全 文 :收稿日期:2008-11-19
作者简介:王婷(1981-), 女(汉族), 辽宁本溪人 , 硕士研究生 , E-mailxiangfeng weixiao@163.com;于治国(1958
-),男(汉族),山东莱西人 ,教授 , 博士 , 主要从事中西药质量标准研究及中药复方药物动力学和药物代谢研究 ,
Tel.024-23986295, E-mailyzg-cnn@163.com。
文章编号:1006-2858(2009)07-0555-04
RP-HPLC法同时测定参芪肝康胶囊中阿魏酸与
6 , 7 -二甲氧基香豆素的含量
王 婷1 , 赵云丽 2 , 高晓霞2 , 金一宝 2 , 于治国2
(1.沈阳药科大学 高等职业技术学院 ,辽宁 沈阳 110016;2.沈阳药科大学 药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立同时测定参芪肝康胶囊中阿魏酸与 6, 7-二甲氧基香豆素的 HPLC法。方法采用
DiamonsilC18色谱柱(200 mm×4.6mm, 5 μm),以甲醇 -体积分数为 0.5%的冰醋酸溶液(体积比
为 35∶65)为流动相 , 流速:1.0mL·min-1 , 检测波长:316 nm, 柱温:25 ℃。结果 阿魏酸与 6, 7-二
甲氧基香豆素的线性分别为 0.06 ~ 0.60 mg·L-1(r=0.999 1)、0.60 ~ 12.00 mg·L-1(r=0.999 8)
和 1.808 ~ 18.080 mg·L-1(r=0.999 6)、 18.08 ~ 361.60 mg·L-1(r=0.999 8), 平均回收率分别为
98.5%和 99.4%, RSD分别为 1.3%和 2.0%。结论 所建立的 RP-HPLC法可用于参芪肝康胶囊中
阿魏酸与 6, 7-二甲氧基香豆素的含量测定。
关键词:参芪肝康胶囊;阿魏酸;6, 7-二甲氧基香豆素;RP-HPLC
中图分类号:R917 文献标志码:A
参芪肝康胶囊是由茵陈 、党参 、水飞蓟 、五味
子 、当归 、黄芪 6味药材与刺五加浸膏组成的复方
中药制剂 ,具有祛湿清热 ,调和肝脾之功效 。临床
适用于湿热内蕴与肝脾不和所致的急 、慢性肝
炎 [ 1] 。方中茵陈为传统中药 ,具有清热利湿 、利
胆退黄之功效 ,临床上广泛用于治疗黄疸 、肝炎等
疾病[ 2] 。经研究证实 ,其口服后入血的主要成分
为 6 , 7 -二甲氧基香豆素 (见图 1),且该成分具
有利胆 、保肝等生物活性 ,为茵陈的药效物质基础
之一[ 3-4] 。阿魏酸(见图 1)为党参和当归的主要
有效成分之一[ 5-6] 。当归对氯仿引起的肝损伤具
有保护作用 ,是通过抑制氧自由基所引起的脂质
过氧化作用而减轻肝硬化细胞的损伤[ 6] ,其中的
阿魏酸钠不仅能对抗氧自由基 ,使超氧自由基 、羟
自由基和过氧化氢等氧自由基生成减少 ,而且还
能与膜磷脂酰醇胺结合 ,使膜磷脂不受氧自由基
的侵袭 ,从而发挥抗脂质过氧化作用[ 7] 。参芪肝
康胶囊现行质量标准[ 1]中含量测定项下 ,采用高
效液相色谱法 (HPLC)测定茵陈中绿原酸的含
量 。规定参芪肝康胶囊每粒含茵陈以绿原酸计 ,
不得少于 80μg。本文作者采用 HPLC法同时测
定参芪肝康胶囊中主要有效成分阿魏酸和 6, 7 -
二甲氧基香豆素的含量 ,为完善该制剂的质量控
制标准提供有价值的参考 。
Fig.1 Structuresofferulicacid(a)and6, 7-dimethoxy-
coumarin(b)
1 仪器与材料
LC-10ATvp-UV高效液相色谱仪 、ANAS-
TAR色谱数据处理系统(美国 Suntek科技公司),
BS110S电子分析天平(北京 Sartorius仪器系统有
限公司)。
阿魏酸(化学对照品批号:0733 -9910,中国
药品生物制品检定所), 6, 7 -二甲氧基香豆素
(HPLC纯度质量分数为 99.6%,本实验室自制),
参芪肝康胶囊(规格 0.4 g/粒 ,西安兆兴制药有限
公司 ,批号:060621;自制品 ,批号:01、02、03),甲
醇为色谱纯(天津康科德科技有限公司),冰醋酸
为分析纯(天津大茂化学试剂厂),水为二次蒸馏
水 。
第 26卷 第 7期
2 0 0 9 年 7 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.26 No.7
Jul.2009 p.555
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:DiamonsilC18分析柱 (200 mm×
4.6 mm, 5 μm,北京迪玛公司),流动相:甲醇 -体
积分数为 0.5%的冰醋酸溶液(体积比为 35∶65),
流速:1.0 mL·min-1 , 检测波长:316 nm, 柱温:
25 ℃,进样量 10 μL。
2.2 色谱系统适用性试验
在上述色谱条件下 ,样品中阿魏酸 、6 , 7 -二
甲氧基香豆素与其它组分达到了基线分离 。理论
塔板数按 6, 7 -二甲氧基香豆素峰计算不低于
3 000,典型色谱图见图 2。
2.3 对照溶液的制备
分别取阿魏酸和 6, 7 -二甲氧基香豆素适
量 ,精密称定 ,置 25 mL棕色量瓶中 ,加入甲醇溶
解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成质量浓度分别为
0.120 g·L-1和 3.616 g·L-1的混合储备液 。
2.4 供试溶液的制备
取本品内容物约 0.1 g,研细 ,精密称定 ,加水
10 mL,用乙醚萃取 3次 ,每次 10 mL,合并乙醚萃
取液 ,蒸干 ,残渣加甲醇溶解并定容至 2 mL,摇
匀 ,作为供试溶液 。
2.5 阴性对照溶液的制备
按处方分别制备不含茵陈 、当归与党参的阴
性样品 ,照 “ 2.4”条方法制备阴性对照溶液 。
1— Ferulicacid;2— 6, 7-dimethoxycoumarin
Fig.2 HPLCchromatogramsofsampleofShenqigankangcapsules(a), standardsof6, 7-dimethoxycoumarinandferu-
licacid(b), extractionsolutionwithoutVirgateWormwoodHerb(c)andextractionsolutionwithoutChineseAngelica
andTanshen(d)
2.6 线性范围的考察
依次精密吸取混合储备液 0.05、 0.10、
0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00 mL,置 100
mL棕色量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,制成
系列混合标准溶液。分别吸取上述溶液 10 μL
注入液相色谱仪 ,记录色谱图 ,以峰面积 A对质
量浓度 ρ(mg·L-1)进行线性回归 ,回归方程为:
阿魏酸:A=4.868 ×104ρ-3.014 ×103 , r=
0.999 1;A=4.742 ×104ρ-5.171 ×103 , r=
0.999 8;6, 7 -二甲氧基香豆素:A=2.094 ×
10
4ρ+7.280 ×103 , r=0.999 6;A=1.697 ×
10
4ρ+4.442 ×104 , r=0.999 8。
结果表明 ,阿魏酸在 0.06 ~ 0.60 mg·L-1和
0.60 ~ 12.00 mg·L-1 、6, 7 -二甲氧基香豆素在
1.808 ~ 18.08 mg·L-1和 18.08 ~ 361.6 mg·L-1内
峰面积与质量浓度间呈良好的线性关系。
556 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 26卷
2.7 精密度试验
精密量取对照溶液(阿魏酸与 6, 7 -二甲氧
基香豆素的浓度分别为 6.0、180.8 mg·L-1)10
μL,在上述色谱条件下重复进样 6次 ,记录峰面
积 。阿魏酸与 6, 7 -二甲氧基香豆素峰面积的
RSD分别为 0.5%和 1.1%(n=6),结果表明色
谱系统精密度良好。
2.8 重复性试验
取研细的本品(批号:01)内容物 0.1 g,精密
称定 ,共 6份 ,照 “2.4”条方法制备供试品溶液 ,
按上述色谱条件测定 ,计算含量 ,阿魏酸和 6, 7 -
二甲氧基香豆素含量的 RSD分别为 1.6%和
1.8%(n=6),结果表明该法重复性良好。
2.9 稳定性试验
取研细的本品(批号:01)内容物 0.1 g,精密
称定 ,照 “2.4”条方法制备供试溶液 ,冷藏避光放
置 ,分别于 0、2、4、8、12、24 h,按上述色谱条件测
定峰面积 。结果表明 ,供试溶液于 24 h内 ,色谱
峰面积无明显变化 ,阿魏酸和 6, 7 -二甲氧基香
豆素的 RSD分别为 2.0%和 1.0%,说明供试溶
液在制备后冷藏避光放置至少 24 h内稳定。
2.10 加样回收率实验
称取已知含量的样品 (批号:01)9份 , 每份
0.05 g,精密称定 ,分别精密加入混合储备溶液
0.025, 0.05, 0.075 mL,每个样品平行操作 3份 ,
照 “2.4”条方法操作 ,在上述色谱条件下进样分
析 ,根据加入量计算回收率 。结果见表 1。
2.11 样品测定
取研细的本品内容物 0.1 g,精密称定 , 照
“2.4”条方法制备供试溶液 ,按上述色谱条件测
定峰面积 ,按外标法以峰面积计算含量 。结果见
表 2。
Table1 TherecoveriesoftwocomponentsinShenqigankangcapsules
Component moriginal/μg madded/μg mfound/ μg Recovery/% x/% RSD%
Ferulicacid 5.63 3.00 8.64 100.3 98.5 1.3
5.79 3.00 8.68 96.3
5.66 3.00 8.59 97.7
5.66 6.00 11.62 99.3
5.60 6.00 11.48 98.0
5.71 6.00 11.60 98.2
5.71 9.00 14.52 97.8
6.01 9.00 14.91 98.9
5.74 9.00 14.75 100.1
6, 7-dimethoxycoumarin 182.30 90.00 273.2 101.0 99.4 2.0
187.50 90.00 280.3 103.1
183.00 90.00 271.0 97.8
183.00 181.00 361.3 98.5
181.20 181.00 357.3 97.3
184.90 181.00 367.1 100.7
184.90 271.00 450.2 97.9
194.50 271.00 459.6 97.8
185.60 271.00 457.4 100.3
Table2 Thedeterminedresultsforsamples(n=5)
LotNo Ferulicacidw/% RSD/%
6, 7-dimethoxycoumarin
w/% RSD/%
01 0.01145 1.2 0.3705 0.8
02 0.01115 2.0 0.3752 1.3
03 0.01085 1.5 0.3913 1.2
060621 0.00148 1.1 0.0068 1.3
3 讨论
a.茵陈在生长过程的幼苗阶段(绵茵陈)与
果实成熟期(茵陈蒿)中有效成分大不相同 ,其中
具有保肝利胆功效的主要成分香豆素类 ,主要存
在于茵陈蒿中 。所以本处方以茵陈蒿入药 ,与本
处方的药效相符 。但市售品中 6, 7 -二甲氧基香
豆素的含量明显小于自制品 ,说明市售品是以绵
557第 7期 王 婷等:RP-HPLC法同时测定参芪肝康胶囊中阿魏酸与 6, 7-二甲氧基香豆素的含量
茵陈入药 ,本文所确定的标准曲线线性范围较大 ,
对于绵茵陈和茵陈蒿入药的制剂 ,都可进行质量
控制。
b.阿魏酸是弱酸 ,用弱酸性流动相可抑制其
电离 ,使峰型稳定 ,分离度好。又因为醋酸浓度过
高易损坏色谱柱 ,笔者通过摸索确定甲醇 -体积
分数为 0.5%的冰醋酸溶液(体积比为 35∶65)为
流动相 ,色谱图中峰形良好 ,且有效减少了色谱柱
的损坏 。
c.柱温对阿魏酸和 6, 7 -二甲氧基香豆素的
色谱行为有影响 ,柱温下降 , tR延长 ,实验中选择
在 25 ℃下进行柱分析 。
d.供试溶液制备时比较了乙酸乙酯 、正丁醇
和乙醚萃取后色谱图 ,结果表明乙醚萃取的较完
全 ,色谱峰分离效果好 ,故选择乙醚作为萃取溶
剂 。
e.作者分别测定了乙醇回流提取的自制参
芪肝康胶囊与市售参芪肝康胶囊中阿魏酸和 6,
7 -二甲氧基香豆素的含量 ,结果表明 ,自制参芪
肝康胶囊中两成分的含量明显高于市售制剂。
参考文献:
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Simultaneousdeterminationofferulicacidand6 , 7-
dimethoxycoumarininShenqigankangcapsuleby
RP-HPLC
WANGTing1 , ZHAOYun-li2 , GAOXiao-xia2 , JINYi-bao2 , YUZhi-guo2
(1.VocationalandTechnicalSchool, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China;2.
SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanRP-HPLCmethodforthesimultaneousdeterminationofferulicacid
and6, 7-dimethoxycoumarininShenqigankang(traditionalChinesemedicines)capsule.MethodsADiamon-
silC18 column(200 mm×4.6 mm, 5 μm)wasused.Themobilephaseconsistedofmethanol-0.5% glacial
aceticacidsolution(V∶V=35∶65).Theflowratewas1.0 mL·min-1 , andtheUVdetectionwassetat
316 nmunder25 ℃.ResultsThelinearrangeofferulicacidwere0.06 -0.60 mg·L-1 witharegression
coeficientofr=0.999 1 and0.60-12.00 mg·L-1 witharegresioncoeficientofr=0.999 8, theaverage
recoverywas98.5% withRSDof1.3%;thelinearrangeof6 , 7-dimethoxycoumarinwere1.808 -
18.08 mg·L-1 witharegressioncoeficientofr=0.999 6 and18.08-361.6 mg·L-1 witharegresionco-
eficientofr=0.999 8, theaveragerecoverywas99.4% withRSDof2.0%.ConclusionsAsimple, rapid
andsensitivemethodwithgoodprecisionisestablishedfordeterminationofferulicacidand6, 7-dimethoxy-
coumarin.
Keywords:Shenqigankangcapsule;ferulicacid;6 , 7-dimethoxycoumarin;RP-HPLC
558 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 26卷