全 文 ：Vol.24 No.5
Oct.2008
第24卷 第5期
2008年10月
赤 峰 学 院 学 报（ 自 然 科 学 版 ）
JournalofChifengUniversity（ NaturalScienceEdition）
牛肝菌水溶性多糖提取的正交试验
朱 月， 袁树先， 于洪艳
（赤峰学院 生命科学系， 内蒙古 赤峰 024000）
摘 要： 本研究以多糖百分含量为指标,用正交试验的方法对生长于赤峰市黑里河林区牛肝菌水溶性多糖的提取方法
进行筛选.试验结果证明：温度对多糖提取的影响最显著,其次是料液比和浸提次数,浸提时间对牛肝菌多糖提取的影响很
小.温度在100℃，浸提4小时，料液比为1：30，浸提两次是本试验设计中牛肝菌多糖提取的最佳组合.
关键词： 牛肝菌；水溶性多糖；正交试验
中图分类号：Q949.324+ 81 文献标识码：A 文章编号：1673-260X（ 0 8）05B-0022-03
多糖是糖类化合物研究中备受关注的一大类物质.研究
表明生物体内的多糖具有多种生物活性， 同维持生物机能
密切相关.如：真菌多糖在抗肿瘤；免疫调节；降血压、降血
脂、抗血栓；健胃保肝；抗衰老、抗感染、抗辐射、抗毒物损
伤、抗水肿、祛痰镇咳等方面都发挥着重要作用.还发现许多
真菌多糖具有抗氧化作用.因此真菌多糖不但被愈来愈多的
学者所关注， 而且也是当前医药、 食品工业共同关注的焦
点，是目前最具发展前途的医疗保健资源之一.
牛肝菌是菌物界中大型担子菌的重要类群， 其中的许
多种类可以食用或药用， 是大型真菌中最受人关注的类群
之一.据报道，截止到 2002年 9月，我国内蒙古已知牛肝菌
有11种，隶属于7个属.11种牛肝菌全部可以食用[1].
我们以在赤峰市黑里河林区采集到的牛肝菌 （ 未作详
细分类）为研究材料，筛选最佳的牛肝菌多糖提取方法，为
真菌的利用与开发提供一定的实验依据， 以便对牛肝菌作
进一步的研究.同时也为学生实验提供便捷的方法.
1 牛肝菌多糖的提取
1.1实验材料与试剂
1.1.1材料：牛肝菌（ 采自赤峰市黑里河林区）
1.1.2试剂：15%苯酚，浓硫酸，标准的葡萄糖溶液（ 皆为国
产分析纯）.
1.2试验仪器
UV-9100紫外可见分光光计（ 北京瑞利分析仪器公司） ，
DZKW-4恒温水浴（ 金坛市杰瑞尔电器有限公司），Acculab电
子天平（ 北京赛多利斯仪器系统有限公司） ，CS101-AB型电
热鼓风干燥箱 （ 中华人民共和国重庆试验设备厂） ，TD3低
速离心机（ 长沙湘仪离心机仪器有限公司）.
1.3试验操作
将牛肝菌在105℃干燥箱内烘干，粉碎，过 100目筛，收
集粉末，并将其粉末烘干至恒重备用.
称取 9份粉碎干燥的牛肝菌各 1克， 分别放入洁净干
燥编号的50mL锥形瓶中，按表1中的料液比向各锥形瓶中
加入去离子水， 再将各试验号的锥形瓶瓶口用耐温的保鲜
膜封严后，按表 1中所设定的温度、浸提时间、浸提次数在
恒温水浴中进行浸提.
浸提之后，将水浸液以 3000转 /分离心 10分钟，收集
上清液，并将在相同条件下获取的上清液合并.分别倒入编
号的容量瓶中定容制成样品液.其中 3、4、7试验号定容至
100mL，其它试验号定容至50mL.试验重复两次.
2 多糖含量的测定
2.1制备葡萄糖标准曲线
配置质量浓度为 0.1毫克 /毫升的标准葡萄糖溶液.取
8支洁净干燥的试管，编号，按表2操作.
在490nm下比色测定各试管中不同浓度葡萄糖溶液的
试验号 水提温度(℃) 水提时间(h)料液比 水提次数
1
2
3
4
5
6
7
8
9
80
80
80
90
90
90
100
100
100
4
5
6
4
5
6
4
5
6
10
20
30
20
30
10
30
10
20
1
2
3
3
1
2
2
3
1
表1 粗多糖提取的正交试验L9(34)设计
22· ·
DOI:10.13398/j.cnki.issn1673-260x.2008.10.020
编号 1 2 3 4 5 6 7 8
葡萄糖溶液 （ml） 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
蒸馏水 （ml） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6
15%苯酚溶液 1 1 1 1 1 1 1 1
摇匀
浓硫酸 （ml） 5 5 5 5 5 5 5 5
摇匀， 放置10分钟后， 在25℃水浴中保温20分钟
表2 葡萄糖标准曲线制备操作表
编号 1 2 3 4
样品液 （ml） 1.0 1.0 1.0
蒸馏水 （ml） 1.0
15%苯酚溶液 1.0 1.0 1.0 1.0
摇匀
浓硫酸 （ml） 5 5 5 5
摇匀， 放置10分钟后， 在25℃水浴中保温20分钟
表3 多糖含量测定的操作表
光吸收值.记录光吸收值.
以葡萄糖浓度（ mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，
绘制葡萄糖标准曲线，求出直线方程.
2.2样品液多糖含量的测定
对在表1条件下提取的多糖样品液稀释20倍后，取4支
洁净干燥的试管，编号，按表3的方法进行多糖含量的测定.
在 490nm下比色测定各试管中样品液的光吸收值，根
据直线方程，计算光吸收值所对应的多糖含量.再换算成各
试验号1克样品中多糖的含量.
计算方法：
多糖含量%=〔 样品稀释液多糖含量（ mg/mL）×样品液
体积（ mL）×样品液稀释倍数〕÷〔 样品重量（ g）×103〕×100
3 验证试验
用正交试验筛选的最佳方法浸提牛肝菌多糖， 将验证
试验测得的牛肝菌多糖百分含量与正交试验各试验号测得
的牛肝菌多糖百分含量进行比较，进而验证结论的准确性.
4 结果与分析
4.1结果
试验号
列号因素
多糖含量的平均数 多糖含量合计 （K）
A（ 温度） B（ 时间） C料液比 D浸提次数
1 1 1 1 1 6.7475 13.495
2 1 2 2 2 9.4860 18.9719
3 1 3 3 3 9.77 19.54
4 2 1 2 3 9.668 19.3359
5 2 2 3 1 8.600 17.19999
6 2 3 1 2 8.1763 16.3525
7 3 1 3 2 15.8763 31.7526
8 3 2 1 3 11.6157 23.2313
9 3 3 2 1 11.6972 23.3943
K1 52.0069 64.5835 53.0788 54.0892 183.2734
K2 52.8883 59.4031 61.7025 67.077
K3 78.3782 59.2868 68.4925 62.1072
K1平 17.3356 21.5278 17.6929 18.0297
K2平 17.6294 19.8010 22.5674 22.359
K3平 26.1261 19.7623 22.8308 20.7024
极差 8.7905 1.7655 5.1379 4.3293
表4 L9(34)正交试验设计及试验数据
23· ·
4.1.1葡萄糖标准曲线
4.1.2牛肝菌多糖提取的正交试验设计与实验数据
实验数据见表4.
主效应 温度＞料液比＞浸提次数＞浸提时间
次效应 100℃＞90℃＞80℃；4小时＞5小时＞6小
时；1：30＞1：20＞1：10；浸提两次＞浸提三次＞浸提一次
4.2方差分析
α=0.01或0.05，MS=SS/ν；F=MS/MSe
A间、B间、C间、D间分子自由度均为2，分母自由度为
9，查表得：F（ 2，9，0.01）＜FA，F（ 2，9，0.05）＜FC、FD
即：FA＞F0.01；FC＞F0.05；FD＞F0.05.
方差分析显示，温度组 A间差异极其显著；浸提时间 B
间差异不显著；料液比 C间；浸提次数 D间，差异显著.说明
温度对牛肝菌多糖提取的影响最大， 其次是料液比和浸提
次数，浸提时间对其影响不大.
5 验证试验结果
按照筛选的最佳实验组合进行三组验证试验， 测定糖
含量，其结果是牛肝菌多糖含量为 15.59%.三组数值比较稳
定，与7号试验相当，切高于其它试验号所提取的糖含量.
6 结论与讨论
由极差和方差分析可知:提取温度对多糖含量结果影响
最大,温度升高使多糖分子运动加快,促进了多糖的提取；其
次是料液比和浸提次数,显然溶剂的量和新溶剂的增入,使
渗透压变大有利于多糖的溶出； 提取时间对多糖的提取率
没有显著影响,说明时间因素的最低水平已经满足提取多糖
的需要.因此，温度在100℃，浸提4小时，料液比为 1：30，浸
提两次是本试验设计中牛肝菌多糖提取的最佳组合.
——————————
参考文献：
〔1〕李泰辉，宋斌 .中国牛肝菌分属检索表 .生态科学，2002，
21（3）:240-245.
〔2〕陆林博，王燕飞，龚祝南.正交法优选槲寄生多糖水提取
工.四川中医，2006，24（6）：37-38.
〔3〕杨爱岗,冀保全,等.正交实验优化裂叶荨麻根的多糖提取
工艺.中南药学，2007，5（1）：12-13.
变异来源 SS ν MS F值 F（ 2， 9， 0.01） F（ 2， 9， 0.05） P
总 121.4146 17
A间 74.6343 2 37.3172 35.9199 ＜0.01
B间 3.0567 2 1.5284 1.4712 8.022 4.26﹥0.01和0.05
C间 20.0585 2 10.0293 9.6538 ＜0.05
D间 14.3150 2 7.1575 6.8895 ＜0.05
误差 （e） 9.3501 9 1.0389
表5 方差分析
24· ·
图1 葡萄糖标准曲线