全 文 ：《现代食品科技》 Modern Food Science and Technology Vol.23 No.6(总 96)
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高效液相色谱法测定蛋卷中的苋菜红和日落黄

陈晓珍 1，郭新东 1，罗海英 1，黄金凤 1，吴玉銮 1，王永华 2
（1.广州市产品质量监督检验所，国家加工食品质量监督检验中心(广州)，广州 510110)
（2.华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510641）
摘要：建立了测定蛋卷中合成色素日落黄和苋菜红的高效液相色谱分析方法。蛋卷中的合成色素经聚酰胺吸附提取，制成水溶液，
过滤后用高效液相色谱仪测定。采用ODS柱分离，甲醇和乙酸铵溶液（0.02 mol/L）为流动相，测定蛋卷中苋菜红和日落黄，结果的
相对标准偏差为 1.5 %~5.9 %，实际蛋卷样品的回收率为 71.5 %~81.4 %，检出限均为 0.5 mg/kg。
关键词：高效液相色谱法；蛋卷；合成色素
中图分类号：TS253.7；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2007)06-0078-04
Determination of Artificial Synthetic Pigments (Sunset Yellow and
Amaranth) in Egg Roll by HPLC
CHEN Xiao-zhen1, GUO Xin-dong1, LUO Hai-ying1, HUANG Jin-feng1, WU yu-luan1, WANG Yong-hua2
(1.National Centre for Quality Supervision and Testing of Processed Food (Guangzhou), Guangzhou 510100, China)
(2.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)
Abstract: A method for determination of two artificial synthetic pigments in egg roll (Sunset Yellow and Amaranth) by HPLC was
established. the pigments in egg roll After purified was extracted by polyamide, dissolved in water, filtrated and then analyzed by HPLC with a
ODS C18 column and the elution of methanol and ammonium acetate (0.02 mol/L). The detection limits, recovery and precision were 0.5 mg/kg,
71.5 %~81.4 %, and 1.5 %~5.9 %, respectively.
Key words: HPLC; egg roll; artificial synthetic pigment; sunset yellow; amaranth

苋菜红和日落黄是我国批准使用的 21 种合成色
素之一。食用合成色素大多为含有苯环或者氧杂蒽结
构的化合物，它们颜色鲜艳、稳定，但对人体存在一
定的毒性，过多使用会对人体产生危害。蛋卷是以小
麦粉、糖、油、鸡蛋为主要原料的饼干类制品，表面
呈浅黄色、金黄色、浅棕黄色。一些厂家为减少鸡蛋
的用量，通过在蛋卷中加入苋菜红和日落黄人工合成
色素，用人工色素的色泽来代替鸡蛋天然色泽，来改
善蛋卷感观，从而达到提高销售利润的目的，国家标
准[1]未允许在蛋卷中添加人工合成色素。目前，我国
测试食品中合成着色剂的检验依据[2]不适合测定含淀
粉和蛋白质的蛋卷中人为添加的合成色素检测。因此，
建立一种快速、准确、方便和经济的检测方法，有利
于监控蛋卷厂家们对苋菜红和日落黄合成色素的使
用，从而保障食品质量。
1 材料与方法
收稿日期：2007-04-19
通讯作者：郭新东
1.1 实验仪器
高效液相色谱仪：LC-10Avp（SPD-10Avp型阵列
检测器，日本岛津公司）；固相萃取装置（waters公司，
美国）。
1.2 实验试剂
日落黄和苋菜红标准品（上海染料研究所有限公
司）；甲醇(色谱纯，美国Sigma公司)；其它为国产分
析纯试剂；水为去离子水。
柠檬酸溶液：称取20 g柠檬酸(C6H8O7•H2O)，加
水溶解，稀释至100 mL，混匀。
甲醇－甲酸溶液：量取甲醇60 mL，甲酸40 mL，
混匀。
无水乙醇与氨水混合溶液：量取70 mL无水乙醇、
20 mL氨水、10 mL水，混匀。
1.3 标准溶液的配制
准确称取按其纯度折算为 100 %质量的日落黄、
苋菜红各 0.1000 g，置于同一个 100 mL容量瓶中，用
pH 5的缓冲溶液溶解，并稀释至刻度，使合成着色剂
混合标准储备液浓度为 1.00 mg/mL。
DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2007.06.024
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合成着色剂混合标准使用液：临用时将合成着色
剂标准储备液用水稀释至所需浓度，经 0.45 µm滤膜
过滤。
1.4 高效液相色谱分析
色谱柱：Diamonsil TMC 185 µm, 200 mm×
4.6 mm；流动相：甲醇和乙酸铵溶液（0.02 mol/L），
梯度洗脱；柱温：30 ℃；流速为1.0 mL/min；检测波
长：日落黄选用483 nm，苋菜红选用520 nm；进样体
积：20 µL。
1.5 试样制备
1.5.1 样品处理
将蛋卷粉碎后，称取 1.50 g样品于固相萃取小柱
空管或针筒注射器中，用约 60 mL无水乙醇＋氨水＋
水溶液洗脱至流出液无色，控制流速不超过 2 滴/s，
流出液收集于烧杯中，蒸发至近干，加入 40 mL水，
混匀。
1.5.2 色素提取
试样溶液加柠檬酸溶液调pH值到5，加热至60 ℃，
将1.0∼1.5 g酰胺粉加少许水调成粥状，倒入试样溶液
中，吸附色素，将吸附色素的聚酰胺粉全部转移到漏
斗中，抽滤，用60 ℃ pH 5的水洗涤3∼5次，然后用甲
醇－甲酸混合溶液洗涤3∼5次，再用水洗至流出液中
性，用乙醇－氨水-水溶液解吸3~5次，每次5 mL，收
集解吸液，蒸发至近干，加水溶解，用水定容至25 mL，
经0.45 µm滤膜过滤，滤液进行HPLC分析。
1.5.3 加标样品制备
将合成色素日落黄和苋菜红预先加入制作蛋卷的
面浆当中，经过搅拌充分混合均匀,再经过自动烘烤成
型等加工制成 A、B、C三个样品（各 45 kg）。制作
的原料中有面粉、糖、水、食用油和鸡蛋等，A样品
分别添加 1.1 g苋菜红和日落黄，B样品分别添加 2.9 g
苋菜红和日落黄，C样品分别添加 5.8 g苋菜红和日落
黄。苋菜红、日落黄是由上海染料研究所有限公司生
产，用液相色谱法定量，含量分别是 61.4 %和 63.8 %。
加标样品的测试按1.5.1和1.5.2处理。
2 结果与讨论
2.1 检测波长的确定
取配置好的合成色素标准溶液，在200∼800 nm的
波长标范围进行紫外光全波扫描(图1、图2)，从光谱
图中看出，苋菜红、日落黄的长波部分最大吸收波长
分别为521 nm和486 nm，故选择干扰少、吸收强的长
波部分521 nm和486 nm作为定量波长。

图1 苋菜红的紫外吸收光谱图

图2 日落黄的紫外吸收光谱图
2.2 样品萃取
蛋卷用水浸泡后，容易变成糊状，增加提取的工
作量，而且由于蛋卷中的合成着色剂与淀粉及蛋白质
相结合，较难用水直接浸泡出来。用乙醇和氨水的混
合溶液浸泡，减少了水的用量，增加萃取溶剂的碱性，
更容易将合成色素置换出来。
2.3 流动相的选择
选择实验室常用的流动相甲醇和乙酸铵溶液
（0.02 mol/L）作为流动相，由于苋菜红、日落黄的极
性相差较大，如果用等度洗脱，需要较长的分析时间，
为加快样品的分析时间，采用梯度洗脱的方式，洗脱
参数见表 1。
表1 流动相梯度表
时间/min 甲醇/% 0.02 mol/L乙酸铵溶液/%
0
2.0
7.5
7.6
15.0
30
30
65
30
30
70
70
35
70
70
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2.4 标准曲线和最低检出浓度
配制 5个不同浓度（0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、
5.0 mg/L和 20.0 mg/L）的日落黄和苋菜红混合标准溶
液，标准溶液色谱图见图 3。

注：1为日落黄；2为苋菜红
图3 日落黄和苋菜红标准溶液色谱图
在上述色谱条件下测定了日落黄和苋菜红的浓度
相应值的线性关系。以浓度 x（mg/L）对峰面积 y作
日落黄标准曲线(图 4)，回归方程为 y=6.82×104 x
-5.10×102，回归系数为 r=0.9998，方法检出限为
0.10 µg/kg（S/N=3）；苋菜红标准曲线（图 5）回归方
程为 y=5.23×104 x-4.38×102，回归系数为 r=0.9998；方
法检出限为 0.10 µg/kg（S/N=3）。
2.5 精密度和回收率实验
采用实际样品添加回收率来表示本方法的准确度
和精密度，添加样品的制备见1.5.3，按照上述规定的
色谱操作条件测定两种添加色素的含量，计算其回收
率及变异系数，结果见表2。

图4 日落黄的检测标准曲线图

图5 苋菜红的检测标准曲线图
表2 被测组分的回收率和相对标准偏差(n=6)
回收率/% 色素 添加量
/(mg/kg) 1 2 3 4 5 6
平均回
收率/%
相对标准
偏差/%
15.0 68.4 71.8 77.1 68.3 76.1 67.4 71.5 5.9
39.6 76.4 71.6 75.4 77.9 75.8 77.0 75.7 2.9 苋菜红
79.1 74.9 78.0 78.3 76.6 76.6 76.9 76.9 1.6
15.6 80.5 74.2 69.2 79.1 76.0 80.7 76.6 5.8
41.1 79.1 79.6 79.5 78.2 81.6 83.3 80.2 2.3 日落黄
82.3 80.8 83.2 79.9 80.3 82.3 81.9 81.4 1.5
由表 2可知，通过对实际添加的蛋卷样品分析的
准确度及精确度检验，本方法测定蛋卷中合成色素的
回收率为 71.5 %~81.4 %，变异系数为 1.5 %~5.9 %，
达到分析要求。因此，利用本方法进行蛋卷样品中合
成色素含量的测定，重现性好，能为试验提供可靠的
数据。
3 讨论
目前，我国食品中合成着色剂的检验依据[2]不适
合测定含淀粉和蛋白质的蛋卷中人为添加的合成色素
检测。因此，建立一种快速、准确、方便和经济的检
(下转第85页)
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根据表 1测定结果，以糖精钠浓度(mg/ml)的负对
数（-lgC）为纵坐标，平衡电位值（mV）为横坐标，
绘制标准曲线，见图 1。由图 1知糖精钠浓度在 0~10.0
mg/ml时，其线性回归方程为：y= -5.2087-0.02470x，
r=0.9965，显著相关。

图1 糖精钠标准曲线图
2.2 验证实验
为了使验证结果更具客观性和真实性，本实验直
接用离子选择电极法测定雪梅、杨梅和葡萄凉果样品
中的糖精钠含量，样品处理流程如下：
凉果（蜜饯）样品→切碎→加入 200 mL 0.06 mol/L NaOH
浸泡 24 h→量取浸出液 125 mL，加入 6 mol/L HCl 0.4 mL；20
mL 100 g/L CuSO4及 4.4 mL 40 g/L NaOH溶液，并混匀→静置
30 min后过滤→取100 mL滤液入加2 mL 6 mol/L HCl→分别用
20 mL，20 mL，10 mL乙醚提取 3次，合并提取液→提取液用
5 mL酸化水洗涤→50 mL容量瓶定容
准确吸取处理后的样品提取液 20.0 mL置于 50 mL
烧杯中，水浴加热挥发到干残渣，加入 5 mL总离子
强度调节缓冲液，小心转动，振摇使烧杯内残渣全部
溶解，转移入 50 mL容量瓶中，用少量水洗烧杯多次，
洗液并入容量瓶中，加水至刻度摇匀。测定其电位值
（mV），查标准曲线得测定液中的糖精钠含量，然后
将数据同原始添加量比较，具体见表 2。从表 2 知，
此方法能用于凉果中糖精钠的测定。
表2 凉果样品的测定结果
样品名
称
原始添加量*
(mg/ml)
电位值
/(mV)
测定结果
/(mg/ml)
相对误差
雪梅 0.65 -203 0.64 1.5%
杨梅 2.0 -222 1.88 6.0%
葡萄 4.5 -237 4.18 7.1%
注：此处原始添加量并非样品中原始糖精钠的添加量，而是经
稀释比例折算的添加量。
3 结论
糖精钠浓度在 0.0~10.0 mg/ml时，可用离子选择
电极法测定凉果中糖精钠。其浓度的负对数值与电位
值有良好的线性关系，回归方程为:y=-5.2087-0.0247x，
r＝0.9965。
另需注意的是，苯甲酸钠浓度小于 1000 mg/L时
对糖精钠的测定无明显影响，但水杨酸会对测定产生
严重干扰。
参考文献
[1] 黄德培,沈子琛,吴国梁,等.离子选择电极的原理及应用[M].
北京:新时代出版社,1982
[2] 谢声洛.离子选择电极分析电极[M].化学工业出版社,1985
[3] 中华人民共和国国家标准.食品卫生检验方法（理化部分）
[M].北京:中国标准出版社,2003
[4] 王叔淳.食品卫生检验技术手册[M].北京:化学工业出版社
(第三版),2002

(上接第80页)
测方法，有利于监控蛋卷厂家对苋菜红和日落黄合成
色素的使用，对于我国食品安全检测具有重要意义。
本研究建立了测定蛋卷中合成色素日落黄和苋菜
红的高效液相色谱分析方法。蛋卷中的合成色素经聚
酰胺吸附提取，采用 ODS 柱分离，甲醇和乙酸铵溶
液（0.02 mol/L）为流动相，测定蛋卷中苋菜红和日落
黄，结果相对标准偏差为 1.5 %~5.9 %，实际蛋卷样品
的回收率为 71.5 %~81.4 %，检出限均为 0.5 mg/kg,。
参考文献
[1] 中华人民共和国国家标准,GB 2760-1996食品添加剂使用
卫生标准[S].中国标准出版社,1996
[2] 中华人民共和国国家标准,GB/T 5009.35-2 003 食品中合
成着色剂的测定[S].中国标准出版社,2003