全 文 : 96
作者简介:付成效,男,主管药师,硕士研究生,主要从事临床药学与中药质量控制,Tel:(0734)8279029,E-mail:paulfcx@
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反相高效液相色谱法测定
生地茶止咳合剂中岩白菜素的含量
付成效1,刘高峰2,邹渭洪1,龙宇3,刘琪4 (1.南华大学附属第一医院药剂科,湖南 衡阳 421001;2.中美上海
施贵宝制药有限公司,上海 200240;3.南华大学附属第二医院药剂科,湖南 衡阳 421001;4.衡阳市中医院药剂科,湖南 衡
阳 421001)
摘要:目的 建立测定生地茶止咳合剂中岩白菜素含量的反相高效液相色谱法。方法 采用Phenomenex C18-ODS
(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:甲醇-水 (23∶77),流速:1.0mL·min
-1,检测波长:275nm,柱
温:30℃。结果 岩白菜素在0.040 8~0.408μg线性关系良好, (r=0.999 9);平均回收率为98.5% (n=9)。
结论 该方法操作简便、快速,适用于生地茶止咳合剂中岩白菜素的含量测定。
关键词:生地茶止咳合剂;反相高效液相色谱法;岩白菜素;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2012)02-0096-03
doi:10.3969/j.issn.1672-2981.2012.02.005
RP-HPLC determination of bergenin in Shengdicha Zhike Heji
FU Cheng-xiao1,LIU Gao-feng2,ZOU Wei-hong1,LONG Yu3,LIU Qi 4 (1.Department of Pharmacy,First
Hospital Attached to Nanhua Medical University,Hengyang Hunan 421001;2.Sino-American Shanghai Squibb
Pharmaceuticals Ltd,Shanghai 200240;3.Department of Pharmacy,Second Hospital Attached to Nanhua Medi-
cal University,Hengyang Hunan 421001;4.Department of Pharmacy,Hengyang Hospital of Traditional Chi-
nese Medicine,Hengyang Hunan 421001)
Abstract:Objective To establish an RP-HPLC method for the determination of bergenin in Shengdicha Zhike Heji.
Methods The column was Phenomenex C18-ODS(250mm×4.6mm,5μm).The mobile phase was methanol-water
(23∶77)with a flow rate of 1.0mL·min-1.The detection wavelength was 275nm.The column temperature was
30℃.Results The calibration curve was linear over 0.040 8-0.408μg (r=0.999 9).The average recovery of ber-
genin was 98.5% (n=9).Conclusion The method is simple,quick,and suitable for the content determination of
bergenin in Shengdicha Zhike Heji.
Key words:Shengdicha Zhike Heji;RP-HPLC;bergenin;content determination
生地茶止咳合剂是由矮地茶、生地、杏仁、桔梗等中药
组方制成的中药制剂,具有宣肺清热,祛痰止咳之功效。临
床上治疗慢性支气管炎、肺炎、肺结核咳嗽等症。现行质量
标准中只有常规检查与理化鉴别,无定量控制指标。方中矮
地茶为君药,所含主要有效成分岩白菜素具有止咳、增强免
疫力的作用[1-3],故选择作为本制剂的含量测定对象。本实
验采用反相高效液相色谱法 (RP-HPLC)对生地茶止咳合
剂中岩白菜素含量进行了测定,为该制剂的质量控制提供了
定量检测方法。
1 材料
1.1 仪器
HP1100型高效液相色谱仪,HP1100 色谱工作站,
VWD紫外检测器 (美国惠普公司),光学读数分析天平
(型号:TG328A,精密度:万分之一),超声波清洗器 (北
京医用设备厂)。
1.2 试药
岩白菜素对照品 (中国药品生物制品检定所,供含量测
定用,批号:111532-200202),生地茶止咳合剂 (医院制剂
室,批号:20100321、20100524、20100725,规格:50mL·
袋-1),甲醇 (色谱纯,Tiada试剂厂),水为重蒸馏水,其
他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱 柱:Phenomenex C18-ODS 色 谱 柱 (250 mm×
4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水 (23∶77);检测波长:
275nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:30 ℃;灵敏度:
2AUFS;进样量10μL。理论板数以岩白菜素计≥2 500。
2.2 溶液的制备
Central South Pharmacy.February 2012,Vol.10No.2 中南药学2012年2月第10卷第2期
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2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对照品
10.2mg,置25mL量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,
摇匀;精密量取10mL,置100mL量瓶中,加甲醇至刻度,
摇匀,即得40.8μg·mL
-1的岩白菜素对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取本品5mL置25mL
容量瓶中,加入适量甲醇,超声处理 (200 W,40kHz)
15min,放冷,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤
液作为供试品溶液。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方量并以相同工艺制备
缺矮地茶药材的阴性样品,照 “2.2.2”项下方法处理,得
阴性样品溶液。
2.3 系统适应性试验
照 “2.1”项下色谱条件,精密吸取供试品、对照品、
阴性样品溶液各10μL,分别注入色谱仪。供试品色谱中在
与对照品色谱图相应的位置上有一相同的色谱峰,而阴性样
品溶液无干扰 (见图1)。
图1 生地茶止咳合剂反相高效液相色谱图
Fig 1 RP-HPLC chromatogram of Shengdicha Zhike Heji
A.供试 品 (sample);B.对 照 品 (reference);C.阴 性 样 品
(negative sample);1.岩白菜素 (bergenin)
2.4 线性关系考察
取岩白菜素对照品溶液 (40.8μg·mL
-1),加入甲醇
依次稀释成质量浓度为4.08、8.16、10.2、16.32、20.4、
40.8μg·mL的系列对照品溶液,分别精密吸取10μL注入
高效液相色谱仪,测定。以峰面积A 为纵坐标,以浓度C
(μg·mL
-1)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程:A=
37.10C-29.86,相关系数r=0.999 9。结果表明岩白菜素
在0.040 8~0.408μg线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液10μL,重复进样6次,以岩
白菜素峰面积积分值计算,结果RSD=1.3% (n=6)。
2.6 稳定性试验
分别精密吸取同一样品供试溶液10μL,于0、2、4、
8、12、24、48h进样,记录岩白菜素峰面积积分值并计算,
RSD=1.5% (n=6)。结果表明,供试品溶液在48h内保
持稳定。
2.7 重复性试验
取同一批 (批号为20100321)样品6份,制备供试品
溶液,按 “2.1”项下色谱条件,测定其岩白菜素含量。结
果岩白菜素峰面积的RSD为0.68% (n=6)。
2.8 加样回收试验
精密吸取已知含量的样品 (0.058 0mg·mL-1)5mL
9份,分成高、中、低3组,加入一定量的岩白菜素对照品
溶液,然后按 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液,并测定
含量,计算回收率,结果平均回收率为98.5%,RSD 为
0.82% (见表1)。
表1 岩白菜素加样回收试验结果
Tab 1 Recovery of bergenin
样品含量
(sample
content)
/mg
对照品
加入量
(added
amount)
/mg
测得量
(detected
amount)
/mg
回收率
(recovery)
/%
平均
回收率
(average
recovery)
/%
RSD
/%
0.290 0 0.204 0 0.489 3 97.8
0.290 0 0.204 0 0.493 3 99.7
0.290 0 0.204 0 0.490 9 98.5
0.290 0 0.306 0 0.593 3 99.1
0.290 0 0.306 0 0.589 3 97.8 98.5 0.82
0.290 0 0.306 0 0.591 2 98.5
0.290 0 0.408 0 0.691 9 98.5
0.290 0 0.408 0 0.695 1 99.3
0.290 0 0.408 0 0.684 7 96.8
2.9 样品测定
按拟定的含量测定方法,测定3批样品中岩白菜素的含
量,结果见表2。
表2 生地茶止咳合剂中岩白菜素的含量测定
Tab 2 Determination of bergenin in Shengdicha Zhike Heji(n=3)
批号
(Lot No.)
含量 (content)
/mg·mL-1
RSD
/%
20100321 0.058 0 1.3
20100524 0.055 0 1.2
20100725 0.062 2 0.95
3 讨论
3.1 含量控制问题
本合剂中每毫升相当于矮地茶0.025g,按照中国药典
2010年版一部规定,矮地茶中含岩白菜素≥0.50%,以及水
提取转移率≥40%进行计算,本合剂中含岩白菜素理论上≥
0.05mg·mL-1,3批制剂含量均符合此标准。
3.2 测定波长的选择
取岩白菜素对照品适量,加甲醇制成对照品溶液,置紫
外分光光度计记录其紫外吸收光谱,结果显示,岩白菜素在
275nm波长处有最大吸收,故选择275nm作为测定波长。
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3.3 提取时间的考察
实验考察了样品超声提取10、15、30min对岩白菜素
含量测定的影响,结果表明样品在超声提取15min时,含
量已基本提取完全,因此方法中采用超声提取15min。
3.4 流动相的考察
参照中国药典2010年版一部[4]和有关文献[5-12],对流
动相进行考察,发现不需加入酸液或缓冲液即可获得良好的
色谱峰。考察了甲醇-水系统 (20∶80、23∶77、18∶82),
在甲醇-水=23∶77流动相条件下,出峰时间适中,未见有
前沿峰,故选择作为本实验的流动相。
参考文献
[1] 吕修美,王军宪.岩白菜属植物的研究进展 [J].中药材,
2003,26 (1):58-60.
[2] 李萍萍,杨生超,曾云恒.岩白菜素药用植物资源研究进展
[J].中草药,2009,40 (9):1500-1505.
[3] 雷载权.中药学[M].上海:上海科学技术出版社,1995:246-247.
[4] 中国药典2010年版.一部 [S].2010:338.
[5] 邓茂芳,田永华.PLC法测定矽肺宁片中岩白菜素的含量
[J].中国药品标准,2005,6(2):22-23.
[6] 周文枭,崔德斌.高效液相色谱法测定抗痨胶囊中岩白菜素的
含量 [J].医药导报,2004,23(10):777-778.
[7] 王晓琼,康红英,陈声晶.RP-HPLC法测定地茶止咳露中岩
白菜素的含量 [J].中国药事,2010,24 (12):1224-1225.
[8] 魏学君,任文学,陈占立,等.反相高效液相色谱法测定复方矮地
茶胶囊中岩白菜素含量 [J].中国药业,2009,18(22):29-30.
[9] 王桂影,冯学锋,黄文华,等.岩白菜药材质量标准研究 [J].
中国实验方剂学杂志,2010,16 (8):38-40.
[10] 王光发,廖正根,梁新丽,等.HPLC测定岩白菜及四臣止咳颗
粒中岩白菜素的含量 [J].中成药,2009,31(11):1799-1801.
[11] 罗定强,杨瑞瑞,吕桌,等.HPLC法测定愈伤灵胶囊中岩白
菜素的含量 [J].安徽医药,2009,13 (1):37-38.
[12] 谢一辉,张叶青,邓鹏,等.HPLC测定安痛藤中岩白菜素的
含量 [J].中国现代药学杂志,2008,25 (4):319-320.
(收稿日期:2011-11-03;修回日期:2011-11-30)
基金项目:浙江省教育厅一般项目 (No.Y201121364)。
作者简介:陆小云,女,硕士研究生,主要从事中药制药过程分析与质量控制,Tel:(0571)88203191,E-mail:lxy-cloud@126.com
*通讯作者:楚楚,博士,讲师,主要从事中药活性成分与质量标准研究,Tel:(0571)88320613,E-mail:chuchu@zjut.edu.cn
超高效液相色谱法同时测定
白芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量
陆小云,楚楚*,颜继忠 (浙江工业大学,杭州 310014)
摘要:目的 采用超高效液相色谱法 (UPLC)同时测定白芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。方法 采用 Agilent
Extend-C18 (4.6mm×50mm,1.8μm)色谱柱,以流动相乙腈 (A)-0.2%乙酸溶液 (B)梯度洗脱;柱温30℃;
流速0.5mL·min-1;检测波长230nm。结果 芍药苷和芍药内酯苷分别在0.011 6~1.45 (r=0.999 9)、0.008~
1mg·mL-1 (r=0.999 9)呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.6%、97.5%,RSD 分别为1.4%、2.2%。
结论 该法快速简便,灵敏度高,准确可靠,可用于白芍中有效成分含量的快速测定及白芍的质量控制。
关键词:白芍;芍药苷;芍药内酯苷;超高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2012)02-0098-03
doi:10.3969/j.issn.1672-2981.2012.02.006
Simultaneous determination of paeoniflorin and
albiflorin in Radix Paeoniae Alba by UPLC
LU Xiao-yun,CHU Chu*,YAN Ji-zhong (Zhejiang University of Technology,Hangzhou310014)
Abstract:Objective To establish a UPLC method for the simultaneous determination of paeoniflorin and albiflorin in
Radix Paeoniae Alba.Methods Agilent Extend-C18 (4.6mm×50mm,1.8μm)was used with acetonitrile(A)-
0.2%acetic acid solution (B)as the mobile phase in gradient elution [0-2.5min,8%-12%A;2.5-10min,
12%-20%A].The flow rate was 0.5mL·min-1,the column temperature was 30℃,and the detection wavelength
was 230nm.Results The linear ranges of paeoniflorin and albiflorin were 0.011 6-1.45(r=0.999 9)and 0.008-
1mg·mL-1 (r=0.999 9);the average recoveries were 98.6%and 97.5%;and the RSDs were 1.4%and 2.2%.
Central South Pharmacy.February 2012,Vol.10No.2 中南药学2012年2月第10卷第2期