全 文 ：反相高效液相色谱法测定岩白菜素含量的方法
赵素琴　(青海民族学院学报编辑部 , 青海西宁 810007)
摘要　建立西藏产舌岩白菜中岩白菜素含量的反相高效液相色谱分析方法。色谱柱:ZORBAX SB-C18柱(250mm×4.6 mm , 5μm);色谱条
件:检测波长 274nm,柱温35℃,流速0.8ml/min;流动相:甲醇∶水=25∶75。利用正交试验确定了超声提取的最佳条件 ,结果表明 ,在选定
条件下岩白菜素与其他组份达到了基线分离 ,岩白菜素的线性范围为 0.306～ 2.14μg , r=0.999 8 ,回收率为 101%(RSD=2.2%), 该方法
快速 、简便 ,结果准确。
关键词　反相高效液相色谱;舌岩白菜;岩白菜素;方法
中图分类号　Q657.7+2　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2006)11-2323-02
Determination of Content of Bergenin in Bergenrae pacumbis by RP-HPLG
ZHAO Su-qin　(Editor Department of Qinghai Nationalities Institute , Xining, Qinghai 810007)
Abstract　Objective:To establish a quantitative method of determination of bergenin in Bergenrae pacumbis by RP-HPLC.Method:The sample were
separated on the column of Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm , 5μm)which eluted with methanol and water(25∶75).Detected wavelength at 274 nm , flow
rate at 0.8 ml/min , column temperature at 35 ℃;The Supersonic extraction of bergenin was studied by orthogonal experiments.Results:Bergenin was
base-isolated.The linear ranges of bergenin was 0.306～ 2.14μg(r=0.999 8);The average recoveries were 101%(RSD=2.2%).Conclusions:The
method is rapid and precise.
Key words　RP-HPLC;Bergenrae pacumbis;Bergenin;Method
　　舌岩白菜(Bergenrae pacumbis)为多年生虎耳草科岩白菜
属植物[ 1-3] ,目前 ,岩白菜素的定量分析方法主要有紫外分
光光度法[ 4] 、薄层扫描法[ 5] 、高效液相色谱法[ 6] 等 ,但对西藏
舌岩白菜中岩白菜素的HPLC分析方法未见报道 ,笔者利用二
极管阵列检测器优化了检测波长 ,并对流动相进行了优化 ,利
用正交试验优化了岩白菜素的提取条件 ,建立了用反相高效液
相色谱法测定西藏舌岩白菜中岩白菜素含量的方法。
1　材料与方法
1.1　试验仪器 、试剂及样品　①仪器 。Agilent1100高效液
相色谱仪:手动进样器 ,在线脱气机 ,高压二元梯度泵 ,恒温
柱温箱 ,DAD检测器 ,Agilent1100色谱工作站;ZORBAX SB-
C18(250 mm×4.6 mm , 5 μm)色谱柱;KQ3200 超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司);SZ-97自动三重纯水整流器
(上海亚荣生化仪器厂)。②试剂。甲醇为高效液相色谱专
用试剂(山东禹王实业有限公司禹城化工厂);水是自制三
重蒸馏水;岩白菜素对照品由舌岩白菜中分离得到 ,1H
NMR 、13C NMR数据与文献报道一致 ,经归一化检验 ,纯度大
于 99%。③样品。舌岩白菜 2003、2004 、2005年 7 、8月采于
西藏林芝地区 ,阴干粉碎至 80目 ,冷藏保存。
1.2　溶液配置 　对照品溶液:精密称取对照品岩白菜素
61.1mg ,置于 5ml容量瓶中 ,以甲醇溶解并定容 ,配置成相
应浓度的对照品储备液 ,使用时稀释成所需浓度。
样品溶液:精密称取 1g样品 ,加 20ml甲醇超声 60min ,
过滤 ,滤渣重复提取 1次 ,合并滤液 ,浓缩后定容至 25ml ,过
0.45μm滤膜 ,在选定色谱条件下测定峰面积。
1.3　色谱条件　色谱柱:ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6
mm ,5μm);流动相:甲醇∶水=25∶75;检测波长:274nm;流速
0.8ml/min;柱温 35 ℃。该条件下岩白菜素可达基线分离 ,
保留时间为 8.27min(图 1)。
图 1　岩白菜素对照品及样品色谱
2　系统适应性试验
2.1　线性关系的考察　精密量取对照品储备液 ,以甲醇配
制浓度为 0.122mg/ml的对照品溶液 ,分别进样 2.5 、5 、7.5 、
10、12.5、15 、17.5 μl ,以峰面积的积分值定量 ,测得岩白
作者简介　赵素琴(1966-),女 ,青海西宁人 ,副教授 , 从事应用色谱
学研究。
收稿日期　2006-02-15
菜素的回归方程:A=8245.3X -10.599 , r=0.999 8 ,线性范
围0.306～ 2.14μg。
2.2　检测限　在选定的色谱条件下 ,当信噪比 S/N=3
时 ,测得该条件下岩白菜素的最低检测限为 2.7 ng。
2.3　精密度试验　取浓度为 0.012 2 mg/ml岩白菜素对照
品溶液 ,在选定的色谱条件下测定色谱峰的峰面积 ,计算得
RSD为 0.92%(n=6),表明仪器精密度良好 。
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2006 ,34(11):2323-2324　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　庆 　责任校对　庆
2.4　重复性试验　精密称取舌岩白菜样品 6 份 ,每份 1 g ,
在选定的色谱条件下测定岩白菜素的含量 ,计算得 RSD为
1.6%(n=6)。表明方法重复性良好。
2.5　稳定性试验　精密称取舌岩白菜样品 1 g ,分别在 0 、
2 、4 、6 、8 、24 h时分别进样 ,测定岩白菜素的峰面积 ,计算得
RSD为 1.2%(n=6)。表明样品溶液在 24 h内稳定 。
2.6　回收试验　精密称取舌岩白菜样品 1 g共 3 份 ,分别
加入岩白菜素对照品约 15 mg ,按“1.2”法提取岩白菜素测
得加标回收率为(n=3)为 101%,RSD为 2.0%。
3　结果与分析
3.1　测定结果　取制备的样品溶液按色谱条件进行分析 ,
经DAD检测器检测岩白菜素的峰纯度且其紫外光谱与对
照品一致后 ,按外标法以峰面积积分值计算 ,测得 5批西藏
舌岩白菜中岩白菜素的含量(每个样品重复进样 3次 ,取平
均值)。结果见表 1 。
　　表1 舌岩白菜中岩白菜素的含量 %　
批次 含量 RSD
1 2.27 1.25
2 2.99 0.94
3 3.03 1.63
4 2.52 1.44
5 2.49 1.96
3.2　不同提取方法的分析结果
3.2.1　不同提取方法对岩白菜素提取率的影响 。精密称
取 9份舌岩白菜样品 ,每份重 1g ,分别用甲醇热回流 2 h、超
声 20 min、冷浸 24 h ,测得用冷浸 、热回流 、超声提取法岩白
菜素含量分别为 1.16%(RSD 2.1%)、1.65%(RSD 1.7%)、
2.09%(RSD 1.9%),超声提取法提取时间短 ,提取率最高 ,
因此选用超声提取法。
3.2.2 　不同提取溶剂对岩白菜素提取率的影响 。精密
称取9份舌岩白菜样品 ,每份重 1g ,分别用甲醇 、乙醇 、水超
声提取 20min , 测得甲醇 、乙醇 、水提取岩白菜素的含量分
别为 2.09%(RSD 1.8%)、1.67%(RSD 1.4%)、0.645%
(RSD 2.9%),甲醇提取率最高 ,因此选用 100%甲醇为岩白
菜素提取溶剂。
3.3　正交试验结果　为进一步探讨以甲醇为提取溶剂的
岩白菜素最佳超声提取方法 ,采用正交表 L9(34)考察提取
时间(min)、提取次数和料液比对岩白菜素提取率的影响 。
甲醇超声法正交试验结果如表 2所示 。
　　直观分析表明 ,以甲醇为溶剂超声提取岩白菜素的主
要影响因素是提取时间和料液比 ,但提取次数对分析结果
影响不大;方差分析表明 ,提取次数对岩白菜素的影响很
小 ,应与误差项合并后 ,计算总试验误差 ,但提取时间和料
液比对试验结果有非常显著的影响(F0.01(2 , 4)=18),结合分
析和实际工作 ,选定以甲醇为溶剂超声提取岩白菜素的最
佳试验条件为:提取时间 60min ,次数 2次 ,料液比为 1∶40。
3.4　检测波长的确定　利用DAD检测器在 220～ 400nm扫
描其吸收光谱 ,岩白菜素对照品在 274 nm波长处有较高的
　　表 2 正交试验因素水平及结果
序号 时间∥min次数∥次 料液比 实验误差岩白菜素提取率∥%
实验 1 20 1 1∶20 1 1.90
实验 2 20 3 1∶30 2 1.97
实验 3 20 5 1∶40 3 2.07
实验 4 40 1 1∶30 3 2.13
实验 5 40 3 1∶40 1 2.22
实验 6 40 5 1∶20 2 2.12
实验 7 60 1 1∶40 2 2.28
实验 8 60 3 1∶20 3 2.12
实验 9 60 5 1∶30 1 2.25
均值 1 1.981 2.105 2.049 2.124
均值 2 2.155 2.102 2.115 2.122
均值 3 2.216 2.145 2.189 2.106
极差 0.235 0.043 0.140 0.018
　表 3 方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F比 P
时间 0.089 2 　　89 <0.01
次数 0.003 2 3
料液比 0.030 2 30 <0.01
合并误差 0.003 4
吸收 ,结合文献选择该波长为检测波长(图 2)。
图 2　岩白菜素的紫外吸收光谱
3.5　流动相的选择　经试验 ,当在甲醇∶水=25∶75时 ,岩
白菜素与其他组分在 10 min内达到基线分离 ,故选择甲醇∶
水=25∶75为流动相 。
4　结论
通过试验建立的用反相高效液相色谱法测定西藏舌岩
白菜中岩白菜素含量的方法 ,具有提取完全 、分析方法简
便 、快速 、结果准确 、可靠等特点 ,对分析评价药物质量有重
要的参考作用 。
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