9 6
一 1 1
一
0 6 收稿 )
D e t e r m in a tio n o f B e r b e r in e
,
Pa lm a tin e a n d Ja t r o r r h iz in e in E r m ia o W
a n
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Sa n m ia o W a n
,
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a G u o x ia n g
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A r e v e r s e
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Pha se HP L C m e th o d w a s d e s e r ib ed fo r th e d e t e rm in a t io n o f be r be r in e
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T h e th r e e e o n s tit u e n t s w e r e s e p a r a t e d o n a N o v a
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T he a v e r a g e r ee o v e r ie s o f th e th r e e eo n s tit u e n t s w e r e 9 8
.
6 7 士 2 . 3 9 % , 9 8 . 7 5 士 1 .
6 7 %
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.
3 8士 2 . 3 1 % r e sp e e tiv e ly .
杜仲的炮制及降压成分提取工艺的研究
华中农业大学食科系 (武汉 4 3 0 0 7 0) 戚 向阳 夸 喻晓辉 张声华 程秋凉
摘 要 研究了杜仲中主要降压成分松脂醇二葡萄糖贰的提取条件及不同炮制工艺对其含量的
影响 。 结果表明 : 杜仲粉采用 70 % 乙醇水溶液 , 于 90 ℃温度下以 l : 6 的料液比浸提 3 次 , 每次 30
m in
, 松脂醇二葡萄糖贰的浸出量最高 。 杜仲的炮制中 , 温度及时间对松脂醇二葡萄糖贰含量影响
最为显著 , 随着温度升高 , 时间的延长 , 其含量下降 。 浸盐量对松脂醇二葡萄糖试含量的影响不大 。
关键词 杜仲 炮制 浸提 松脂醇二葡萄糖贰
杜仲 E u c o m m ia u lm o id e : O liv . 具有很
好的降压 作用 , 且 疗效平稳 、无毒 、 无 副作
用 〔‘〕。 美国威斯康星大学研究认为 ,杜仲中主
要的降压成分为松脂醇二葡萄糖贰 〔2〕 。
杜仲临床多经炮制后入药 , 炮制方法有
盐炒 、砂烫 、烘制等 , 多年来国内外对杜仲炮
制工艺虽做了一些探讨〔“ , 4〕 , 但有关炮制工艺
对杜仲中有效成分的影 响尚未见有关报道 。
据 文献报道 〔, , ‘ , 5〕, 经不 同方法炮制的杜仲 ,
以烘制品的质量较好 , 故本文以烘制为炮制
方法 , 研究烘制工艺对杜仲 中主要降压成分
松脂醇二葡萄糖贰的影响及其最佳的提取条
件 , 为最佳炮制工艺的选择及松脂醇二葡萄
糖贰的进一步纯化提供一定的理论依据 。
A dd r e s s
:
Q i X i
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,
D e p a r tm e n t o f Fo o d S e ie n e e s
,
M id d l
e C h in a A g rie u ltu r e U n iv e r sity
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1 4 4
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