全 文 ：收稿日期:2015-10-27; 修订日期:2016-03-07
基金项目:国家自然科学基金(No． 81560635)
作者简介:黄文平(1989-) ，男(汉族) ，江西南昌人，江西科技师范大学硕
士研究生，学士学位，主要从事中药药效物质基础及质量标准研究工作．
* 通讯作者简介:周 斌(1970-) ，男(汉族) ，江苏淮安人，江西科技师范
大学副教授，博士学位，主要从事中药活性成分研究工作．
* 通讯作者简介:何明珍(1977-) ，女(壮族) ，广西桂林人，江西中医药大
学讲师，博士学位，主要从事中药活性成分研究工作．
铁苋菜中原儿茶酸和原儿茶醛含量的
高效液相色谱法测定
黄文平1，2，吴柳瑾2，殷文静3，金浩鑫2，何明珍2，3* ，周 斌1* ，杨世林2，3
(1．江西科技师范大学药学院，江西 南昌 330013;
2．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西 南昌 330006;
3．江西中医药大学，江西 南昌 330004)
摘要:目的 建立 ＲP － HPLC测定不同产地铁苋菜中原儿茶酸和原儿茶醛的含量。方法 依利特 ODS C18(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ，以甲醇 － 0． 1%磷酸水溶液(25 ︰ 75)为流动相，流速:1． 0 ml /min;检测波长:260 nm;柱温:25 ℃。结果 原
儿茶酸在 0． 09 ～ 1． 8 μg范围内线性关系良好(r = 0． 9996) ，平均回收率为 99． 62 %(ＲSD = 0． 41 %) ;原儿茶醛在 0． 03 ～
0． 6 μg范围内线性关系良好(r = 0． 9999) ，平均回收率为 99． 45 %(ＲSD = 1． 18 %)。结论 该方法简便、快速、准确可靠，
可为铁苋菜的质量控制提供依据。
关键词:铁苋菜; 原儿茶酸; 原儿茶醛; 高效液相色谱法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 07． 011
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)07-1570-02
Determination of Protocatechuic acid and Protocatechuic aldehyde in Acalypha australis
L． by HPLC
HUANG Wen-ping1，2，WU Liu-jin2，YIN Wen-jing3，JIN Hao-xin2，HE Ming-zhen2，3* ，ZHOU Bin1* ，YANG Shi-lin2，3
(1． The Pharmacy College of Jiangxi Science and Technology Normal University，Nanchang Jiangxi330013，
China;2． Solid Preparation of Traditional Chinese Medicine Manufacturing Technology National Engineering
Center，Nanchang Jiangxi 330006，China;3． Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang
Jiangxi 330004，China)
Abstract:Objective To establish an ＲP － HPLC determination of Protocatechuic acid and Protocatechuic aldehyde in Acalypha
australis L． from different sources．Methods The separation was performed on a Hypersil ODS C18 (4． 6 mm × 250 mm，5 μm)
column，methanol － 0． 1% phosphoric acid(25∶ 75)as the mobile phase;The flow rate was 1． 0 mL /min;The detection wave-
length was 260 nm and the column temperature was at 25 ℃ ． Ｒesults Linear ranges of Protocatechuic acid and Protocatechuic al-
dehyde were 0． 09 ～ 1． 8 μg(r = 0． 9996) ，0． 03 ～ 0． 6 μg(r = 0． 9999)． The average recoveries were 99． 62 %(ＲSD = 0． 41 %)
and 99． 45 %(ＲSD = 1． 18 %) (n = 6) ，respectively． Conclusion The method is simple，rapid，accurate and which can be ap-
plied as a standard for the quality control of Acalypha australis L．
Key words:Acalypha australis L．; Protocatechuic acid; Protocatechuic aldehyde; HPLC
铁苋菜 Acalypha australis L． 为大戟科植物铁苋菜的干燥地
上部分，主要分布在江苏，广东、广西、福建、四川、江西、安徽等
地，具有清热、利水、杀虫、止血等功效，用于治痢疾、腹泻、咳嗽吐
血、便血、子宫出血、疳积、腹胀、皮炎、湿疹、创伤出血。《卫生部
药品标准中药材第一册》、《广西壮药质量标准(第二卷)》均有收
载铁苋菜，但缺少含量测定项，不足以控制其药材质量。铁苋菜
主要含有鞣质、黄酮、有机酸、生物碱等［1 ～ 5］，其中原儿茶酸、原儿
茶醛均具有抗菌活性、抗炎作用和调节脂肪干细胞作用［6 ～ 9］。因
此，本文在参考相关文献［10 ～ 12］基础上，首次建立了高效液相色谱
测量铁苋菜中原儿茶酸和原儿茶醛含量的方法，该方法简单准
确，可以为铁苋菜的质量标准研究提供参考。
1 材料与仪器
Waters 2695 高效液相色谱仪，AUW220D 型电子天平(十万
分之一，日本岛津公司) ;BS224S 型电子天平(万分之一，Sartori-
us) ;KQ250DB型数控超声波清洗器(巩义市予华仪器有限责任
公司) ;KQ5200 型水浴锅(昆山市超声仪器有限公司)。
原儿茶酸对照品(批号:110885 － 200102，中国食品药品检定
研究所) ，原儿茶醛对照品(批号:111871 － 201404，中国食品药品
检定研究所) ，甲醇为色谱纯;水为超纯水;其余试剂均为分析
纯。
本实验收集到不同批次的铁苋菜样品共 10 批(见表 1) ，样
品经南昌市食品药品检定所副主任药师吴蓓鉴定为铁苋菜 Aca-
lypha australis L．
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 7
表 1 样品信息
编号 产地 编号 产地
S1 江西 S6 贵州
S2 福建 S7 云南
S3 湖北 S8 四川
S4 安徽 S9 广东
S5 广西 S10 浙江
2 方法与结果
2． 1 铁苋菜药材供试品溶液 精密称取铁苋菜药材粉末(过 4 号
筛)1． 0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 60 %乙醇 50 ml，称重，回
流提取 1． 5h，称重补重，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2． 2 对照品溶液制备 精密称取原儿茶酸、原儿茶醛对照品适
量，分别加 60 %乙醇制成每毫升含原儿茶酸 0． 09 mg、原儿茶醛
0． 03 mg的溶液。
2． 3 色谱条件 色谱柱:依利特 ODS C18(4． 6 mm × 250 mm，5
μm) ;流动相:甲醇 － 0． 1%磷酸溶液(25 ∶ 75) ;检测波长:260
nm;体积流量:1． 0 ml /min，柱温 25℃。理论塔板数按原儿茶酸
计算不低于 4000，原儿茶醛不低于 7000。如图 1 ～ 2。铁苋菜药
材供试品溶液中原儿茶酸、原儿茶醛分离度良好。
1 －原儿茶酸 2 －原儿茶醛
图 1 混合对照品
图 2 铁苋菜供试品
2． 4 线性关系试验 分别精密吸取原儿茶酸、原儿茶醛对照品溶
液按按 1，4，7，11，15，20 μl 注入液相色谱仪中，按“2． 3”项下色
谱条件测对照品峰面积，将样品浓度与峰面积进行回归处理，回
归方程为:原儿茶酸为:Y = 124329． 1777X + 51． 1154 r = 0． 9996
(n = 6) ，原儿茶酸对照品在 0． 09 ～ 1． 8 μg 范围内进样量与峰面
积呈良好的线性关系;原儿茶醛为:Y = 279096． 3307X － 829． 2692
r = 0． 9999(n = 6) ，原儿茶醛对照品在 0． 03 ～ 0． 6 μg范围内进样
量与峰面积呈良好的线性关系。
2． 5 精密度试验 分别精密吸取原儿茶酸、原儿茶醛对照品溶液
10 μl，按“2． 3”项下色谱条件，重复进样 6 次，测定原儿茶酸和原
儿茶醛峰面积值，结果显示原儿茶酸 ＲSD 为 0． 24 %，原儿茶醛
ＲSD为 0． 37 %。表明仪器的精密性较好。
2． 6 稳定性试验 取供试品溶液，精密吸取供试品溶液 10 μl，按
“2． 3”项下色谱条件，在 12h 内每隔 1h 或 2h 或 4h，测定供试品
溶液中原儿茶酸和原儿茶醛峰面积值，结果显示原儿茶酸的 ＲSD
为 0． 52 %，原儿茶醛的 ＲSD为 1． 12 %。表明供试品在 24h内稳
定。
2． 7 重复性试验 取已知含量铁苋菜药材约 1． 0g，共 6 份，照
“2． 1”项下实验方法制成供试品溶液，按“2． 3”项下色谱条件进
行测定，计算药材中原儿茶酸和原儿茶醛的含量，结果显示，原儿
茶酸平均含量为 1． 0423 mg /g(ＲSD 为 0． 32 %) ;原儿茶醛平均
含量为 0． 4241 mg /g(ＲSD 为 1． 03 %)。表明该方法重现性良
好。
2． 8 平均加样回收率试验 称取已知含量的样品约 1． 0g 6 份，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加入原儿茶酸和原儿茶醛对照品适
量，按照“2． 1”项下实验方法制成供试品溶液，测定溶液中原儿
茶酸和原儿茶醛的含量，计算回收率。结果见表 2。
表 2 原儿茶酸和原儿茶醛的加样回收率
成分
样品称量
/g
样品中
含量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率 /%
ＲSD
/%
1． 0425 1． 0866 1． 1 2． 1782 99． 24
1． 0433 1． 0874 1． 1 2． 1891 100． 15
原儿茶酸 1． 0435 1． 0876 1． 1 2． 1801 99． 32 99． 62 0． 41
1． 0437 1． 0878 1． 1 2． 1798 99． 27
1． 0424 1． 0865 1． 1 2． 1831 99． 69
1． 0424 1． 0865 1． 1 2． 1872 100． 06
1． 0425 0． 4244 0． 42 0． 8452 100． 19
1． 0433 0． 4249 0． 42 0． 8489 100． 95
原儿茶醛 1． 0435 0． 4262 0． 42 0． 8378 98 99． 45 1． 18
1． 0437 0． 4245 0． 42 0． 8389 98． 67
1． 0424 0． 4271 0． 42 0． 8413 98． 62
1． 0424 0． 4245 0． 42 0． 8456 100． 26
2． 9 样品的含量测定 取 10 批不同铁苋菜药材，分别照“2． 1”项
下方法平行制备供试品溶液，按“2． 3”项下色谱条件进行测定，
每份进样 3 次，计算原儿茶酸和原儿茶醛的含量。结果见表 3。
表 3 不同产地的铁苋菜中
原儿茶酸和原儿茶醛含量测定结果 mg·g － 1
编号 原儿茶酸 原儿茶醛
S1 1． 1213 0． 6212
S2 1． 0824 0． 4011
S3 1． 3422 0． 6402
S4 0． 9443 1． 1376
S5 1． 1815 1． 0657
S6 1． 5254 0． 8032
S7 1． 2637 0． 6512
S8 1． 3381 0． 7776
S9 1． 0425 0． 5145
S10 1． 0464 0． 6621
3 结论与讨论
根据原儿茶酸和原儿茶醛的溶解性及铁苋菜药材化学成分，
本实验考察不同溶剂的提取(甲醇、乙醇、水)以及不同的提取方
法(超声、回流) ，结果发现，60%乙醇为最佳提取溶剂，提取方式
选择回流。在流动相的选择上，比较了甲醇 －水，甲醇 －冰醋酸
水溶液、甲醇 －磷酸水溶液，发现甲醇 －磷酸水溶液对色谱峰的
分离效果好，不产生拖尾现象。
由表 4 中数据可知，原儿茶醛平均含量整体上低于原儿茶
酸。在已报道文献中，铁苋菜的含量测定大多数是对没食子酸进
行限量考察［13，14］;同时，不同产地中，原儿茶酸和原儿茶醛含量
亦有差异，地域差异可能是导致含量异同的主要因素。因此，在
临床用药上，为选择药材的来源地提供一定的参考。
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收稿日期:2016-01-01; 修订日期:2016-04-10
基金项目:国家自然科学基金(No． 81160482)
作者简介:叶景阳(1989-) ，男(汉族) ，宁夏银川人，宁夏医科大学硕士研
究生，硕士学位，主要从事消化系统疾病研究工作．
* 通讯作者简介:朱西杰(1963-) ，男(汉族) ，陕西长安人，宁夏医科大学
教授，主任医师，硕士研究生导师，学士学位，主要从事消化系统疾病研究
工作．
复方蜥蜴散不同微粒组合剂
对胃癌前病变模型大鼠 Wnt信号通路下游
C － Myc、Cyclin － D1 蛋白表达的影响
叶景阳，朱西杰* ，王 儒，李美丽，孔 娟
(宁夏医科大学，宁夏 银川 750004)
摘要:目的 观察复方蜥蜴散不同微粒组合剂(下文简称蜥蜴散)对胃癌前病变(PLGC)大鼠 Wnt信号通路下游靶蛋白 C
－ Myc、Cyclin － D1 表达的影响，从分子生物学水平对治疗 PLGC 进行探讨。方法 120 只 SD 雄性大鼠随机分为空白组、
模型组、蜥蜴散 80 目、100 目、80 + 100 目混合组及维酶素组 6 组，后五组采取 MNNG配合饥饱失常及情绪刺激综合因素
8 周制备 PLGC模型。造模成功后，治疗组分别用蜥蜴散不同组合剂及维酶素混悬液进行治疗，模型组给予生理盐水。
通过光学显微镜来观察大鼠治疗前后胃黏膜的病理组织学变化，采用免疫组织化学法来检测大鼠胃组织 C － Myc、Cyclin
－ D1 靶蛋白的表达。结果 C － Myc、Cyclin － D1 蛋白表达:模型组与空白组对比，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;各治
疗组与模型组对比，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;蜥蜴散各治疗组与维酶素组对比，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;
蜥蜴散 80 目组、蜥蜴散 100 目组与蜥蜴散 80 + 100 目混合组对比，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 05)。结论 蜥蜴散可以
降低或抑制 PLGC大鼠胃组织中增殖蛋白 C － Myc和 Cyclin － D1 的表达，部分逆转其胃黏膜病理变化，揭示了其治疗 PL-
GC的作用机制，可能是通过干预其黏膜增生、分化，促进其细胞凋亡，抑制细胞增殖，恢复其细胞增殖与凋亡之间的平
衡，从而阻断胃癌前病变的，同时对胃黏膜的损害具有一定的保护与修复作用。
关键词:胃癌前病变; 蜥蜴散; Wnt信号通路; C － Myc、Cyclin － D1; 增殖分化
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 07． 012
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)07-1572-03
胃癌前病变(Precancerous lesions of gastric carcinoma，PLGC)
是指包括慢性萎缩性胃炎并伴有肠上皮化生和异型增生的一种
病理状态。故作为胃癌的二级预防手段，阻断胃癌前病变逐渐受
到了国内外医学界的普遍关注。在前期开展的实验和临床研究
中，我们已经证实蜥蜴散具有良好的阻断 PLGC和保护修复胃黏
膜的疗效［1 ～ 8］，为明确该机制，本实验将通过 N －甲基 － N＇－硝
基 － N －亚硝基胍(MNNG)来诱发 PLGC 模型大鼠，从细胞的增
殖途径着手手，观察蜥蜴散对 PLGC模型大鼠胃黏膜细胞中的 C
－ Myc和 Cyclin D1 靶蛋白表达的影响，以证实其治疗 PLGC 的
作用机制可能是与抑制细胞过度增殖有一定关系。
1 材料和仪器
1． 1 动物 SD 大鼠，SPF 级，雄性，120 只，4 ～ 6 周龄，体质量
(140 ± 20)g。由宁夏医科大学实验动物中心提供。
1． 2 药物 药物:N －甲基 － N＇－硝基 － N －亚硝基胍;维酶素;复
方蜥蜴散:由蜥蜴、鹿角霜、海螵蛸、炒白术、半枝莲等(按一定比
例研磨成粉)组成，由宁夏医科大学脾胃病研究所提供;0． 9%的
NaCl溶液，由吉林省都邦药业股份有限公司提供。
1． 3 主要试剂及仪器 兔抗大鼠多克隆 C － Myc抗体，兔抗大鼠
多克隆 Cyclin － D1 抗体，兔 IgG———免疫组化试剂盒(SABC即用
型) ，均由湖北省武汉市博士德生物技术公司提供;DAB 显色试
剂盒，柠檬酸盐缓冲液，PBS磷酸盐缓冲液，均由北京中杉金桥生
物技术有限公司提供;轮转式石蜡切片机，由泰诺精密量仪有限
公司提供;电热式恒温培养箱，由跃进医用光学仪器厂提供;图像
采集显微镜，由宁夏医科大学组胚教研室提供。
2 方法
2． 1 PLGC模型制备 参阅大量的文献资料［9 ～ 12］，具体造模方
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 7