全 文 ：食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2011年 第36卷 第6期提取物与应用
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藤 茶 属 葡 萄 科 ， 学 名 为 显 齿 蛇 葡 萄
(Ampelopsis grossedentata)，又名甘露茶、白茶
等。主要分布于广东、云南、贵州、湖南、湖
北、江西、福建等省区[ 1 ]。其味甘，性凉，具有
清热解毒、祛风湿、强筋骨、消炎、镇痛等功
效。民间将其幼嫩茎叶制成保健茶，用于治疗
感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疖等症
已有数百年的历史[2]，是一种典型的药食两用植
物。藤茶主要有效成分为黄酮类化合物，并以二
氢杨梅素(3,5,7,3,4,5 六羟基-2,3-双氢黄酮醇，
dihydromyricetin，DMY)含量最高。在干燥显齿蛇
葡萄茎叶中的质量分数可达30%以上[3]。
曹敏惠1,2，谢一萍1，倪德江1
(1.华中农业大学园艺林学学院，农业部亚热带农业资源与环境重点实验室，武汉
430070；2.华中农业大学理学院，武汉 430070)
摘要：主要研究了二氢杨梅素的新型绿色提取纯化方法。结果表明：采用热水提取法，通过单
因素分析和正交实验对提取工艺条件进行了优化。采用活性炭脱色、多次重结晶的纯化方法获
得了纯度在98%以上的二氢杨梅素。
关键词：藤茶；二氢杨梅素；绿色提取
中图分类号：R 284.2 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2011)06-0230-04
The new methods for green extraction and purifi cation of
dihydromyricetin from ampelopsis
CAO Min-hui1,2, XIE Yi-ping1, NI De-jiang1
(1.College of Horticulture and Forestry Science, Huazhong Agricultural University, Key Lab
of Subtropical Agriculture Resource and Environment, Wuhan 430070; 2.College of Sciences,
Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070)
Abstract: The new methods for green extraction and purifi cation of Dihydromyricetin from Ampelopsis were
studied. The results showed that Dihydromyricetin was extracted from ampelopsis by hot-water extraction
method. The new extraction method was optimized by orthogonal test. We get pure Dihydromyricetin (>98%)
by decolorization of activated carbon absorption and recrystallization.
Key words: ampelopsis grossedentata; dihydromyricetin; green extraction
藤茶中二氢杨梅素的绿色提取纯化
方法研究
收稿日期：2010-11-04
基金项目：农业部重大技术研究专项项目(06208202B)。
作者简介：曹敏惠(1977—)，女，湖北黄石人，博士，主要从事茶叶功能化学研究工作。
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2011.06.026
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目前，国内外已有部分学者开展了从藤茶中
提取二氢杨梅素的研究[4]，通常是以有机溶剂为提
取剂，如乙酸乙酯、正丁醇、乙醇等。这种方法
提取成本高，回收溶剂的能耗高，还存在费时、
提取率低、重现性差等不足之处。而且所用溶剂
通常有毒，不安全，易对环境和操作人员造成危
害。超临界萃取二氢杨梅素虽具有节省试剂，无
污染等优点，但回收率较差，为了获得超临界
条件，设备一次性投资较大，运行成本高[5-7]。
此外，还有大孔树脂吸附法、微波萃取法、逆流
法、乙醇辅助法[8]及超声波辅助溶剂提取法[9]等，
也存在费时、能耗大、过程复杂等缺点。我们通
过对二氢杨梅素理化性质研究发现，二氢杨梅素
是极性化合物，在热水和冷水中的溶解度差别很
大，因此可用热水作为提取剂提取；采用热水重
结晶的方法纯化，整个过程中没有用到任何有机
溶剂，而且溶剂水价格低、无毒，生产不造成环
境污染，工艺简单、萃取时间短。本研究以藤茶
为原料，热水为提取剂，采用多次重结晶的方法
纯化，实现了二氢杨梅素的绿色提取，探索出一
条适宜于中小型企业生产二氢杨梅素的工艺，为
二氢杨梅素的进一步利用提供基础。
1 实验部分
1.1 材料与主要仪器
藤茶： 湖南张家界茅岩莓品种；DMY标准
品：实验室制备，经色谱分析纯度达99％；磷
酸：分析纯，中国医药(集团)上海化学试剂公司；
甲醇：HPLC Grade 美国Fisher公司；蒸馏水；高
效液相色谱仪：美国VARIAN公司；紫外分光光度
计：日本岛津UV－2450；红外色谱仪：60SXB型
美国Nicolet；电热恒温干燥箱：SKFG-01型，黄
石医疗设备厂；电子分析天平：AW220，日本岛
津；数显恒温水浴锅：HH-6系列，常州国华电器
有限公司；循环水式真空泵：SHZ-D(Ⅲ)型，河南
巩义市英峪予华仪器厂；冰箱：BCD195KANDZ，
青岛海尔股份有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 提取方法 称取一定量粉碎后并过40目筛的
藤茶粉末于圆底烧瓶中，加入一定量的热水，在
恒温水浴锅中回流浸提后，趁热用100目的双层滤
布过滤，收集滤液；滤渣加等量的热水，在相同
条件下浸提一段时间，趁热趁热用100目的双层滤
布过滤；合并滤液，可得到浸提液。冷却静置后
结晶，过滤，真空干燥至恒重，得二氢杨梅素粗
提取物。
1.2.2 纯化方法
1.2.2.1 活性炭脱色 在加热条件下，热水溶解
二氢杨梅素粗样品，在溶解过程中同时加入活性
炭，趁热过滤，将滤液放入0~4 ℃的冰箱中静置
24 h 结晶。过滤，干燥得二氢杨梅素粗品。
1.2.2.2 重结晶纯化 取由以上方法制备的二氢杨
梅素干燥粗提取物按1:20的比例添加蒸馏水，加
热使粗提取物充分溶解，趁热抽滤，滤液置于4
℃冰箱中静置24 h，有大量灰白色晶体析出，过
滤，干燥。以一次结晶得到的产品为原料，同上
操作，如此反复重结晶，并分别计算每次结晶产
率和纯度，反复操作6次重结晶操作，最后得到纯
化的二氢杨梅素。
结晶产率以活性炭脱色后的二氢杨梅素的粗
产品为准进行计算，即每次结晶产品质量与二氢
杨梅素的粗产品质量的百分比。
1.2.3 分析方法
1.2.3.1 色谱条件 DMY含量测定：HPLC法。
色谱柱：Agilent TC-C18柱(150 mm×4.6 mm,
5-Micron)，流动相：甲醇－0.1%磷酸水(25:75)，
流速：1.0 mL/min，进样量：30 μL，柱温：30
℃，检测波长：294 nm[10-11]。
1.2.3.2 标准溶液及样品溶液的配制及测定 精密
称取已知含量的二氢杨梅素对照品10 mg(准确至
0.01 mg)于50 mL烧杯中，搅拌溶解，用无水甲醇
定容至100 mL容量瓶中，充分摇匀，用0.45 μm
滤膜过滤备用。按照上述色谱条件，对标准品溶
液进行测定。二氢杨梅素标准品的HPLC色谱见
图1，该条件下，二氢杨梅素的保留时间为4.053
min。然后用同样的方法对样品进行测定。
图1 二氢杨梅素标准品的HPLC色谱



































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2 结果与讨论
2.1 影响二氢杨梅素提取率的单因素实验
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2.1.1 提取温度对二氢杨梅素提取率的影响 称取
5份50 g粉碎并过40目筛的藤茶粉末于5个相同圆底
烧瓶中，在料液比为1:15，提取时间为90 min，提
取温度分别为60、70、80、90、100 ℃，实验结果
见图2。
5份50 g粉碎并过40目筛的藤茶粉末于5个相同圆
底烧瓶中，在提取温度为100 ℃，提取时间为60
min，料液比分别为1:5、1:10、1:15、1:20、1:25，
实验结果见图4。
图2 温度对二氢杨梅素提取率的影响
图3 提取时间对二氢杨梅素提取率的影响
图4 料液比对二氢杨梅素提取率的影响











    
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由图2可知，二氢杨梅素的提取率随着温度的
提高而增大。当温度低于80 ℃时，提取率较低。
在提取温度为90 ℃以上时，提取率较高。二氢杨
梅素在热水中的溶解度较高，但提取温度不能超
过100 ℃，一方面受实验条件限制，另一方面在
100 ℃以上提取时，其他黄酮类会被提取出来，
影响测定结果[12]。考虑到工厂生产成本，选取
80～100 ℃之间为正交实验的水平范围。
2.1.2 提取时间对二氢杨梅素提取率的影响 称取
5份50 g粉碎并过40目筛的藤茶粉末于5个相同圆底
烧瓶中，在提取温度为100 ℃，料水比为1:20，提
取时间分别为30、60、90、120、150 min，实验结
果见图3。
由图3知，提取时间少于60 min时随着提取时
间的延长，原料中二氢杨梅素的提取率会增大，
当时间达到60 min以后，提取率增加不明显。可
以推断，当提取时间达到60 min时，溶液体系中
原料细胞内外二氢杨梅素的浓度将达到平衡。提
取时间过长，会造成成本增加和对活性物质稳定
性的破坏。因此，不必无限制地延长提取时间，
故选取30~90 min为正交实验水平范围。
2.1.3 料液比对二氢杨梅素提取率的影响 称取
由图4可知，随着料液比的提高，藤茶中二
氢杨梅素的提取率不断增加，当料液比达到1:20
时，提取率增加不明显。可见，在此条件下，原
料中的二氢杨梅素溶出比较完全，没有必要继续
增大料液比。二氢杨梅素在藤茶中的含量随原料
来源、品质和储存时间的不同而有很大差异。选
取1:15～1:25为正交实验的水平范围。
2.3 二氢杨梅素提取的正交实验
根据单因素实验结果，选择提取温度、提取
时间、料液比作为实验因素进行考察，各取3个水
平，进行正交实验。正交实验因素水平表及实验
表1 正交实验因素水平表
因素
提取温度/℃ A 提取时间/min B 料液比 C
1 80 30 1:15
2 90 60 1:20
3 100 90 1:25
表2 正交实验结果
因素
A B C
1 1 1 1 15.67
2 1 2 2 17.89
3 1 3 3 20.13
4 2 1 3 28.76
5 2 2 1 26.53
6 2 3 2 27.89
7 3 1 2 28.06
8 3 2 1 31.03
9 3 3 3 26.77
k1 17.9 24.16 24.86
k2 27.73 25.15 24.47
k3 28.62 24.93 24.91
R 10.723 0.987 0.434 　
水平
实验号 提取率/%
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结果分别见表1、表2。
正交实验结果表明，各因素对原料中二氢
杨梅素提取效果的影响大小顺序为A>B>C，即提
取温度对二氢杨梅素的提取率影响最大，提取时
间影响次之，料液比影响较小。综合实验结果得
出二氢杨梅素的最佳提取条件为：A3B2C3，即提
取温度为100 ℃，提取时间为60 min，料液比为
1:25。在此最佳参数组合条件下，二氢杨梅素提
取率最高。
2.4 重结晶纯化实验结果
根据二氢杨梅素在不同温度的水中的溶解
度的差别，可用热水溶解、冷水结晶，使之不断
提高纯度。该法工艺相对简单，操作比较方便，
适应于中小企业应用该技术。在利用重结晶纯化
二氢杨梅素时，加入一定量活性炭可提高纯化速
度。具体实验结果见表3。
表3 水重结晶次数对DMY纯度和结晶产率影响
重结晶次数 产率/% 纯度/%
1 58.67 78.23
2 45.03 85.62
3 36.67 90.52
4 32.42 93.68
5 30.02 96.07
6 29.03 98.10
从表3看出，重结晶5次，纯度就已经在95%
以上，产品品质好。
3 结论
提取纯化某一天然产物并非只有一种固定的
办法，不同方法各有其优缺点。就本实验而言，
在提取纯化过程中，用水做溶剂，价格低、无
毒、不燃、生产不造成环境污染，工艺简单、
提取时间短、产品品质较好，是一种绿色提取纯
化技术。添加活性炭的方法，工艺相对简单，操
作比较方便，适应于中小企业应用该技术。用
水加热重结晶提纯法具有操作简便、安全、廉
价的优点。
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