全 文 ：反相高效液相色谱法测定 木属植物中
二萜酸 、三萜酸和三萜皂苷的含量
许旭东　张曙明　张聿梅　杨峻山　王春兰　朱兆仪　陈建民
(中国医学科学院 、中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京 100094)
摘要　为进一步探讨 木属草本自然群 、木本自然群中植物的有效成分的差异 ,本文首次建立了
木属植物中 6 种化学成分的反相高效液相色谱法 , 对本属 11 种植物中该 6 种成分进行了定量分析。 色
谱柱为 Supelco SIL-LC-18 , 流动相为甲醇—1%乙酸—四氢呋喃(500∶110∶1);检测波长为 205 nm , 流速
1.2 ml·min-1 , 6 种成分的线性范围分别为 0.135 ～ 2.160 μg , 0.163 ～ 2.610 μg , 0.123～ 1.962 μg , 0.068
～ 1.080 μg , 0.135 ～ 2.160 μg , 0.135 ～ 2.160 μg , 回收率分别为 89.64%, 86.88%, 91.34%, 93.31%,
87.72%和 92.08%。结果提示:二萜类成分是草本自然群区别于木本自然群的特征成分 , 为进一步将
木属中草本和木本两个自然群划分为两个独立的亚属提供了化学分类学的依据。
关键词　反相高效液相色谱法; 木属;二萜酸;三萜酸;三萜皂苷
　　 木属(Aral ia Linn.)植物全世界共有 30
余种 ,主要分布于亚洲 ,少数分布于大洋洲和北
美洲[ 1] 。该属植物以我国为分布中心 ,全属植
物在我国除新疆 、青海和内蒙古等少数省区未
见记录外 ,其他大部分省区皆有分布 ,尤以云南
和四川种类最多 ,约占全国种类总数的三分之
二。东北地区种类较少 ,但蕴藏量大 ,仅延边地
区的蕴藏量就达 3000多吨[ 2] 。特别值得注意
的是该属植物从形态 、地理分布上可明显分为
两个自然群 ,即以 木(A .chinensis)为代表的
20个种木本自然群和以食用土当归(A .
cordata Thunb.)为代表的 10个种的草本自然
群[ 1] 。因而通过对该属植物特征化学成分的
分析找出木本自然群和草本自然群主要化学成
分的区别 ,从而进一步为将这两个自然群划分
为两个独立的亚属 ,即木本亚属和草本亚属提
供理论依据。 木的根 、根白皮及叶在唐初就
作药用 ,主治糖尿病 、肾脏病 、胃溃疡 ,舒筋活
血 、散瘀止痛[ 3] 。药理学研究表明 木具有
收稿日期　1998-01-23
本文为自然科学基金资助项目
“适应原”样 、神经系统 、心血管作用及降血脂 、
降血压 、降血糖 、抗癌和保肝作用等药理活
性[ 2] 。通过对该属植物的化学成分分析 ,对进
一步开发和利用这一丰富的自然资源具有重要
意义。
有关 木属植物中化学成分的含量测定 ,
仅见齐墩果酸 、β-谷甾醇和皂苷的薄层扫描测
定及气质联用定量测定其挥发油含量[ 4～ 6] ,但
未见应用高效液相色谱法对多种成分定量分析
的报道 。本文建立了 木属植物中 6种化学成
分 [ oleanolic acid 28-O-β-D-g lucopyranoside
(I), oleanolic acid 3-O-α-L-arabinopyranoside
(I I), 3β-hydroxy-oleana-11 , 13(18)-dien-28-oic
acid(III), (ent)-pimara-8(14), 15-dien-19-oic
acid(IV), oleanolic acid(V), 3-ox-oleana-12-
en-28-oic acid(VI)] 的反相高效液相色谱测定
法 。同时较系统地对该属植物中两个自然群所
包括的全部 5个组中 30个种的 11种植物所含
这 6种成分进行了定量分析 。
实 验 部 分
1　仪器 、药品和试剂
·933·药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1998 , 33(12)∶933 ～ 936
DOI :10.16438/j.0513-4870.1998.12.011
高效液相色谱仪 , 包括 Waters 510 型 ,
Waters 490E 检测器 , Waters U6K 进样器 ,
Waters Baseline 810 色谱工作站(均为美国
Waters公司产品);CX-250型超声波清洗器(北
京医疗设备二厂)。
6种对照品(1种二萜酸 , 3种三萜酸 ,2 种
三萜皂苷)均为作者从该属植物中提取 、分离并
经四谱鉴定 ,纯度均在 95%以上 。
植物样品除食用土当归 ,头序 木由谭策
铭教授采集外 ,均由本所朱兆仪教授提供并鉴
定。
重蒸馏水 ,甲醇(分析纯 ,色谱纯), 36%乙
酸(分析纯),四氢呋喃(分析纯)等 。
2　色谱条件
色谱柱:Supelco S IL-LC-18(4.6 mm×150
mm ,5 μm ,美国 Supelco公司);流动相:甲醇 —
1%乙酸—四氢呋喃(500∶110∶1 , pH 3.4);柱
温:室温;灵敏度:0.016 AUFS;流速:1.2
ml·min-1;检测波长:205 nm 。
3　检测波长的选择
由于 6种对照品(I ～ VI)的紫外吸收均为
>C=C<的末端吸收 ,根据实验情况 ,选择 205
nm为检测波长 。
4　标准曲线
分别准确称取 I ～ V I 对照品 2.40 , 1.45 ,
2.18 ,1.35 , 1.20 和 2.94 mg ,置于 1 , 2 , 2 , 1 , 2
和 1 m l量瓶中 ,用甲醇溶解并定容 ,制成对照
品储备液;依次准确吸取 0.36 , 0.36 , 0.36 ,
0.16 ,0.36和 0.36 ml置于 2 ml量瓶中 ,用甲
醇定容 ,制成混合对照品储备液 。分别将上述
混合对照品储备液用甲醇稀释成 1 , 2 , 4及 8
倍 ,形成 5个浓度梯度的标准溶液 。依次吸取
1 μl进样 ,在 205 nm 处检测 ,以峰高(X)为横
坐标 ,成分含量(Y)为纵坐标 ,得回归方程 、相
关系数及线性范围见表 1。
Tab 1　Calibration data of I ～ VI(n=5)
Constituent tR / min 　Regression equation γ Linear range / μg
I 7.45 Y=10.9362×10-5X-10.6617 0.9984 0.135～ 2.160
II 12.27 Y=12.4784×10-5X-9.2073 0.9966 0.163～ 2.610
III 17.31 Y=5.0237×10-5X-3.2184 0.9959 0.068～ 1.080
IV 18.36 Y=12.3110×10-5X-6.2267 0.9983 0.123～ 1.963
V 21.24 Y=14.0321×10-5X-8.9945 0.9964 0.135～ 2.160
VI 25.58 Y=0.1467×10-5X-0.0867 0.9956 0.248～ 2.646
I.Oleanolic acid 28-O-β-D-g lucopy ranoside;I I.Oleanolic acid 3-O-α-L-arabinopy ranoside;I II.3β-Hydroxy-
o leana-11 , 13(18)-dien-28-oic acid;IV.(ent)-Pimara-8(14), 15-dien-19-oic acid;V.Oleanolic acid;VI.3-
Ox-oleana-12-en-28-oic acid.
5　提取方法的选择
曾采用热回流 0.5 , 1和2 h ,超声 10 , 20和
30 min ,结果热回流 1 h和 2 h对提取率没有差
异 ,但较 0.5 h 高;超声 30 min的提取率与热
回流 1 h无差异 ,但热回流法提取出的杂质较
多 ,对检测有一定干扰 ,故本方法采用超声 30
min。
6　样品液的制备
准确称取干燥样品粉末 1.0 g 置于 100 ml
具塞三角瓶中 ,加入甲醇 50 m l浸泡过夜 ,超声
30 min ,取上清液 25 ml作为检测样品液 ,进样
10 μl进行色谱分析 。如果浓度超出或低于标
准曲线的线性范围 ,则相应地稀释或浓缩至一
定体积后 ,再进样分析 。
7　方法精密度测定
取同一生药样品 5份(n =5),用上述方法
测定 , 测得 I ～ V I 的 RSD(%)分别为 2.62 ,
5.15 ,13.16 , 1.92 , 6.23 和 1.84。证明该法是
可行的 。
8　加样回收率试验
·934· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1998 , 33(12)∶933 ～ 936
准确称取土当归粉末1.0 g 6份 ,其中 3份
作为对照 ,其余 3份加入一定量的混合标准品
溶液混匀 ,自然挥干后 ,依上述方法制备样品
液 ,测定回收率 。结果见表 2。6种成分的平均
回收率为 86.88%～ 93.31%。
Tab 2　Recoveries of I～ VI in A.cordata(n=3)
Constituent Added/μg Found/μg Recovery/ % RSD/ %
I 41.04 36.79±0.64 89.64±0.02 1.74
II 49.59 43.08±0.76 86.88±0.02 1.76
III 37.28 34.05±0.40 91.34±0.01 1.17
IV 20.52 19.18±0.11 93.31±0.54 0.57
V 41.04 36.00±0.73 87.72±0.02 2.01
VI 50.27 46.29±0.43 92.08±0.09 0.93
I～ VI cf Tab 1.
9　样品分析
按样品液制备项操作 ,对各样品进行定量
测定 ,计算含量 ,结果见表 3 ,色谱图见图 1。
Fig 1 　Chromatog ram of I ～ VI (A)and A .
cordata Thunb.(B)detected at 205 nm.I～ VI
cf Tab 1.
Tab 3　Contents of I ～ VI in different species
Classification Group Species
Content / μg·g -1
I II III IV V VI
Wooden S ect.Aral ia A.echinocaul is + 0.27 + 0.54 + +
A.decaisneana 0.17 0.23 0.09 0.69 - -
A.chinensis var.nuda 0.24 0.38 0.18 + - 0.18
A.chinensis var.dasyphyl loides 0.11 0.49 0.09 0.36 + -
S ect.Digi tipanicu la Hoo A.elata 0.32 0.33 + 0.79 + +
A.hupehensis 0.10 0.57 0.10 0.12 + 0.10
S ect.Capi tuligerae Harm s A.dasyphylla 0.09 0.09 + 0.91 + +
Herb S ect.Genuinae Harms A.cordata 0.60 1.61 + 0.11 0.59 0.95
S ect.Anomalae Harms A.hen ryi + 1.49 + 0.11 0.19 +
A.fargesi i 3.56 1.19 0.11 1.26 1.95 0.34
A.atrop urp urea 2.77 1.58 0.17 1.43 1.98 0.99
I～ VI cf Tab 1.+:Content is less than 0.08μg·g -1 , -:Not detected.
讨 论
本研究测定了 11种(包括两个变种) 木
属植物的 6种化学成分 ,即其中 1 种二萜酸 , 3
种三萜酸和 2种单糖三萜皂苷 。由于该属植物
从形态 、地理分布明显分为两个自然群 ,通过本
分析方法比较两个自然群的化学成分的相对含
量后 ,可以清楚地发现 ,草本自然群中二萜酸 、
三萜酸 、单糖三萜皂苷含量较高 ,而木本自然群
中相对较低 ,特别是二萜类成分含量很低或检
测不到。因而可以认为二萜类成分是草本自然
群区别于木本自然群的特征成分。该分析结果
为进一步将 木属中草本和木本两个自然群划
分为两个独立的亚属提供了化学分类学的依
据 。
参 考 文 献
1　中国科学院中国植物志编委会.中国植物志.第 54
卷.北京:科学出版社 , 1978∶150
2　许旭东 , 杨峻山 , 朱兆仪. 木属植物三萜研究进
展.药学学报 , 1997 , 32∶711
3　江苏新医学院.中药大词典(下册).上海科学技术
出版社 , 1986∶2440
4　王忠壮 ,邓汉臣 , 苏中武 ,等.8种 木属药用植物化
·935·药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1998 , 33(12)∶933 ～ 936
学成分分析.中国中药杂志 , 1994 , 19∶6
5　王忠壮 ,张凤春 , 苏中武 , 等.太白 木属的生药学
及化学成分分析.中国中药杂志 , 1995 , 30∶199
6　王忠壮 , 苏中武 , 胡晋江 , 等.虎刺 木的资源调查
及化学成分分析.中草药 , 1996 , 27∶140
DETERMINATIONOF DITERPENOIC ACID , TRITERPENOIDS
AND TRITERSAPONINS IN ARALIA BY RP-HPLC
Xu Xudong (Xu XD), Zhang Shuming (Zhang SM), Zhang Yumei(Zhang YM), Yang Junshan
(Yang JS), Wang Chunlan(Wang CL), Zhu Zhaoyi(Zhu ZY)and Chen Jianmin(Chen JM)
(Inst itute of Medicinal Plant Development , Chinese Academy of Medical Sciences
and Peking Union Medical College , Beijing 100094)
ABSTRACT　In this paper , an accurate RP-HPLC method for the determination of oleanolic acid
28-O-β-D-glucopy ranoside (I), oleanolic acid 3-O-α-L-arabinopy ranoside (II), 3β-hydroxy-oleana-
11 ,13(18)-dien-28-oic acid(III), (ent)-pimara-8(14),15-dien-19-oic acid(IV), oleanolic acid(V)
and 3-ox-oleana-12-en-28-oic acid (VI)in 11 species of Aral ia Linn.was described.The analytical
column used w as Supelco SIL-LC-18.The mobile phase w as MeOH —1%HOAc—THF (500∶110∶1 ,
pH 3.4).The f low rate w as 1.2 ml·min-1 .The detection w aveleng th w as 205 nm.The linear
ranges of I ～ VI w ere 0.135 ～ 2.160 , 0.163 ～ 2.610 , 0.123 ～ 1.962 , 0.068 ～ 1.080 , 0.135 ～
2.160 and 0.248 ～ 2.646μg , respectively.The recoveries of I ～ V I were f rom 86.88% to 93.31%.
Detailed comparison of the diterpenoic acid , triterpenoids and tri tersaponins for the group of herbal
w ith those of woody the content of diterpenoic acid in herbal is higher than that of in w oody.It
showed that the diterponic acid is the specific consti tuent in the group of herbal , which is the
difference to w oody.This conclusion provides the evidence of the chemical classification for dividing
the g roups of herbal and w oody into two distinct subgenus.
KEYWORDS　RP-HPLC;Aralia;Diterpenoic acid;T riterpenoic acids;Tritersaponins
·936· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1998 , 33(12)∶933 ～ 936