全 文 ：[炮制]
RP-HPLC测定不同产地鬼灯檠中岩白菜素的含量
孙诗清 , 李多伟 , 郭培莹 , 王 凡 , 陈俐宏
(西北大学生命科学学院 ,陕西 西安 710069)
收稿日期:2003-01-24
作者简介:孙诗清(1980 ～ ), 男 , 内蒙古人 , 中药学硕士 , 主要从事天然产物中有效成分提取 、分离及活性研究 , 电话:029-7712360 ,
8302411。
关键词:鬼灯檠;岩白菜素;RP-HPLC
摘要:目的:用反相高效液相色谱法测定陕西不同地区鬼灯檠中岩白菜素的含量。 方法:采用 Symmetry C18色谱柱
(5μm , 4.6mm×150mm), 流动相为甲醇-水(25∶75), 流速为 1.0m L·min-1 , 柱温为(30±1)°C ,检测波长为 275nm。结果:
岩白菜素在 0.8～ 4.0μg 呈良好的线性关系(r =0.9993), 方法回收率为 99.95%, 岩白菜素的相对标准偏差为 3.0%(n
=5),最低检测限为 0.1ng 。结论:本方法快速 、简单 、灵敏度高 , 岩白菜素含量与原料产地有一定的关系。
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2003)12-0979-03
Determination of bergenin in Rodgeris aesculifolia Batal from different sources by
RP-HPLC
SUN Shi-qing , LI Duo-wei , GUO Pei-y ing , WANG Fan , CHEN Li-hong
(College of Li fe Seience , Nor thwest Universi ty , Xi an 710069 , Ch ina)
Key words:Rodgeris aesculi folia Batal;bergenin;RP-HPLC
Abstract:Objective:To establish a RP-HPLC for determination of bergenin in Rodgeris aesculi fol ia batal f rom
different sources.Methods:Chromatographic conditions were as follows:C18 column(5μm , 4.6mm ×150mm ,
i.d), was adopted , mobile phase consisted of 25% ethanol and 75%water.The column temperature w as set at
(30±1)°C.The flow rate w as 1.0mL·min-1 and the detection wavelength was at 275nm .Results:The
method was proved to be linear in the range of 0.8 ～ 4.0μg w ith a regression coef ficient of 0.9993.The average
recovery was 99.95% with RSD3.0%(n =5).The minimum detection limi t w as 0.1ng .Conclusion:The
method is proved to be quick , simple and highly sensitive.There is some relationship between the bergenin con-
tant and different sources of raw materials.
鬼灯檠(Rodgeria aesculi folia Batal)系虎耳草
科多年生草本植物 ,为民间常用草药。其根茎具有
清热解毒 、止血 、止泻等功用 ,对菌痢 、子宫脱垂 、老
年慢性支气管炎等常见病有较好的疗效[ 1] 。经化
学成分分离和鉴定 ,其中止咳的主要成分为岩白菜
素(Bergenin)。鬼灯檠中岩白菜素的含量测定已报
道有比色法[ 2] ,紫外分光光度法[ 3]和纸层析法[ 4] ,
我们用反相高效液相色谱法对其进行了含量测定的
方法研究 ,并对陕西不同地区十一个县内的鬼灯檠
原料进行了含量测定 ,为合理开发利用这一资源提
供有用的数据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
1525型高效液相色谱系统(美国 waters公司)
由 1525 型高压恒流泵 、2487双通道紫外检测器 、
Breeze系统软件组成;UV-265 型分光光度计(日本
岛津公司), HS-3120型超声波萃取器 ,天津市特纳
科学仪器公司;TGL-16C 离心机 ,上海安亭科学仪
器厂。
1.2 材料
岩白菜素对照品:由湖南湘潭制药厂提供 ,红外
光谱数据同文献[ 1] ,熔点 239.5 ～ 240.0°C ,经纸层
析 ,薄层层析检查均为一个斑点;鬼灯檠:采自陕西
不同地区十一个县 ,原植物标本经西北大学生物系
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2003 年 12 月
第 25 卷 第 12期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Dec., 2003
Vol.25 No.12
鉴定 ,确定为鬼灯檠原植物。所用试剂均为分析纯 。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱:美国 Waters 公司 Symmetry C18 柱
(5μm ,4.6mm ×150mm i.d),流动相:甲醇-水(25∶
75),流速:1.0mL·min-1 ,柱温:(30±1)°C ,检测波
长:275nm[ 5] 。
实验表明在本色谱条件下岩白菜素的保留时约
为 5.0min ,峰形好 ,与其他成分无干扰(见图 1)。
图 1 岩白菜素 HPLC图
A 对照品 B样品 1 岩白菜素
2.2 检测波长的选择
用硅胶 G薄层对鬼灯檠提取液进行分离 ,将对
照品溶液中岩白菜素斑点和鬼灯檠提取液中对应斑
点刮下用甲醇溶解 ,做紫外吸收光谱扫描 ,两者在
275nm 处都有最大吸收 ,故高效液相色谱检测波长
采用 275nm 。
2.3 线性关系考察与最低检测限测定
线性关系考察 精密称取岩白菜对照品
10.0mg ,置 50mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并用甲醇定
容至刻度 ,摇匀 ,制成 0.20mg·mL-1对照品溶液 。
从对照品溶液中分别精确吸取 4.0 , 8.0 , 12.0 ,
16.0 ,20.0μL注入高效液相色谱仪中 ,按色谱条件
进行测定 ,记录色谱图和峰面积 。结果岩白菜素峰
面积(Y)与其进样量(X ,μg)有良好的线性关系。线
性范围:0.8 ～ 4.0μg 。回归方程为:Y =2.40176×
10
6
X -479010.1 , r =0.999 26 。
最低检测限测定 将对照品溶液逐级稀释 ,依
次进样 10.0μL ,稀释溶液最终浓度为 0.1×10-6mg
·mL-1 ,得其最低检测限为 0.1ng 。
2.4 精密度和稳定性试验
精确吸取岩白菜素对照品溶液 4μL ,按上述色
谱条件连续进样 5次 ,测定方法的精密度 RSD(%)
为 2.52。精确吸取岩白菜素对照品溶液 4μL ,按上
述色谱条件分别于 0 , 0.5 ,1.0 ,2.0 ,3.0h进样测定 ,
RSD =3.0%。
2.5 提取条件的选择
2.5.1 提取溶剂
精密称取 0.2g 鬼灯檠粉末(过 40目筛)5份 ,
置于 50mL 回流瓶中 ,分别加入甲醇 、乙醇 、氯仿 、丙
酮和醋酸乙酯 10mL ,水浴中回流提取 30min ,过滤 ,
滤液定容至 25mL ,上样前用 0.45μm的微孔滤膜过
滤 。按上述色谱条件吸取 4μL ,进样测定 , 结果表
明 ,甲醇的提取效果最好 ,乙醇次之 ,氯仿 、丙酮和醋
酸乙酯较差 。故选用甲醇作为提取溶剂。
2.5.2 提取方法
取 0.2g 鬼灯檠粉末(过 40目筛)3 份 ,精密称
量 ,(1)置于 50mL 回流瓶中 ,精密加入甲醇 10mL ,
在 60 ～ 65°C 水浴中回流提取 30min ,过滤 ,滤液定
容至 25mL;(2)置 50mL 烧杯中 ,加入甲醇 10mL ,
超声波提取 20min ,离心分离(3000·min-1)5min ,倾
出上清液 ,定容至 25mL;(3)置 100mL 圆底烧瓶中 ,
加入甲醇 60mL , soxhlet 提取器循环提取 12h ,滤液
浓缩并定容至 25mL。上样前用 0.45μm 的微孔滤
膜过滤 ,按上述色谱条件吸取 4μL ,进样测定 ,结果
表明 ,超声波提取优于其他两种 ,故选用超声波提取
方法。
2.5.3 提取次数
取 0.2g 鬼灯檠粉末(过 40目筛),精密称量 ,置
50mL 烧杯中 , 精密加入甲醇 10mL ,超声波提取
20min ,离心分离(3000r·min-1)5min ,倾出上清液 ,
定容至 25mL ,残渣再同样操作 3次 ,每次上清液 ,
定容至 25mL。上样前用 0.45μm 的微孔滤膜过滤 ,
按上述色谱条件吸取 5μL ,进样测定 ,结果表明 3次
已将岩白菜素提取完全 。
2.6 加样回收率试验
采用加样回收法 ,取 0.2g 鬼灯檠粉末(过 40目
筛),精密称量共 7份 ,分别置 50mL 烧杯中 ,其中 6
份各精确加入岩白菜素对照品 , 2份为 5mg , 2份为
10mg ,2 份为 15mg 。精密加入甲醇 10mL ,超声波
提取 20min ,离心分离(3000r·min-1)5min ,倾出上
清液 ,残渣再用同样操作 1 次 ,合并上清液 ,用甲醇
定容至 25mL。上样前用 0.45μm 的微孔滤膜过滤 ,
按上述色谱条件吸取 5μL ,进样测定 ,计算回收率 ,
结果见表 1。
表 1 回收率试验(n=5)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得结果
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
64.0 5.0 68.98 99.6
64.0 5.0 69.01 100.2
64.0 10.0 73.92 99.2 99.95
64.0 10.0 74.06 100.6
64.0 15.0 79.06 100.4
64.0 15.0 78.96 99.7
2.6 样品测定
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取不同产地鬼灯檠粉末按“2.5.3”项下制备供
试品溶液 ,经 0.45μm 微孔滤膜过滤后 ,按上述色谱
条件吸取 4μL ,进样测定 ,结果见表 2。
表 2 不同产地 、不同月份鬼灯檠中岩
白菜素的含量(%)(n=5)
月份 4 5 6 8 10 11
凤县 3.28 2.85 1.98 1.76 3.77 4.48
太白县 3.15 2.58 1.80 1.54 3.15 3.44
略阳县 4.47 2.97 2.41 2.42 3.94 4.69
宁强县 3.01 2.08 1.46 1.32 2.64 3.16
佛平县 3.24 2.46 1.82 1.54 3.52 3.61
镇巴县 3.65 2.82 1.68 1.61 3.42 3.61
宁陕县 2.75 2.52 1.60 1.51 3.13 3.88
柞水县 3.86 2.62 1.81 1.59 3.54 4.08
镇安县 2.61 2.50 1.71 1.62 2.95 3.78
山阳县 2.77 2.34 1.68 1.81 2.76 3.09
长安县 2.95 2.34 1.70 1.64 2.68 3.40
3 讨论
3.1 该方法灵敏度高 ,检测下限是 0.1ng ,与比色
法 ,紫外分光光度法和纸层析法比较精确度高 。
3.2 从表 2中可看出 ,在同一季节不同产地采集的
鬼灯檠根茎材料中 ,岩白菜素的含量有明显差异 ,说
明生长环境对岩白菜素的含量有明显影响 。产于同
一县区内 ,由于采集季节不同 ,其含量差异更明显 ,
并有一定规律 ,该植物材料的采集时间应该在每年
春季 5月前及秋季 9月后的时间内 ,样品含量最高。
3.3 用不同产地采集的鬼灯檠根茎材料提取岩白
菜素有明显差异 ,一些地区岩白菜素含量较高却不
易获得岩白菜素结晶 ,一些地区岩白菜素含量较低
却较容易获得岩白菜素结晶 ,所以在开发利用这一
资源上应加以注意 。
参考文献:
[ 1] 西北水土保持研究所.草药鬼灯檠化学成分临床的初步研究
[ J] .中草药通讯 , 1974 ,(2):20-22.
[ 2] 陈文斗.岩白菜素的偶合比色测定法[ J] .药物分析杂志 , 1982 ,
2(6):350-352.
[ 3] 中华人民共和国药典 2000.一部[ S] .北京:化学工业出版社 ,
2000:169.
[ 4] 王俊平 ,李百华.鬼灯檠中岩白菜素的含量测定[ J] .中成药 ,
1991 , 13(2):31-33.
[ 5] 张艺 ,赖先荣 ,孟宪丽 ,等.紫金牛属药用植物中岩白菜素的高
效液相色谱测定及资源利用[ J] .中国中药杂志 , 1996 , 21(8):
458-460.
千金子炮制的历史沿革与现代研究
孙秀梅1 , 张兆旺1 , 曹艳花2
(1.山东中医药大学 , 山东 济南 250014;2.山东省立医院 ,山东 济南 250021)
收稿日期:2003-01-29
基金项目:国家科技部十五攻关课题(2001BA701A11)
作者简介:孙秀梅(1948 ～ ), 女 , 山东省济南市人 ,教授 , 博士生导师 , 研究方向:中药新药研究与中药炮制原理的研究 ,电话:0531-
2613413。
关键词:千金子;炮制;历史沿革;现代研究
中图分类号:R283 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2003)12-0981-03
Study on the process of preparing of Semen Euphorbiae
SUN Xiu-mei1 , ZHANG Zhao-wang1 , CAO Yan-hua2
(1 .Shandong Universi ty of TCM , Jinan 250014 , China;2 .Shangdong Provincia l Hospi tal , Jinan 250021 , China)
Key words:Semen Euphorbiae;process of preparing;summary
千金子为大戟科植物续随子 Euphorbia lathy ris L.的干
燥成熟种子 ,主产于河北 、河南 、浙江 , 有逐水消肿 、破 杀虫
的功效 ,临床用于治水肿胀满 、痰饮 、宿滞 、 瘕积聚 、妇女经
闭 、疥癣疮毒 、蛇咬及疣赘等[ 1] 。千金子始载于《开宝本草》 ,
其炮制方法历代以制霜法为主 , 另有净制 、煮制 、炒制 、酒制
的记载。现代多制霜应用 , 但方法各一 ,难以保证药材质量。
本文将对千金子炮制的历史沿革 、临床应用及现代研究作一
综述。
1 历史沿革
千金炮制的记载始见于宋·《太平圣惠方》中的“石燕圆”
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第 25 卷 第 12期
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