全 文 ：中国食用菌 2013，32 (6) :12 ～ 14
EDIBLE FUNGI OF CHINA
CN53－1054 /Q ISSN 1003－8310
* 项目来源:国家自然科学基金资助项目“暗褐网柄牛肝菌营养方式及菌丝胞外酶活性研究”(31060271) ;农业科技成果转化资金项目“暗
褐网柄牛肝菌仿生栽培发明专利技术成果转化与示范”(2011GB2F300004) ;景洪市科技三项费项目“黑牛肝菌人工栽培技术转
化与示范”(2013. 46)。
作者简介:何明霞 (1968－) ，女，农艺师，研究方向为食用菌栽培及外生菌根研究。E-mail:zzshmx680615@ 163. com
＊＊通信作者:张春霞，助理研究员，研究方向为外生菌根食用菌及食用菌栽培。E-mail:zhangchunxia7084@ 163. com
收稿日期:2013－09－23
暗褐网柄牛肝菌菌株分离研究*
何明霞，王文兵，张春霞＊＊，刘 静，曹 旸，
高 锋，周 茂，纪开萍
(云南省热带作物科学研究所，云南 景洪 666100)
摘要:通过对培养基、分离材料 2 个方面 5 个因素进行研究，结果表明，分离培养暗褐网柄牛肝菌菌株以采集的中熟
子实体的菌肉分离效果最好，采后到分离时间不宜超过 24 h，培养基以 M1 配方为最好。
关键词:暗褐网柄牛肝菌; 菌株分离; 分离方法
中图分类号:S646. 9 文献标志码:A 文章编号:1003－8310 (2013)06－0012－03
Studies on Isolating of Phlebopus portentosus Strain
HE Ming-xia，WANG Wen-bing，ZHANG Chun-xia ，LIU Jing，
CAO Yang，GAO Feng，ZHOU Mao，JI Kai-ping
(Yunnan Institute of Tropical Crops，Jinghong Yunnan 666100)
Abstract:Five factors concerning the culture medium，the isolating material were studied． It showed that the best materials were
tubuli of the middle fructification that were collected． Time should not exceed 24 hours from collect to isolate． M1 was the best
medium．
Key words:Phlebopus portentosus;Strain isolating;The way of isolating
暗褐网柄牛肝菌 Phlebopus portentosus (Berk. ＆ Broome)
Boedijn，隶属于小牛肝菌科 Boletinellaceae、脉柄牛肝菌属
Phlebopus［1］。国外分布于泰国、斯里兰卡、越南、印度尼西
亚、巴西、墨西哥、澳大利亚、新西兰等热带地区［2 － 7］，国
内主要分布在云南，广西、海南也有分布。Sanmee Ｒ.、张春
霞等［8，9］对暗褐网柄牛肝菌野生子实体的营养成分进行了分
析，结果显示暗褐网柄牛肝菌含有丰富的蛋白质、粗脂肪、
总糖、粗纤维、多种矿质元素和氨基酸，是 1 种营养价值较
高的食用菌。在云南西双版纳，俗称“黑牛肝菌”，每年雨
季到来，农贸市场的暗褐网柄牛肝菌十分抢手，市售价
60 元·kg －1～ 80 元·kg －1，是当地消费者最喜爱的食用菌之一。
本项目组从 2003 年以来对暗褐网柄牛肝菌开展研究［10 － 12］，
现将暗褐网柄牛肝菌菌种分离结果报告如下。
1 材料与方法
1. 1 分离材料
暗褐网柄牛肝菌子实体 (Phlebopus portentosus) ，采自云
南西双版纳热带花卉园。
1. 2 分离培养基配方
PDA配方、M1 配方。
1. 3 方法
1. 3. 1 不同培养基配方
选用 PDA配方，即葡萄糖 20. 0 g、马铃薯 200. 0 g、琼脂
20. 0 g，水 1 000 mL;M1 配方为葡萄糖 20. 0 g、MgSO4 1. 0 g、
KH2PO4 1. 0 g、酵母膏 2. 0 g、马铃薯 200. 0 g、琼脂 20. 0 g，
水 1 000 mL。
1. 3. 2 不同分离材料
子实体的孢子、菌肉、菌管、菌柄。
1. 3. 3 不同成熟度子实体准备
成熟度分为成熟 (菌管散开)、中熟 (菌管未散开)、
幼菇。
1. 3. 4 不同月份采集子实体设置
月份分为 5 月、6 月、7 月、8 月。
DOI:10.13629/j.cnki.53-1054.2013.06.014
1. 3. 5 分离前子实体表面处理方法
试验采用 2 种处理方法，一种是 75%酒精擦洗、无菌水
冲洗、吹干，第 2 种是不处理。
1. 3. 6 试验时间设计
设 4 h、24 h、48 h 三种时间处理，24 h、48 h 的子实体
置于 4℃冰箱保存。
除配方试验外，其余试验培养基均采用 M1 配方;除分
离材料、成熟度试验外，其余均使用中熟程度子实体，并采
用组织分离法取菌肉组织 (菌柄与菌盖交界处)。每种试验
每个处理 10 支试管 (15 cm × 200 cm) ，分离后置于 (30 ±
1)℃恒温暗培养。不定时观测、检查结果。
2 结果与分析
2. 1 不同培养基配方对暗褐网柄牛肝菌分离效果的影响
2 种培养基配方对暗褐网柄牛肝菌的分离效果影响差异
很大，具体分离效果比较见表 1。
表 1 不同培养基配方的分离效果比较
培养基 初始菌丝萌发时间d 成活率% 菌丝长势 菌丝密度 菌丝颜色 菌落边缘整齐度
PDA 3 100 不粗壮 稀疏 黄色 不整齐
M1 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
从表 1 可以看出，M1 配方无论从初始菌丝萌发时间、
初始菌丝密度、生长势等方面都极显著优于 PDA 配方。
M1 配方菌丝 2 d 后就开始萌发，菌丝浓密、粗壮、暗褐
色，菌落边缘整齐，而 PDA 配方菌丝要到第 3 天才萌发，
菌丝生长缓慢，15 d 后停止生长，菌丝逐渐变黑、老化。
原因是 PDA 配方无法满足暗褐网柄牛肝菌菌丝生长的营
养需求。
2. 2 不同分离材料对暗褐网柄牛肝菌分离效果的影响
不同的分离材料其分离效果差异很大，分离效果比较情
况见表 2。
表 2 不同分离材料的分离效果比较
分离材料 初始菌丝萌发时间d 成活率% 菌丝长势 菌丝密度 菌丝颜色 菌落边缘整度
孢子 － 0 － － － －
菌肉 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
菌管 3 95 不粗壮 稀疏 暗褐色 整齐
菌柄 2 100 不粗壮 浓密 暗褐色 整齐
由表 2 可知，从分离成活率和初始菌丝萌发时间来看，
菌肉、菌柄分离效果最好，成活率达到 100%;菌管分离成活
率较低，为 95%;孢子分离成活率最低，为 0。可能是由于
菌肉和菌柄分离时无须药剂处理，切取方便，虫害少，易成
活。孢子分离失败均为杂菌污染所致。从菌丝长势来看菌肉
分离的菌丝粗壮、浓密。
2. 3 不同成熟度子实体对暗褐网柄牛肝菌分离效果的影响
不同成熟度子实体的分离效果比较情况见表 3。
表 3 不同成熟度子实体的分离效果比较
分离材料 初始菌丝萌发时间d 成活率% 菌丝长势 菌丝密度 菌丝颜色 菌落边缘整度
成熟菇 3 60 不粗壮 稀疏 暗褐色 整齐
中熟菇 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
幼菇 3 100 不粗壮 稀疏 暗褐色 整齐
子实体成熟度对分离的成活率有一定影响，中熟菇、幼
菇成活率达 100%，成熟菇为 60%。随着子实体成熟度的提
高，分离成活率呈下降趋势，原因是成熟度越高，杂菌污染
越多。中熟菇菌丝 2 d 后就开始萌发，菌丝长势粗壮，子实
体成熟中等，长势最好。
2. 4 不同月份采集子实体对暗褐网柄牛肝菌分离效果的
影响
不同月份采集子实体的分离效果比较情况见表 4。
由表 4 可知，不同月份采集的子实体对分离的暗褐网柄
牛肝菌菌丝长势、成活率没有影响。
表 4 不同月份采集子实体的分离效果比较
分离月份 初始菌丝萌发时间d 成活率% 菌丝长势 菌丝密度 菌丝颜色 菌落边缘整度
5 月 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
6 月 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
7 月 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
8 月 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
31第 32 卷 第 6 期 何明霞等:暗褐网柄牛肝菌菌株分离研究
2. 5 分离前子实体表面不同处理方法对暗褐网柄牛肝菌分离
效果的影响
分离前子实体表面不同处理的分离效果比较情况见表 5。
分离前子实体表面以不处理为好，成活率达到 100%;而
采用 75%酒精和无菌水处理的成活率反而低，为 80%，主要
原因是细菌污染。
2. 6 子实体采后到分离的不同时间对分离效果的影响
子实体采后到分离不同时间的分离效果比较情况见表 6。
表 5 分离前子实体表面不同处理方法对分离效果影响情况比较
处理方法 初始菌丝萌发时间d 成活率% 菌丝长势 菌丝密度 菌丝颜色 菌落边缘整齐度
75%酒精和无菌水 2 80 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
不处理 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
表 6 子实体采后到分离不同时间对分离效果影响情况比较
间隔时间 初始菌丝萌发时间d 成活率% 菌丝长势 菌丝密度 菌丝颜色 菌落边缘整度
4h 2 100 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
24h 2 90 粗壮 浓密 暗褐色 整齐
48h 2 60 粗壮 稀疏 暗褐色 整齐
子实体采后到分离间隔时间不同，分离效果有差异，主
要表现在成活率方面，对菌丝生长势没有影响。成活率随着
放置时间的延长而呈下降趋势。4 h 试验的成活率达 100%，
24 h 试验成活率达 90%，48 h 的成活率比较低，为 60%。原
因是随着放置时间的延长组织块的萌发率下降。
3 小结与讨论
影响暗褐网柄牛肝菌分离的因素有培养基、分离材料 2
个方面。PDA培养基不适于暗褐网柄牛肝菌的分离培养。本
试验结果以配方 M1 为最好。
分离材料因素包括分离材料类别、子实体采后到分离时
间、不同月份采集子实体、不同成熟度子实体。以采集的中熟
子实体的菌肉分离效果最好，采后到分离时间不宜超过 24 h。
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檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
614－619．
云南洱源县牛肝菌市场前景广阔
近日，云南省洱源县西部山区大量牛肝菌破土而出，农民们纷纷上山四处寻找牛肝菌。每逢晴天，农民便把捡到的新鲜牛
肝菌和加工出来的干片牛肝菌拿到市场上销售，一上市便会被一抢而空。销售前景被看好，山区农民因此可以获得了一笔十分
可观的经济收入。
洱源县实施天保工程、退耕还林工程、林改工程以来，昔日光秃秃的荒山披上了绿装，各类野生菌一年比一年多，山上捡
菌的人随处可见。经了解，每市斤鲜牛肝菌达 9 元 ～ 12 元，干片牛肝菌每市斤达 80 元 ～ 100 元，仅牛肝菌一项，农民即可收
入达 290 万元。
中国食用菌商务网
2013. 10. 20
41 中国食用菌 EDIBLE FUNGI OF CHINA Vol. 32 No. 6