全 文 ：第 26卷
1 9 9 8年 5 月
分析化学 (F E N I XH UA X UE )研究简报
h Ci e nse Jo u r na lo f A na ly ti e a l Ch em i st ry
第 5 期
5 3 1 ~5 3 4
反相高效液相色谱分析杨梅叶中
抗氧化成分黄酮类化合物
邹耀洪 ` 李桂荣 ’ `
(常熟高等专科学校化学来 , 常熟 2 1 5 5 0 0 ) (增城市东成 日化公司 , 增城 5 1 1 3 7 0 )
摘 要 以反相高效液相色谱法 ,用 R P 一 C l :柱为固定相 , 甲醉 一水一甲酸为流动相 ,辅之以二极
管阵列紫外检测技术 ,从杨梅叶中分离和制备了四种黄酮醉贰和一种黄酮醉 , 经波谱分析确
定了化学结构 ,并以葱为内标测定了杨梅叶中五种黄酮类化合物的含 t . 用油脂氧化酸败测
定仪 (M et or h m Ran ic m at )测定抗氧化性能 , 5 种黄酮类化合物均为优良的天然抗氧化剂 。
关键词 反相高效液相色谱 ,杨梅叶 ,黄酮类化合物 ,天然抗氧化剂
1 引 言
黄酮类化合物常有特殊的化学活性和生理活性 , 国外研究表明植物中某些黄酮类化合物
具有显著的抗氧化活性 〔, ’ ,夭然植物中黄酮类化合物的分析和性能研究已成为当前国内外植
物化学研究的前沿 。前 已报道了具有抗氧化性能的杨梅果核和答竹叶中的黄酮类成分 CZ· 3 ,以及
具有 医药功能的国产甘薯叶中黄酮类成分 〔` , 。 杨梅树皮中的黄酮类杨梅素有明显的抗氧化作
用 〔5 · ` , , 鉴于杨梅树叶在资源上具有明显的优势且其黄酮类成分的分析研究未见报道 , 故本文
运用反相高效液相色谱 , 辅之以波谱分析 ,分离定性定量了杨梅叶中的黄酮类成分 ,并研究了
它们的抗氧化性能 。
2 实验部分
2
.
1 主要仪器与试剂
H P
一 1 0 5 0 高州液相色谱仪 , 甲醇为光谱纯 ,水为重蒸水 , 内标物为葱 ( G R 级 ) , 其它试剂均
为 A R 级 。 杨梅叶 8 月摘自江苏太湖地区 . 诱导时间在 6 07 M et r ho m R a cn im at (油脂氧化酸败
测定仪 )中测定 。
2
.
2 提取 、 分离和制备
将杨梅叶 日光下旺干后粉碎 , 过筛孔径 0 . 42 5 m m ,取 20 9 杨梅叶粉置于 S o x hl e t 提取器
中 , 在 8 0 ℃热水浴中用 95 %乙醇溶液回流提取 10 h , 提取液浓缩至 60 m L 后在布氏漏斗 L以
石油醚 b( . p . 30 ~ 60 ℃ )洗涤至滤液无色 , 提取物上聚乙烯毗咯烷酮柱 充分吸附 , 用水洗去不
吸附物再用 30 % D M F 水溶液解吸 , 洗脱液真空浓缩后于 10 m L 量瓶中用 甲醇定容 , 并用 0 . 5
拜m 微孔膜过滤 。 滤液稀释 1 0 倍进行液相色谱分离 。 色谱制备时将滤液直接进样 ,根据保留
时间和信号响应值变化定时收集检测器出口的有关组分 ,并用 H P L c 测出包括波长和吸收值
的图谱 , 由某一色谱峰对应的紫外吸收光谱以判断此峰是否为纯物质 ,收集液经真空浓缩后干
燥即得黄酮类纯品 。 .
2
.
3 色谱条件
19 9 7
一 0 5一 0 4 收稿 ; 1 9 9 7一 1 2一 2 5 接受 。
现在天 津经济技术开发 区 。
53 2分 析 化 学 第 2 6卷
2
.
3
.
1分离条件 色谱柱 :i Le h rs o o rbR P一 18, 4 . 6 x 2 5 0 m m ( 1 0 拌m ) . 流动相 : C H 3O H 一H ZO -
H C O O H ( 8 5
:
1 5
: 0
.
2
,
V / V / V )
. 流速 : 1 . 0 m L /m i n ; 柱温 : 室温 ;检测波长 : 3 3 0 n m ; 进样量 :
2 ” L ;光谱采集 : 1 9 0 ~ 6 0 0 n m 。
2
.
3
.
2 制备条件 色谱柱 : L ie h r o s o r b R P 一 1 8 , 8 . 0又 3 0 0 m m ( 1 0 拼m ) 。 流动相 : C H s O H 一 1 12 0 -
H C O O H ( 7 5
:
2 5
: 0
.
8
,
V / V / V )
。 流速 : 2 . 5 m L /m i n ;柱温 : 室温 ; 检测波长 : 3 3 0 n m ;进样量 :
1 0 0 拼L ; 光谱采集 : 1 9 0 ~ 6 0 0 n m 。
3 结果与讨论
.3 1 流动相的优化
比 较 了 不 同 比 例 的 CH 3O H 一 H ZO 、 C H 3O H 一T H F 、 0 . 0 1 m o l / L K H ZP O 4一 C H 3O H -
C H
3C O O H
、
H
Z
O
一
C H
3
C O O H
一
C H
3
O H
、
C H
3
O H
一
H
Z
O
一
H C O O H 体 系 , 结 果 以 C H 3O H 一 H ZO -
H C O O H ( 8 5
, 1 5 , 0
.
2 ) 为流 动相
分离效果最好 。 图 1 为杨梅叶提取
物的 H P L C 图 。
3
.
2 定性分析
杨梅叶提取物色谱图上 5个峰
的紫外光谱都具有黄酮类化合物特
征吸收带 l ( 3 0 0 ~ 4 0 0 n m )和带 I
( 2 4 0一 2 8 5 n m ) , 故可初步 定性 为
黄酮类 。 在 H P L C 上制备了上述 5
个黄酮类纯 品 ,通过 U V 和位移试
剂 对 U V 影 响试验 , M S 、 N M R 测
一 / m i n
图 1 杨梅叶提取物的高效液相色谱图
F ig
.
1 H P L C o f le a f e x t r a e t fo r m 厂 ie a r u b r a
定 ,以及将黄酮醇贰水解分离出单糖再用纸层析对单糖定性 , 鉴定了 5 个黄酮类化合物于表
l
〔 , 〕 。
表 1 杨梅叶 5 种黄酮类化合物的化学结构
T a b ]e 1 C h e m ie a l s t r u e t u r e o f f l a v o n o id s i n m y r ie a r u b r a le a f
峰号
P e a k N o
.
保留时间
R e t e n t i o n t im e
( m i n )
黄酮类化合物
F l a v o n o id
结构通式
G e n e
r a 】 , t r u e t u r e f o
r
m u l a R 一 R Z
H07
。
2 16 0
一g lu
8
。
7 15
杨梅家一 3 一弓
M y r i e e t i n
-
一夕一 D 一荀萄掩贰 ( l)一
0
一夕一。 一 g l u c o s id e
一 a 一 L
一暇李楷贰 (2 )
一
O
一企 L 一 r h a m n o s id e O
一 r h a
1 0
.
4 28
榭 J
Q u
皮家 0 一 r卜a
e r C e t l n
-
一
-a L
一鼠李精贰 (3 )
一
O
一口 一 L 一 r卜a m n o s 记 e 〔) H O
1 1
.
8 0 5
拼皮素一 3一 O 一夕一 D 一葡萄掩贰 (4 )
Q u e r e e t i n
一
3
一
0
一夕一 D一 g lu e o s id e O
一 g lu
1 4
.
4 7 8 杨梅素 ( s ) M y r i c e t i n O H O H
.3 3 含最分析
3
.
3
.
1 校正因子测定 精密称取 5 种黄酮类纯品 l 拌g 于 1 m L 量瓶中 ,精确加入内标葱的 甲
醇溶液 0 . 5 m L l( . 36 m g / L ) ,超声波振荡溶解 ,加甲醇至刻度摇匀 , 在上述色谱分离条件下取
.
_
.
_
.
_
_ _ 二 、 _ _ _ _ A . m ` , 、 _ . _ _ 二 、 _ _ _ _ 一 _ _“ 匹 进样 , 根据峰面积 由校正因子 五一端求得相对校正因子 `见表 “ ’ ·
第 5 期 邹翅洪等 :反相高效液相色谱分析杨梅叶中抗氧化成分黄酮类化合物 5 3 3
表 2 5 种黄酮类化合物的相对校正因子
T a bl e2 R el a ti o v e er r e e ti o nf a e to r o f 5 fl a vo no i d s
黄酮类化合物 l Fa vo no i d
相对校正因子 fi R el a ti c v eo r r e e tio nf a eo tr 2 。 38 2 .2 2 7 . 19 1 .5 7 1 . 72
3
.
3
.
2 用内标法根据下式计算出杨梅叶中 5 种黄酮类化合物的含 t (见表 ) 3
含量 %~
m
. :内标物量 。
大A .m,
A
.
m
又 10 0 人 : 相对校正因子 ; A ` : 样品峰面积 ; A . : 内标峰面积 ; m : 样品量 ;
表 3 杨梅叶中黄酮类化合物的含量
T
a
b l
e 3 oC
n t e n t o f t h
e
fl
a v o n o id
s in m y r ie a r u b r a l e a f
黄酮类化合物 F l a v 0 0 0 id
含 t ( % ) C o n t e n t 0 。 1 6 5 0 . 1 3 4 0 . 0 3 2 8 0 . 0 2 8 3 0 . 0 1 3 3
3
.
4 抗氧化性能测定
将黄酮类化合物 ( l) 一 ( 5) 分别以无水乙 醇溶解 ,添加到菜籽色拉油中 , 以合成抗氧化剂
BH T ( 3
,
5
一二叔丁基 一 4一轻基甲基苯 )为对照 ,在油脂氧化酸败测定仪中测定不同添加量时菜籽
色拉油的诱导时间〔幻 (见表 4 ) 。 结果表明此 5种黄酮类化合物有显著的抗氧化作用 , 且其抗氧
化性能强于 B H T 。
表 4 化合物 ( 1) ~ (5 )在菜籽色拉油中的诱导时间 ( 120 ℃ )
T
a
b l
e 4 I
n d u e t io n p e r iod
o f e o m p o u n d s ( 1 ) ~ ( 5 ) i
n s a l a d 0 11 f r o m r a p e s e e d ( 1 2 0℃ )
抗氧 化剂
A n t io x id a n t
诱导时间 I n d u e t io n 沐 r i司 ( h )
0
.
0 1% 0
.
0 2% 习 . 0 5%
ó勺0亡J00口U49舀竹.…J性亡J10口匕」亡Jd01ó口0OQ甘亡dl`口.…弓`内JI甘CJ
空白 e o n t r o l
B H T
化合物 ( l ) oC m p o u n d ( l )
化合物 ( 2 ) oC m p o u n d ( 2 )
化合物 ( 3 ) 。 m p o u n d ( 3 2
化合物 ( 4 ) oC m p o u n d ( 4 )
化合物 ( 5 ) C o m p o u n d ( 5 )
空气流量 ( a i r f lo w ) 20 d rn , / h .
1
.
5 0
4
.
2 0
2
.
1 5
4
。
2 0
4
。
4 5
3
。
9 5
3
.
7 0
5
.
0 5 6
.
1 5
参 考 文 献
H a r b o r n e J B
,
M
a b r y T J
,
M
a b r y H
. 著 ,戴伦凯 ,谢玉如译 . 黄阴类化合物 . 北京 :科学出版社 , 1 9 83 : 2 9 9~
3 3 6
邹粗洪 . 林产化学与工业 , 一9 9 5 , 1 2 ( 2 ) : 1 3~ 1 7
邹推洪 . 分析化学 , i , ,` , 2 4 ( 2 ) : 2 1 6~ 2 1 9
邹耀洪 . 分析浏试学报 , 1 9 9` , 1 5 ( 1 ) : 7 1~ 7 4
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. 几介从 . 了口饰` ` 1 F o esr t R es
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54 3分 析 化 学 第 2 6卷
An ay ls is of F l avo n o d is aAn tio x d ian tinMy
r ic aR u br aL e afW i th
R ev ers e d
一 h Ps e aHh P i ger f or m an e eL q iu d iCh r o m a to gr ah y P
(块户 ar tm, , t
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Y
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.
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s t甲 , hC a n g s h u oC l , g 。
L i G u i r o n g
C
o
mP
a叮 of 肠m , s zi e hC o i s t即 ,
C丙a n g s h u 2 1 5 5 0 0 )
( Z入〕 n g e h e n g Z e n g r公 n g 5 1 1 3 7 0 )
A b s t r a c t F o u r f l a v o n o l g l y e o s id e s a n d o n e f l a v o n o l w e r e s e P a r a t e d a n d e o l l e e t e d f r o m m y r i
-
e a r u b r a l e a f u s i n g r e v e r s e d
一
p h a s e h i g h p e r f o r m a n e e l i q t
l i d e h r o m a t o g r a p h y w i t h R P
一
C
x o e o l
-
u m n a
s s t a t io n a r y p h a s e a n d m e t h a n o l
一
w a t e r
一
f o
r
m i e a e id a s m o b il e P h a s e
.
T h e e h e m i e a l
s t r u 。 t u r 。 。 f f i v 。 f一a v o n o id , i 。 m y r i e。 r u b r 。 一e a f w a s id e n t i f i e d b y飞p e e t r a l 。 n a l y s i , 。 n d : h e i r
e o n t e n t w a s d e t e r m i n e d b y r e f e r e n e e t o i n t e r n a l s t a n d a r d a n t h r a e e n e
.
T h e i r a n t i o x id a n t a e
-
t i v i t y w a s d e t e r m i n e d i n a r a n e id i t y a n a l y z e r a n d r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e s e f i v e f l a v o n o id s a r e
a e t iv e n a t u r a l a n t i o x id a n t s
.
K e y w o r d s R e v e r s e d
一
p h a s e h ig h p e r f o r m a n e e l iq u id e h r o m a t o g r a p h y
,
m y r i e a r u b r a l e a f
,
f l a v o n o id
, n a t u r a ! a n t i o x id a n t
( R e e e i v e d 4 M a y 1 9 9 7 , a e e e p t e d 2 5 eD
c e m b
e r 19 9 7 )
第五届亚洲分析科学会议组委会通知
第五届亚洲分析科学会议 ( T h e F if t h A s ia n C o n f e r e n e e o n A n a ly t ie a l cS ie n e e s , 缩写 A S L A N A L Y S IS V )
将于 1 9 9 9 年 5 月 4 `日~ 7 日在厦门市召开 . 会议各项筹备工作已经开始 ,并已开始征文 ,领域包括原子光谱 、
分子光谱 、质谱 、 色谱及分离科学 、 电化学分析 、 化学计量学 、 生物分析 、 环境分析 、表面分析以及分析化学教学
和教育等 。 会议筹备机构热忱欢迎我国各行业分析科学工作者与会并向亚洲乃至世界的同行展示 自已最新
的研究成果 . 欲参加会议者请于 1 9 9 8 年 8 月 10 前将丝多. 、胆巫、皇鱼 、通讯地址 、 邮政编码 、 电话和传真号码 、
电子邮件地址以及论文题 目等有关信息 (中 、 英文 )寄往 : 福建省厦门市厦门大学化学系孙大海博士 ,邮政编
码 : 5 6 1 0 0 5 ,电话及传真 : 0 5 9 2一 2 1 5 6 4 0 1 ,电子邮件 : a s ia n a ly s i s @ x m u . e d u . e n 。会议欢迎 国内外分析仪器厂商与
会宣传 。