全 文 ：收稿日期:2002-05-15　　　通讯联系人:刘　霞
第 19 卷第 6 期 　　　　　　　　　　　　　　　分 析 科 学 学 报 2003 年 12 月
Vol.19　No.6 　　　　　　　　　　JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE Dec.　 2003
文章编号:1006-6144(2003)06-0525-03
中药岩白菜素的反相高效液相色谱分析
张文珠 ,师彦平 ,刘　霞 ,蒋生祥
(中国科学院兰州化学物理研究所 ,兰州 730000)
摘　要:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),以甲醇∶水=45∶55(V/ V)为流动相 ,
紫外 275 nm波长检测 ,用外标法测定了虎耳科植物提取产物中岩白菜素的含量。该
方法简便 、快捷 、准确 ,结果重现性好 。日内和日间精密度(RSD)在 0.79%～ 4.22%之
间 ,回收率为 98.1%～ 103.1%。
关键词:反相高效液相色谱法;岩白菜素;中药
中图分类号:O657.7+2 , R917　　　文献标识码:A
岩白菜素(Bergenin)为白色疏松的针状晶体 ,主要来源于虎耳草科(Saxif raceae)岩白菜属药用植物岩
白菜(Bergenia Purpurascens)和原叶岩白菜(B.crassifolia L.)中 ,具有镇咳 、祛痰功效 ,主要用于治疗慢性
支气管炎[ 1] 。然而虎耳草科岩白菜属植物全世界仅有6种 ,我国有 2 ～ 3种 ,主要分布于西南地区 ,其中厚
叶岩白菜广布于新疆阿尔泰山区。岩白菜属植物的主要功效为止咳祛痰 、止血 、解毒 。其主要活性作用与
其所含的大量活性成分岩白菜素密切相关[ 2 , 3] 。另外 ,岩白菜素也存在于其它草药中 。为了扩大岩白菜
素的植物源泉 ,我们在对甘肃药用植物调查时发现 ,广布于甘肃天水和陇南地区的虎耳草科某植物具有镇
咳 、祛痰 、平喘 、清热解毒 、止血生肌等功效 ,其主要活性成分为岩白菜素 ,至今尚无该植物中岩白菜素的高
效液相色谱分析方法的报道。目前文献中岩白菜素的定量分析方法 ,除中国药典 2000版收录的紫外分光
光度法[ 1]外 ,还有薄层扫描法[ 4] ,高效液相色谱法 [ 5 ,6]等。
本文利用二极管阵列检测器优化了检测波长 ,并对流动相进行了优化 ,利用反相高效液相色谱准确测
定了岩白菜素在该植物中的含量 ,建立了准确 、可靠 、快速用于测定植物提取物中多羟基酚类成分(如岩白
菜素)含量的高效液相色谱方法。
1　实验部分
1.1　仪器和试剂
Agilent 1100系列高效液相色谱仪 ,包括四元梯度泵 、自动进样器 、柱温箱 、二极管阵列检测器和化学
工作站(美国 ,Agilent公司)。
标样及提取物样品由西北师范大学郑尚珍教授提供 ,其中标样为植物中提取所得 ,经核磁和质谱检测
为纯品。其它所用试剂均为分析纯 ,水为去离子水 。
1.2　色谱条件
色谱柱为 C18(250×4.6 mm ,5μm;中国科学院兰州化学物理研究所),流动相为甲醇∶水=45∶55(V/
V),流速 0.8 mL/min ,柱温箱温度 25℃,紫外检测波长 275 nm ,进样量 10 μL。
1.3　提取产物的分析
精密称取标样和提取产物 ,溶于流动相中 ,进样前经 0.45 μm 滤膜过滤。在上述色谱条件下分别测
定了经正交实验提取的 16种样品中岩白菜素的含量。图 1为标样和其中一种提取物的色谱图 ,样品中岩
白菜素与杂质基本达到基线分离。
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Fig.1　Chromatogram of the standard sample and the extract of sample
a:standard;b:sample
2　结果与讨论
2.1　检测波长的选择
采用二极管阵列检测器对标样进行紫外扫描(见图 2),发现该化合物有两个吸收峰 ,分别位于 220 nm
Fig.2　UV spectrum of bergenin
和 275 nm ,考虑流动相中甲醇在 220 nm 波长处对基线
有影响 ,实验中紫外检测波长选为 275 nm 。
2.2　流动相的选择
经实验选用甲醇和水作为流动相。考察了甲醇浓度
对岩白菜素保留行为以及与提取产物中杂质之间分离的
影响。发现流动相中甲醇含量在 30%～ 40%时 ,提取物
中的杂质与样品几乎不能分离;甲醇含量在 50%～ 70%
之间 ,分离度增加;当流动相中甲醇含量为 45%时 ,样品
中的杂质与待测物分离度最大 ,分析时间较短 ,且通过二极
管阵列检测器检测得到该峰的纯度良好 ,为纯化合物。最
终我们选定流动相为甲醇∶水=45∶55(V/ V)。
2.3　标准曲线
准确称取适量岩白菜素的标样 ,用流动相配成3.1 ～ 3 200 mg/L 一系列的标准溶液 ,每个浓度的溶液
至少测试 3次 ,取其峰面积的平均值 。以质量浓度 c(mg/L)为横坐标 ,色谱峰面积的平均值 A 为纵坐标
作图 ,得到标准工作曲线回归方程为:A=16.253c+40.275 , r=0.9998(n=11)。结果表明 ,岩白菜素的
质量浓度在 3.1 ～ 3 200 mg/L 范围内 ,浓度与峰面积之间线性关系良好 。实验中选取了 12.5 ～ 400 mg/L
浓度范围的标准曲线 。
2.4　精密度 、回收率和检出限
分别对质量浓度为 12.5 mg/L 、50 mg/ L和 400 mg/L 高中低三个浓度的标准溶液日内进样 5 次 , 5
天内连续进样 ,以峰面积计算日内精密度和日间精密度[ 7] ,见表 1。
Table 1　The results of within-day precision and day to day precision(%, n=5)
Concentration(mg/ L) Within-day precision Day to day precision
12.5 4.22 0.79
50 2.15 1.01
400 1.58 1.57
分别对 1 、7 、10和 13 号提取样品进行了 3 次加标回收率实验 ,测得回收率平均值分别为 98.1%、
103.1%、99.0%和 100.1%。
当信噪比(S/N)为 3 ,方法的检出限为 0.56 mg/ L。
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第 6 期 张文珠等:中药岩白菜素的反相高效液相色谱分析 第 19 卷
3　结论
建立了对虎耳草科植物提取产物中岩白菜素的高效液相色谱测定方法 ,该分析方法简便 、准确 ,重现
性好 ,可以用于中草药岩白菜素提取方法的评价以及质量控制。
参考文献:
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Determination of Extraction of Bergenin from the
Traditional Herbs with Reversed-phase
High Performance Liquid Chromatography
ZHANG Wen-zhu , SHI Yan-ping , LIU Xia＊, JIANG Sheng-xiang
(Lanzhou Insti tute of Chemical Physics , Chinese Academy of
Sciences , Lanzhou 730000)
Abstract:The ex traction of bergenin f rom saxif raceae was determinated by RP-HPLC.The chromatographic
conditions were estabilshed as follow s:C18 column (250 mm×4.6 mm , 5μm), CH3OH∶H 2O (45∶55 , V/
V)as mobile phase and UV detection at 275 nm.The correlation coef ficient was 0.9998.The relative stan-
dard deviat ion (RSD)of w ithin-day and day-to-day was 0.79%～ 1.57% and 1.58% to 4.22%, respec-
tirdy.The recovery w as between 98.1% and 103.1%.
Keywords:RP-HPLC;Bergenin;Chinese medicine
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