全 文 ：收稿日期:2002-06-18
作者简介:张燕红 ,女 , 1969年生 ,工程师 ,主要从事仪器分析方面的工作 , Tel:(020)87113503-801 , E-mail:ceyhz@scut.edu.cn.
基金项目:广东省“九五”科技攻关项目(批准号:2KB01202S).
反相高效液相色谱法测定喜树果中喜树碱的含量
张燕红1 , 　刘展眉2 , 　沈慧芳1 , 　方岩雄3
(1.华南理工大学化学工程研究所 , 广东 广州 510640;2.仲凯农业技术学院基础部 , 广东 广州 510225;
3.广东工业大学化工系 , 广东 广州 510090)
摘要:采用反相高效液相色谱法 , 在 Kromasil C18色谱柱(5 μm , 250 mm×4.6 mm i.d.)上 , 以甲醇-水(体积比为 60∶
40)为流动相分离测定了喜树果中的喜树碱。流动相的流速为 0.8 mL/ min ,紫外检测波长为 254 nm。样品前处理
中 ,采用了超临界 CO2 萃取(乙醇作提携剂)、甲醇-氯仿温浸的方法从喜树果中提取喜树碱。实验结果表明 ,该法
的平均回收率为 95.8%～ 100.8%, 相对标准偏差为 1.2%～ 2.0%。方法快速 、准确 , 可用于实际样品的测定。
关键词:反相高效液相色谱法;喜树碱;喜树果
中图分类号:O658　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-8713(2003)02-0162-03
Determination of Camptothecin in Fruits of Camptotheca acuminata
Decne by Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography
ZHANG Yanhong1 , LIU Zhanmei2 , SHEN Huifang1 , FANG Yanx iong3
(1 .I nstitute of Chemical Engineering , South China University of Technology , Guangzhou 510640 , China;
2 .Department of Basic Courses , Zhongkai Agricultural Technical College , Guangzhou 510225 , China;
3 .Department of Chemical Engineering , Guangdong University of Technology , Guangzhou 510090 , China)
Abstract:A simple and rapid reversed-phase high performance liquid chromatog raphic method was de-
veloped for the determination of campto thecin in fruit s of Camptotheca acuminata Decne.The sample
w as pret reated w ith supercrit ical ex t raction using CO2 and ethanol.After the ex t raction , the residue
w as immersed in chlo roform-methanol(1∶1 , v/v).The chromatographic analy sis w as carried out us-
ing a Kromasil C18 column.The mobile phase w as methanol-water (60∶40 , v/v), at 0.8 mL/min.
The eluation w as monitored at UV 254 nm.The average recoveries w ere 95.8%-100.8% and the
relative standard deviations w ere 1.2%-2.0%.The results show ed it to be a rapid and accurate
method for the determination of camptothecin in fruits of Camptotheca acum inata Decne.
Key words:reversed-phase high performance liquid chromatog raphy ;camptothecin;f rui ts of Camp-
totheca acuminata Decne
　　喜树碱(camptothecin ,CPT)是我国特有植物喜
树(Camptotheca acum inata Decne)中所含的一种生
物碱[ 1] ,具有显著的抗肿瘤活性 。喜树碱本身毒性
大 ,无临床应用价值 ,但从喜树碱衍生物中筛选与喜
树碱具有相同抗癌机理且高效低毒的新化合物已成
为获得新型抗癌药物的途径之一。目前 ,已有两种
喜树碱衍生物(CPT-11和 TPT)获得美国食品和药
物管理局(FDA)批准临床用于治疗结肠/直肠癌及
卵巢癌 ,另外尚有数种正在进行临床试验。喜树碱
衍生物 、紫杉醇以及维生素甲类化合物抗癌治疗作
用的证实被誉为 20世纪 90年代抗癌药物的三大发
现[ 2] 。因此 ,喜树碱作为一种原料药仍具有相当重
要的生产及研究价值 ,喜树碱含量的测定能够有效
地指导该类药物的生产和基础研究。
　　湖北 、广西及上海药品标准均采用紫外分光光
度法测定喜树碱的含量 ,文献报道喜树碱的含量测
定还有荧光法和红外光谱法[ 3 ,4] 。用高效液相色谱
法分析喜树碱已有文献报道[ 5 ,6] 。本文采用超临界
CO2 萃取 、氯仿-甲醇温浸的方法从喜树果中提取喜
树碱 ,然后用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定
喜树碱的含量 。通过试验 ,确定了提取溶剂及提取
温度 ,选择了仪器的最佳工作参数 ,采用加标回收试
验验证了方法的准确度。实验结果表明 ,采用本法
可快速 、准确地测定喜树果中喜树碱的含量 。将本
2003年 3月
March 2003
色 谱
Chinese Journal of Chromatography
Vol.21 No.2
162 ～ 164
方法用于实际样品的测定 ,结果令人满意。
1　实验部分
1.1　仪器与实验材料
　　仪器:HP1100LC 系统(包括二元溶剂泵 、手动
进样器 、真空脱气机 、柱温箱 、光电二极管阵列紫外
检测器),数据采集和处理均在 HP 化学工作站(Re-
vA.08.03)上进行。HA230-50-30 超临界萃取装置
(江苏南通华安超临界萃取有限公司)。
　　试剂:甲醇为色谱纯;氯仿为分析纯;二次蒸馏
水;喜树碱对照品(黄石市园健医药科技有限公司生
产 ,纯度为 98%)和喜树果均由仲凯农业技术学院
提供 。
1.2　色谱条件
　　色谱柱为 Kromasil C18不锈钢柱(5 μm , 250
mm×4.6 mm i.d.)。流动相:甲醇-水(体积比为
60∶40),流速:0.8 mL/min 。进样量:10 μL。柱温:
25 ℃。检测波长:254 nm 。
1.3　实验方法
1.3.1　标准溶液配制
　　精密称取喜树碱对照品 2.00 mg ,置于 50 mL
容量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,得质量浓度为
39.20 mg·L-1的标准溶液。分别精密吸取标准溶
液 0.5 , 1.0 , 2.0 , 4.0和 8.0 mL 置于 10 mL 容量瓶
中 ,加甲醇至刻度 ,得质量浓度为 1.96 ,3.92 , 7.84 ,
15.68和 31.36 mg·L-1的系列标准溶液 。
1.3.2　样品制备
　　精密称取干燥喜树果粉(60 目)10.0 g ,在 50
℃时 ,用 15 mL 无水乙醇作提携剂 ,超临界 CO2 萃
取(萃取压力为 35 MPa ,萃取 3 h)。将萃取液浓缩
至干 ,然后用 25 mL 氯仿-甲醇(体积比为 1∶1)溶解
残渣 ,并在 50 ℃水浴中温浸 1 h 。冷却后 ,用 0.45
μm 的微孔滤膜过滤后进样分析。
2　结果与讨论
2.1　色谱分离条件的选择
　　试验了以不同比例的甲醇-水(体积比分别为
1∶1 ,40∶60 , 60∶40 ,70∶30 ,80∶20)溶液为流动相时的
分离情况。结果表明:甲醇-水的体积比为 60∶40时
的分离效果好 ,且保留时间短。检测波长在 254 nm
时 ,测定的干扰峰少 ,检测灵敏度符合实验的要求。
故本实验选择体积比为 60∶40的甲醇-水溶液作流
动相 ,254 nm 为检测波长。
2.2　喜树果提取溶剂及提取温度的选择
　　将喜树果萃取物分别在甲醇 、乙醇 、丙酮 、氯仿
和氯仿-甲醇(体积比为1∶1)中温浸(置于 50 ℃水浴
中)1 h , 得到喜树碱的回收率分别为 92.5%,
85.9%,82.3%, 91.8%, 98.9%(n =3)。结果表
明 ,以氯仿-甲醇(体积比为 1∶1)提取为佳 。取同一
样品数份于氯仿-甲醇(体积比为 1∶1)中分别温浸
1 ,2 ,3 h ,冷浸 1 , 2 ,3 h ,每个样品测定 3次 ,测得喜
树碱的质量分数分别为:51.63 ×10-6 , 50.02 ×
10
-6 , 50.36 ×10-6 , 47.85 ×10-6 , 47.29 ×10-6 ,
47.02×10-6 。从上述结果来看 ,在同一温度下 ,温
浸时间短反而好 ,这可能是由于样品中喜树碱遇热
易分解所致 。故选择在 50 ℃水浴中温浸 1 h为宜 。
2.3　喜树碱组分的定性和定量分析
　　本实验在相同的色谱条件下 ,将样品色谱图与
喜树碱标准色谱图进行对照 ,根据保留时间对提取
液中的喜树碱组分定性 。图 1中峰号为 1的物质为
喜树碱 ,此峰的峰形和分离度好 ,可准确测定其峰面
积 ,并以峰面积进行定量分析。
图 1　喜树碱对照品(a)和喜树果提取液(b)的色谱图
Fig.1　Chromatograms of camptothecin control(a)and the extract of the fruits of Camptotheca acuminata Decne(b)
1.camptothecin.
2.4　线性范围的考察和标准曲线的测定
　　以不同质量浓度的喜树碱标准液各 10μL 分别
进样 , 测定其峰面积 。以峰面积 A 对质量浓度
ρ(mg·L-1)作图可知 , 在质量浓度为 0.0 ～ 60.0
·163·　第 2期 张燕红等:反相高效液相色谱法测定喜树果中喜树碱的含量
mg·L-1时 , A 与ρ呈良好的线性关系 ,其线性回归
方程为:A =97.938 6ρ+18.958 3 , r =0.999 75。
本法的检出限为 0.10 mg·L-1(按 S / N=3计算)。
2.5　回收率和精密度试验
　　在已知其中喜树碱含量的实际样品中加入喜树
碱对照品 ,按“1.3.2”节制备样品溶液后进行测定 。
每份样品溶液进行 5 次平行测定 ,考察测定方法的
回收率和精密度 ,结果见表 1。
表 1　喜树碱的回收率和精密度测定(n=5)
Table 1　Recovery and precision of camptothecin(n=5)
Original/
(mg·L -1)
Added/
(mg·L-1)
Found/
(mg·L -1)
Recovery/
%
RSD/
%
20.41 7.84 27.92 95.8 2.0
20.41 15.68 35.95 99.1 1.2
20.41 31.36 52.02 100.8 1.2
　　从以上结果可以看出 ,采用 RP-HPLC 法测定
喜树果中喜树碱的含量 ,样品制备简便 ,分离效果
好 ,方法的精密度和回收率都很高 。本方法的建立
为喜树碱的含量测定提供了一个可靠 、快捷的分析
手段 。
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·164· 色 谱 第 21卷