全 文 ：第 27卷第 3期
2008年 3月 　　　　　　　　　
分析测试学报
FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis)　　　　　　　　　
Vol.27No.3
319～ 321
收稿日期: 2007-01-16;修回日期:2007-03-15
第一作者:黄宝美(1979-), 女 , 山东沂水人 , 硕士, Tel:0816-8758582, E-mail:hbm790117@yahoo.com.cn
喜树果中喜树碱含量的高效毛细管
电泳安培法测定
黄宝美 1 , 姚程炜2 , 边清泉1 , 王秀峰 1 , 莫金垣 3
(1.绵阳师范学院　化学系 , 四川　绵阳　621000;2.中国气动中心第四研究所 , 四川　绵阳　622653;
3.中山大学　化学与化学工程学院 , 广东　广州　510275)
摘　要:建立了喜树果中喜树碱的高效毛细管电泳安培检测方法。着重探讨了缓冲溶液种类 、 浓度 、 酸碱度
及操作电压 、 进样时间等对检测的影响。 Na2B4O7 -NaOH(Na2B4O7浓度为 30 mmol/L)为电泳介质 , 在 15 kV
高压 , pH9.0的碱性条件下用柱端安培检测喜树碱含量。该法的线性范围为:1～ 100 mg/L, Y=11 020+
1 014.6ρ, r=0.999 4, 检出限为 0.5 mg/L。
关键词:毛细管电泳;喜树碱;伏安检测
中图分类号:O657.8;O629.3　　文献标识码:A　　文章编号:1004-4957(2008)03-0319-03
DeterminationofCamptothecinbyCapilaryElectrophoresiswith
AmperometricDetection
HUANGBao-mei1 , YAOCheng-wei2 , BIANQing-quan1 , WANGXiu-feng1 , MOJin-yuan3
(1.ChemicalDepartmentofMianyangNormalUniversity, Mianyang　621000, China;2.The4thInstituteof
ChinaAerodynamicResearch＆DevelopmentCenter, Mianyang　622653, China;3.SchoolofChemistryand
ChemicalEngineering, SunYat-senUniversity, Guangzhou　510275, China)
Abstract:CamptothecinfromFructusCamptothecaeAcuminataewasdeterminedbycapilaryelectro-
phoresiswithamperometricdetection(CE/AD).ThebuferpHvalue, thetypesofbufersolution,
theconcentrationofthebufer, theappliedvoltageandthesamplingtimewereselectedastheinvesti-
gationvariables.Undertheoptimizedconditions:arunningbufercomposedof30 mmol/LNa2B4O7
atpH9.0, separationvoltageat15kV, injectiontimefor10sanddetectionvoltageat0.8V, aline-
arityexistsbetweenpeakarea(Y)andmassconcentrationofcamptothecin(ρ)intherangeof1-100
mg/L, Y=11 020+1 014.6 ρ, r=0.999 4.Thedetectionlimitis0.5 mg/L.
Keywords:capilaryelectrophoresis;camptothecin;amperometricdetection
喜树碱(camptothecin, CPT)是从喜树中提取的一种生物碱 , 化学名 4-乙基-4, 12-二氧 -4-羟-1-H-吡
喃(3, 4 , 6, 7)吡吲哚(1, 2-6)喹啉 -3, 14-二酮;主要用于治疗消化道癌包括食管癌 、 贲门癌 、 结肠癌 、
直肠癌 、胃癌 、 肝癌 , 其中对胃癌的疗效最好 , 也用于银屑病 、 治疣以及血吸虫病引起的肝脾肿大等 ,
对肺癌 、绒毛膜上皮癌 、 膀胱癌 、急性白血病 、慢性粒细胞白血病也有一定疗效。
目前文献报道测定喜树碱类药物的方法有荧光分光光度法 [ 1] 、高效液相色谱法 [ 2-6] 、紫外分光光
度法[ 7] 、 四圆衍射法[ 8] 、 高效毛细管电泳区带法[ 9] 。毛细管电泳法作为一种灵敏快速的新兴分离手
段 , 虽灵敏度和重复性不如 LC-MS高 , 但具有分离效率高 、消耗样品少 、 无需昂贵的色谱柱与复杂
的前处理 、 维护较方便等优点 , 毛细管电泳电化学检测(CE/EC)中的安培法(AD)具有灵敏度高 、 检
测体积小及专属性等优点 , 尤其适合测定电活性物质 。目前尚无用毛细管电泳安培法检测喜树果中喜
树碱的报道 , 本文首次对喜树果中喜树碱的含量进行了测定 , 结果令人满意。
1　实验部分
1.1　仪器与试药
自组装毛细管电泳 /安培检测系统(CE/AD), 高压电源(CZE30PN10/MCN22, 美国 SpelmanHigh
分析测试学报 第 27卷
VoltageElectronicsCorporation), CES98-AD-IB型安培检测器(中山大学电分析室研制);三电极体系:
Pt片辅助电极 、 碳纤维电极和饱和甘汞电极 , 毛细管电泳数据站(中山大学电分析室研制), 石英毛细
管柱(45cm×75 μm), pHS-3C精密酸度计(上海电光器件厂)。
喜树碱对照品(绵阳师范学院制备 [ 10] );磷酸二氢钾 、 磷酸氢二钠 、 三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、
硼酸(H3BO3)、硼砂 、 甲醇 、邻苯二甲酸氢钾(KHP)、氢氧化钠均为分析纯;所用水为二次蒸馏水 。
1.2　对照品 、 样品与缓冲溶液的制备
精密称取经恒重的羟基喜树碱对照品 0.013 8g, 用适量甲醇溶解 , 置 50mL量瓶中 , 加甲醇稀释
至刻度 , 得 0.276 g/L的对照品溶液。
精密称取干燥喜树果粉(250μm)100mg, 加入 10mL甲醇超声提取 30 min, 过滤 , 同上再提取 2
次 , 合并提取液 , 减压浓缩后 , 用甲醇定容至 1mL, 用 0.45 μm的醋酸纤维膜过滤 , 得到样品溶液。
分别制备 100 mmol/L的硼砂 、 硼酸 、磷酸二氢钾 、磷酸氢二钠 、 Tris的储备液 , 各取适量配成不
同浓度比的缓冲体系 。
1.3　实验方法
进样前 , 毛细管依次用 0.1 mol/L的氢氧化钠 、二次蒸馏水和缓冲溶液各冲洗约 5 min, 每两次进
样之间用缓冲液冲洗 2 min, 以保证其重复性。本实验用柱端安培检测 , 三电极体系:碳纤维电极 , 饱
和甘汞电极 , Pt对电极 。采用重力进样方式 , 进样高度 20 cm, 时间 10 s, 分离毛细管长度 45 cm, 内
径 75μm, 分离电压 15kV。
图 1　喜树碱的动态伏安图
Fig.1　Hydrodynamicvoltammogramof
camptothecin30mmol/LofNa
2
B
4
O
7
(pH9.0)
separationvoltage:15 kV;inject
hight:20cm;injecttime:10s
2　结果与讨论
2.1　工作电极及其电位的选择
采用碳纤维电极为工作电极 , 在毛细管电泳仪上考
察了喜树碱的动态伏安(如图 1所示), 从 0.2 ～ 0.8 V,
峰电流不断增加 , 0.8 V时达到最大 , 电位正移时峰电
流又有所减小 , 所以本文选择 0.8 V为最佳检测电位。
2.2　缓冲溶液的选择
实验分别考察了 KHP、 NaOH-Na2B4O7 、 Tris-
H3BO3、 磷酸盐 4种不同体系对分离的影响 。实验发现
磷酸盐缓冲体系的基线噪音和基线偏移都较大;KHP
体系和 Tris-H3BO3中峰电流较小 , 峰拖尾严重 , 灵敏
度较低;而 NaOH-Na2B4O7缓冲溶液中峰形较理想 ,
灵敏度较高 。选择 NaOH-Na2B4O7为最佳缓冲溶液。实验发现 , 随着 B4O2-7 浓度增大迁移时间延长 ,
这是因为离子强度大 , 压缩了双电层 , 导致 Zeta电位降低 , 电渗流减小 , 从而迁移速率减小。当浓度
高于 30 mmol/L时 , 焦耳热明显增大 , 区带展宽严重 , 基线噪音也增大。综合考虑分离时间和峰形的
影响 , 实验选择 30 mmol/L的硼酸盐。
2.3　溶液 pH的选择
考察了 pH8.0、 8.5、 9.0、 9.5、 10.0对迁移时间和峰形的影响 , 实验发现随着 pH的增大 , 迁移
时间略有增加 , 峰形基本不变 , 本文选择 pH9.0。
2.4　分离高压与进样时间对分离的影响
实验采用瞬间加压的恒电压工作方式 , 考察了 10 ～ 30 kV高压对迁移时间和柱效的影响 , 实验发
现 , 电压 15 kV时 , 柱效最高 , 选择电压为 15 kV。
实验采用虹吸进样 , 进样高度为 20cm, 考察了进样时间对分离检测的影响 , 实验发现进样时间太
短 , 达不到检测器的灵敏度 , 若进样时间超过 10 s, 峰拖尾现象较严重 , 这是因为进样时间过长 , 进
样量增大 , 引起样品扩散 , 导致峰形扩宽 , 故选择进样时间为 10 s。
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第 3期 黄宝美等:喜树果中喜树碱含量的高效毛细管电泳安培法测定
图 2　喜树碱粗品的毛细管电泳图
Fig.2　Electropherogramof
camptothecinsample
2.5　重复性与线性回归方程
在最佳的实验条件下 , 将喜树碱标准品进样 6次 , 迁移时间和
峰面积的相对标准偏差分别为 0.8%和 1.9%。喜树碱在 1～ 100mg/L
范围内峰高(Y)与质量浓度(ρ)之间呈现良好的线性关系 , 回归方程
为:Y=11 020+1 014.6ρ, r=0.999 4, 检出限为 0.5 mg/L。
2.6　样品测定及加标回收实验
将 “1.2”处理好的喜树碱粗品 , 用外标法定量 , 进行回收测定 ,
回收率为 99%～ 104%, 结果见表 1。在最佳条件下 , 样品的毛细管
电泳图如图 2所示。
表 1　样品的回收率结果
Table1　Samplerecoverydetection
Original
ρO/(mg· L-1)
Added
ρA/(mg· L-1)
Found
ρF/(mg· L-1)
Recovery
R/%
1.0 0.50 1.52 104
1.00 1.99 99
1.50 2.49 99
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