全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2009, 21:428-429
文章编号:1001-6880(2009)03-0428-02
　
　
　收稿日期:2007-12-04　　　接受日期:2008-05-05
　基金项目:国家自然科学基金(30470027)
＊通讯作者 Tel:86-877-2965142;E-mail:tjg111@ 163.com
绿盖粉孢牛肝菌发酵液化学成分研究
汤建国 1, 2 ,任福才 2 ,刘吉开 2
1红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心 ,玉溪 653100;
2中国科学院昆明植物研究所 植物化学与西部资源持续利用国家重点实验室 , 昆明 650204
摘　要:从绿盖粉孢牛肝菌(Tylopilusvirens)发酵液中分离得到 7个化合物 , 波谱学分析鉴定为:β-D-葡萄糖
(1)、小奥德蘑素(oudemansin2)、神经酰胺(russulamimide, 3)、ascolipidD(4)、ascolipidC(5)、β-谷甾醇(6)和 β-
D-葡萄糖甲酯(7),其中化合物 2为首次从该属中分到。
关键词:绿盖粉孢牛肝菌;发酵液;小奥德蘑素
中图分类号:R284.1;Q914.83 文献标识码:A
ChemicalConstituentsofBrothofTylopilusvirens
TANGJian-guo1, 2 , RENFu-cai2 , LIUJi-kai2
1R＆DCenterofHongtaTobaccoGroupCo., Ltd., Yuxi653100 , China;
2StateKeyLaboratoryofPhytochemistryandPlantResourcesinWestChina,
KunmingInstituteofBotany, ChineseAcademyofSciences, Kunming650204 , China
Abstract:Sevencompounds, β-D-glu(1), oudemansin(2), russulamimide(3), ascolipidD(4), ascolipidC(5), β-sitos-
terol(6)andβ-D-glumethylester(7), wereisolatedfromthebrothofTylopilusvirens.Theirstructureswereelucidated
byspectralmethods, andthecompound2 wasfirstlyisolatedfromthegenusTylopilus.
Keywords:Tylopilusvirens;broth;oudemansin
　　从绿盖粉孢牛肝菌(Tylopilusvirens)子实体中
发现一个新的麦角甾烷型甾体糖苷-tylopiloside[ 1]
和四个由 pulvinicacid衍生的丁烯内酯类色素 -tylo-
pilinA～ D[ 2] 。为了进一步寻找其有效成分 ,利用常
规分离手段从其发酵液中分离鉴定了 7个化合物 ,
分别是:β-D-葡萄糖(1)、小奥德蘑素(oudemansin,
2),神经酰胺(russulamimide, 3;ascolipidD, 4;asco-
lipidC, 5), β-谷甾醇(6)和 β-D-葡萄糖甲酯(7),上
述化合物中 β-D-葡萄糖是主要成分 ,主要来自菌丝
体 。小奥德蘑素为首次从该属中发现 ,早在 1979年
Anke等德国学者就已从高等真菌小奥德蘑属小奥
德蘑(Oudemansielamucida)中分离得到[ 3] , 1995年
Enders利用 Witigrearrangement关键反应全合成了
oudemansin[ 4] 。小奥德蘑素能显著抑制大多数需氧
腐生植物病原菌 ,其作用方式为选择性地抑制线粒
体的呼吸作用 ,作用分子靶点为结合线粒体 bc1复
合物的氢醌氧化中心(Qp)[ 5] 。
1　仪器与材料
　　XRC-1型显微熔点仪(四川大学科学仪器厂),
温度计未校正;BrukerAM-400核磁共振仪 , TMS为
内标;VGAutoSpec-3000质谱仪测定;薄层层析硅
胶和柱层析硅胶(青岛海洋化工厂);SephadexLH-
20(Merk)。显色方法为 254、365 nm荧光 、10%硫
酸乙醇溶液和硫酸香草醛处理后加热显色 、硫酸铜
丙酮显色及碘蒸气显色 。
绿盖粉孢牛肝菌 [ Tylopilusvirens(Chiu)Tai]
2005年 8月采购于云南省南华县 ,由昆明植物研究
所臧穆教授鉴定 ,标本存于昆明植物研究所隐花植
物标本馆 。菌种从绿盖粉孢牛肝菌新鲜子实体中分
离 ,放置于培养基中 ,保存 0 ℃冰箱中 ,由昆明植物
研究所纪大干教授培养发酵 。
2　发酵培养
绿盖粉孢牛肝菌菌种采用平皿转摇瓶液体培养
方法 。培养基:葡萄糖 40 g,去皮土豆 400 g, MgSO4
3.0 g, KH2PO4 6g, VB1 20 mg,酵母膏 4g;加水混合
搅拌至 2000 mL。用柠檬酸调 pH6.0 ～ 6.5,温度:
25 ℃;转速:170 r/min;暗中培养发酵 30 d,共得发
酵液约 20L。
3　提取与分离
发酵液分为培养液和菌丝体两个部分 。培养液
以乙酸乙酯萃取三遍 ,合并浓缩得 1.2 g浸膏 。菌
丝体用氯仿 -甲醇(1∶1)提取两次 ,合并浓缩得 6.0g
浸膏。经 TLC检测后 ,合并两部分浸膏 ,上硅胶柱
分离 ,以石油醚 -丙酮系统梯度洗脱 ,每 1000 mL为
一个流份。石油醚-丙酮(95∶5)洗脱部分经反复柱
层析 、SephadexLH-20(甲醇 -氯仿 1∶1洗脱)得到化
合物 2(25 mg)。石油醚 -丙酮(90∶10)洗脱部分经
柱层析 、重结晶得到化合物 3, 4和 5(8 mg)。石油
醚 -丙酮(80∶20)洗脱部分经反复柱层析 、Sephadex
LH-20(甲醇 -氯仿 1∶1洗脱)得到化合物 6(15 mg)
和 7(6 mg)。甲醇洗脱部分放置后析出化合物 1
(500mg)。
4　结构鉴定
化合物 1　β-D-葡萄糖 ,无色针晶 , C6H12 O6 ,
mp.154 ～ 156 ℃, FAB--MSm/z(%):181(100, [ M-
H] -);13 CNMR(100 MHz, CD3OD)δ:96.7, 76.8,
76.6, 75.1, 70.6, 61.8。以上波谱数据与文献 [ 6]相
符 。
化合物 2　无色针晶(石油醚), C17H22O4 , mp.
42 ～ 44 ℃, FAB+-MSm/z(%):470(14, [ M] +);1H
NMR(CDCl3 , 400 MHz)δ:7.20(5H, m, C6H5), 7.20
(1H, s, H-12), 6.46(1H, d, J=19.8 Hz, H-7), 5.92
(1H, dd, J=8.0Hz, 16.0 Hz, H-8), 3.96(1H, dd, J
=8.8 Hz, H-9), 3.78(3H, s, H-16), 3.64(3H, s, H-
15), 3.31(3H, sH-17), 2.99(1H, m, H-10), 1.26
(3H, d, J= 6.8 Hz, H-14);13CNMR(CDCl3 , 100
MHz)δ:168.1(C-13), 159.4(C-12), 136.9 (C-6),
132.4 (C-7), 129.5 (C-2, 4), 128.4(C-3), 127.3
(C-8), 126.3(C-1, 5), 112.1(C-11), 84.9(C-9),
61.2(C-15), 56.4(C-17), 50.8(C-16), 35.5(C-
10), 15.6(C-14)。以上波谱数据与文献[ 3]相符。
化合物 3, 4, 5　神经酰胺混合物 ,白色无定型
粉末 , C40H81NO5 (ascolipidC), C41H83NO5 (ascolipid
D), C42 H85 NO5 (rusulamimide);NegativeFAB-MS
m/z(%):683[ C42 H85NO5 ] +(100), [ C41H83NO5 ] +
(44), [ C40H81NO5 ] +(60);1HNMR(400MHz, Pyri-
dine-d5)δ:8.57(1H, d, J=8.8 Hz), 5.12 ～ 5.10
(1H, m), 4.62 (1H, dd, J=4.0, 7.6 Hz), 4.52
(1H, dd, J=4.5, 10.6 Hz), 4.43 (1H, dd, J=5.2,
10.6 Hz), 4.35(1H, dd, J=4.0, 6.5 Hz), 4.28
(1H, m), 2.25 (1H, m), 1.95 (2H, m), 1.93 (2H,
m), 1.92 (2H, m), 1.69 (2H, m), 1.41 ～ 1.24
(m), 0.84(3H, t, J=6.7 Hz);13CNMR(100 MHz,
Pyridine-d5)δ:175.2, 76.8, 73.0, 72.5 , 62.0, 53.0,
35.7, 34.2 , 29.6 ～ 32.2, 26.7, 25.8, 14.3。以上波
谱数据与文献 [ 7]相符 。
化合物 6　白色针晶 , C28 H44O, mp.136 ～ 137
℃, EI-MSm/z(%):414(100, [ M] ),与标准品共薄
层 , Rf值和斑点颜色均一致 。
化合物 7　色针晶 , C7H14O6 , mp.154 ～ 156 ℃,
FAB--MSm/z(%):195 (100, [ M-H] -);13 CNMR
(100 MHz, CD3OD)δ:105.3, 78.0, 77.8, 75.0, 71.5,
62.6, 57.3。以上波谱数据与文献[ 6]相符。
参考文献
1　WangF(王飞), ZhangL(张凌), DongZJ(董泽军), etal.
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centricaandOtherFiveHigherFungi.Kunming:Kunming
InstituteofBotany, ChineseAcademyofSciences(中国科学
院昆明植物研究所), PhD, 2006.
429Vol.21 　　　　　　汤建国等:绿盖粉孢牛肝菌发酵液化学成分研究