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HPLC法测定不同产地香附中阿魏酸
李英霞， 侯立静
(山东省中医药研究院，山东 济南 250014)
收稿日期:2013-01-12
基金项目:山东省中医药 2007 － 2008 年度科技发展计划项目 (2007-110)
作者简介:李英霞 (1964—) ，女，硕士，研究员，硕士生导师，主要从事中药质量控制及中药资源开发研究。Tel : (0531)82949859
(0) ，E-mail :li_ yx1964@ 163. com
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定不同产地香附中酚酸类成分阿魏酸。方法 Kromasil C18色谱柱 (4. 6 mm × 150
mm，5 μm) ，流动相为甲醇-1%冰醋酸 (30 ∶ 70) ，检测波长为 320 nm。结果 阿魏酸在 0. 016 2 μg ～ 0. 162 μg 范围
内线性关系良好，r = 0. 999 6。11 个产地 13 批香附中阿魏酸含有量为 0. 027 2% ～ 0. 046 2%。结论 该方法快速、准
确，为香附药材的质量控制提供新的思路。
关键词:香附;阿魏酸;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2013)11-2548-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2013. 11. 059
香附为莎草科植物莎草 Cyperus rotundus L． 的干燥根
茎，始载于《名医别录》，列为中品。是中医理气解郁、
调经止痛之要药，用于肝郁气滞，胸胁胀痛，月经不调，
经闭痛经等症［1］。香附主产于山东、浙江等地，以山东出
产的质量最佳，奉为道地药材，尤以出产于泰安大汶河两
岸的“汶香附”和潍河两岸的 “潍香附”为佳［2］，历史
上称之为“东香附”。香附中主要含有挥发油类，油中的
α-香附酮为香附中调经解痛的有效成分之一［3］。对于香
附的定性和定量分析方法，2010 年版 《中国药典》一部
香附项下收载了 α-香附酮的薄层色谱 【鉴别】和挥发油
【含量测定】项，但挥发油含量实际测定时误差较大，另
外，仅对香附中挥发性成分进行控制也是不太全面的。香
附化学成分复杂，早期薄层鉴别显示还有三萜类、黄酮
类、糖类、酚类等［4］。近来，Soumaya 等又从香附中分离
到阿魏酸、儿茶酸、木犀草素、槲皮苷、阿福豆素、3，
4，5-三羟基苯甲酰喹啉酸、3-羟基，4-甲氧基苯甲酸和
6，7-二甲氧基香豆素 8 种新的化合物［5］。研究者发现香
附还具有抗氧化［5-6］、抗癌［7］、降血糖［8］、降血脂、抗血
栓［9］等作用，说明香附药理作用非常广泛，但长期以来
缺乏准确和全面的质量评定指标。曾采用 HPLC 法对 8 个
产地香附中的黄酮类成分木犀草素进行过测定［10］，但其
含有量均偏低 (17. 82 ～ 57. 35μg /g)。在实验过程中又发
现不同产地香附中均含有阿魏酸成分，且阿魏酸具有抗血
小板聚集［11］、抗炎［12］、抗氧化［13］等作用，也为香附中
的活性成分，该成分含量的多少可以反应出香附药材质量
的优劣，因此，本实验建立了 HPLC测定香附中阿魏酸的
方法，并对 11 个产地 13 批香附中该成分进行了测定，旨
为建立准确和全面的香附药材质量评价指标提供科学
依据。
1 实验材料
1. 1 仪器 Waters 600 高效液相色谱仪 (美国 waters 公
司) ，Waters 600 四元梯度泵，996 二极管阵列检测器，Em-
power工作站;XS205DU型电子天平 (梅特勒—托利多仪器
有限公司)。
1. 2 药材与试剂 收集了山东主产地及浙江、河南、广西
等 11 个产地的 13 批香附药材，
经笔者鉴定为莎草科植物莎草 Cyperus rotundus L． 的
干燥根茎。阿魏酸对照品购自中国药品生物制品检定所，
批号 0773-9910，供含量测定用。甲醇为色谱纯，水为高纯
水，其余试剂均为分析纯。
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2013 年 11 月
第 35 卷 第 11 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
November 2013
Vol． 35 No． 11
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱 (4. 6 mm × 150 mm，
5 μm) ，流动相为甲醇-1%冰醋酸 (30 ∶ 70) ，体积流量
1. 0 mL /min，柱温为室温，检测波长 320 nm，进样量
10 μL。阿魏酸对照品和香附样品色谱图见图 1。
1． 阿魏酸
图 1 对照品 (A)和香附样品 (B)HPLC图
2. 2 对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品约 8 mg，精密称
定，置 50 mL棕色量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，摇
匀，制成质量浓度为 0. 162 mg /mL 的贮备液。取上述贮备
液 200 μL，置 10 mL量瓶中，制成每 1 mL 含 0. 003 24 mg
的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取香附样品粉末 (过 60 目)
0. 5 g，精密称定，加含 5%盐酸的 70%乙醇溶液 50 mL，
密塞，称定质量，加热回流 3 h，放冷，再称定质量，用相
应溶剂补足减失的质量，摇匀，静置，取上清液作为供试
品溶液。
2. 4 测定波长的选择 取阿魏酸对照品溶液适量，在
200 ～ 400 nm波长范围内进行扫描，测定阿魏酸的吸收峰，
结果显示，阿魏酸对照品在 320 nm波长处有最大吸收，故
选择测定波长为 320 nm。
2. 5 线性关系的考察 分别吸取上述对照品贮备液 100、
200、300、400、500、700、1 000 μL 分别置 10 mL 量瓶
中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成相应质量浓度的对照
品溶液，进样 10 μL，记录峰面积，以对照品进样量 (X)
为横坐标，以峰面积为纵坐标 (Y)进行回归分析，得回
归方程为 Y = 1. 06 × 107X － 46 810. 34，r = 0. 999 6，结果表
明，阿魏酸在 0. 016 2 ～ 0. 162 μg之间线性关系良好。
2. 6 精密度试验 精密吸取质量浓度为 0. 003 24 mg /mL
的对照品溶液 10 μL，连续进样 5 次，结果阿魏酸峰面积
ＲSD为 0. 52%，表明仪器精密度良好。
2. 7 稳定性试验 精密吸取 2 号香附样品溶液 10 μL，分
别在 0、2、4、8 h进样测定，记录峰面积，结果平均峰面
积为 344 707，ＲSD 为 1. 08%，表明阿魏酸在 8 h 内比较
稳定。
2. 8 重复性试验 平行操作制备 2 号香附样品溶液 5 份，
分别吸取 10 μL，进样测定，结果阿魏酸的平均质量分数
为 0. 040 3%，ＲSD为 1. 69%，表明该方法重复性良好。
2. 9 回收率试验 分别取 5 份已知含有量的 2 号香附粉末
0. 25 g，分别加入质量浓度为 0. 094 mg /mL 的对照品溶液
1 mL，分别制备供试品溶液，进样测定，记录峰面积。结
果阿魏酸的平均回收率为 98. 75%，ＲSD 为 1. 18%，表明
本方法的回收率符合要求。结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
取样量
/mg
样品中
量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
250. 1 0. 100 8 0. 094 0. 194 1 99. 26
250. 5 0. 101 0 0. 094 0. 193 3 98. 19
248. 3 0. 100 0 0. 094 0. 192 6 98. 51 98. 75 1. 18
250. 7 0. 101 0 0. 094 0. 195 4 100. 43
243. 8 0. 098 3 0. 094 0. 189 8 97. 34
2. 10 样品测定 取不同产地的香附粉末适量，按 2. 3 项
下方法制备供试品溶液，同时按 2. 2 项下方法制备对照品
溶液，进样测定，结果见表 2。
表 2 不同产地香附中阿魏酸测定结果 (n =3)
产地 阿魏酸 /% ＲSD /%
泰安东平 0. 040 3 0. 37
泰安 0. 032 2 0. 67
临沂 0. 029 3 1. 32
临沂沂水 0. 046 2 0. 98
潍坊 0. 033 2 0. 60
梁山 0. 037 3 0. 76
荷泽 0. 028 0 1. 70
山东 0. 033 9 1. 24
云南大理 0. 030 8 1. 21
海南 0. 036 3 0. 95
河南社旗 0. 037 7 1. 10
浙江 0. 027 2 0. 91
广西 0. 032 4 0. 31
3 小结与讨论
3. 1 实验中曾比较过香附超声法和回流法的提取效果，结
果以回流法提取测得的阿魏酸量远高于超声法，故确定以
回流法提取。同时对提取条件如溶剂 (70%乙醇、50%乙
醇、70%甲醇、含 5%盐酸的 70%乙醇)和提取时间进行
了选择，最终确定了最佳提取条件为以含 5%盐酸的 70%
乙醇提取 3h。
3. 2 测定结果显示，11 个产地 13 批香附药材中阿魏酸质
量分数在 0. 027 2% ～0. 046 2%，不同产地差别不大。
3. 3 本实验采用 HPLC 法测定香附中阿魏酸，方法准确、
可靠，为香附中酚酸类成分的定量分析提供了一种科学
方法。
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