全 文 ：土槿皮乙酸对肝癌 BEL-7402细胞转移能力的影响
李丹丹　李岩
【摘要】　目的　研究土槿皮乙酸对人肝癌 BEL-7402细胞株转移能力的影响 。方法　体外培养人
肝癌 BEL-7402细胞株 ,用不同浓度 PAB及只用培养基(对照组)作用不同时间后 ,应用 MTT法筛选最佳
药物浓度 。通过 Transwel检测 PAB对细胞迁移能力的影响。结果　土槿皮乙酸作用后肝癌细胞粘附率
较对照组明显下降(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性 。土槿皮乙酸作用后迁移细胞数明显低于对照
组 。结论　土槿皮乙酸能抑制肝癌细胞增殖 ,降低肝癌细胞转移能力 。
【关键词】　土槿皮乙酸;肝癌细胞;增殖;转移
　　作者单位:110004 中国医科大学附属盛京医院
　　土槿皮乙酸(pseudorlaricacid-B, PAB)是从我国的松科
植物金钱松的根皮及近根皮中分离出来的二萜类化合物 , 为
一种单体成分。研究证明 PAB可以抑制胃癌 [ 1, 2] 、肝癌 [ 3] 、宫
颈癌 [ 4]白血病 [ 5]等多种肿瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡 , 但
尚未发现有关 PAB对肝癌侵袭转移作用的报道 , 本实验将探
讨 PAB对肝癌细胞转移能力的影响 , 以为进一步开发治疗肝
癌的新药提供试验依据。
1　资料与方法
1.1　细胞株与细胞培养　人肝癌细胞株 BEL-7402由中国医
科大学附属盛京医院传染科实验室惠赠 ,在含 10%胎牛血清
的 RPMI1640培养液 、饱和湿度 , 饱和温度为 37℃, CO2浓度
为 5%的培养箱中培养。
1.2　材料　RPMI1640培养基购自 Gibco公司 、胎牛血清购
自天津灏洋生物制品公司;噻唑蓝(MTT)购自 Sigma公司;
带有 8μm微孔聚碳酸酯膜的 Transwel细胞培养小室购于美
国 Costar公司。土槿皮乙酸标准品购自中国药品生物制品检
定所 , 批号:110880。
1.3　MTT比色法检测细胞增殖　收集对数生长期的 BEL-
7402细胞 , 接种于用 96孔培养板中 , 每孔 100 μl。实验组一
组加 0.5 μmol/L-1PAB分别培养 24、48、 72 h, 另一组加入不
同浓度的 PAB使其终浓度分别为 4、2、 1、0.5 μmol/L,培养 24
h。对照组加入 100μl含 10%胎牛血清的培养基 , 于上述培
养时间后 , 加入浓度为 5 g/L的 MTT20 μl。继续培养 4 h后
加 DMSO150 μl, 振荡 10 min后 , 用酶联仪于 570 nm处测出
各孔吸光度值(OD), 计算生长抑制率 , 实验重复 3次。 生长
抑制率 =[ 1-(处理组平均 OD值 /对照组平均 OD值)]
×100%。
1.4　Transwel检测　PAB对 BEL-7402细胞转移能力的影响
取指数生长期的细胞用于实验 , 打匀的细胞悬液加入 Tran-
swel小室 , 同时加入 0.5 μmol/L-1PAB, 我选择的 PAB浓度
是用 MTT筛选出的 72 h的 IC50, 以血清浓度差作为趋化条
件:小室内为含 1%血清的培养基 ,下室为含 30%血清的培养
基。常规培养 24 h后予甲醇固定 , 姬姆萨染色 , 取膜 , 封片 ,
镜检。
1.5　统计学方法　采用 SPSS13.0统计软件 ,计量资料以均
数(x±s)表示 , 采用 t检验 , P<0.05具有统计学意义。
2　结果
2.1　PAB对 BEL-7402细胞增殖的影响 　不同浓度 PAB
(0.5, 1.0, 2.0, 4.0)作用相同时间 , 随着药物浓度的增加 , 对
细胞生长的抑制率增加 , 相同浓度 PAB作用不同时间(24,
48, 48 h),随着时间的增加 ,对细胞生长的抑制率增加。 表现
出明显的剂量依赖性和时间依赖性 0.5 μmol/LPAB作用 24
h,对细胞生长无显著影响。 (表 1)
表 1　MTT法检测 PAB对 Bel-7402细胞增殖的影响
PAB浓度 24h 48h 72h
0(对照组) 0±1.83 0±0.56 0±2.37
0.5 3.81±1.35 37.80±4.52 46.43±6.13
1 9.04±2.03 42.13±5.21 58.92±5.87
2 24.80±5.67 58.61±7.08 97.53±8.34
4 43.81±6.23 70.02±10.25 98.22±8.26
2.2　PAB对 BEL-7402细胞转移能力的影响　 0.5 μmol/
LPAB组作用 24h后迁移细胞数明显低于对照组 , 对照组细
胞轮廓清晰 , 活力旺盛 , PAB组细胞明显变圆 , 稀疏。提示
PAB对于肝癌 BEL-7402细胞的迁移能力有明显的抑制作用
(见图 1)。
BEL-7402对照组
0.5μmol/LPAB处理 BEL-7402细胞 24h实验组
图 1　Transwell检测 PAB对 BEL-7402细胞迁移的影响
3　讨论
土槿乙酸传统上是作为一种抗真菌药物 , 后来发现其具
有抗生育 、抗血管生成和抗肿瘤作用。研究证明 PAB可以抑
制胃癌 [ 1, 2] 、肺癌 、肝癌 [ 3] 、宫颈癌 [ 4]白血病 [ 5]等多种肿瘤细
胞的增殖并诱导细胞凋亡 , 但尚未发现有关 PAB对肝癌侵袭
转移作用的报道 , 本实验研究发现土槿皮乙酸作用后肝癌细
胞粘附率 、转移细胞数较对照组明显下降(P<0.05), 并呈时
间和浓度依赖性。土槿皮乙酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影
响 , 其作用机制可能与清除氧自由基 ,作用于细胞周期集细胞
周期蛋白依赖性激酶 , 影响 p53、Bcl-2家族 、Caspase激活 [ 6] ,
影响与肿瘤发生密切相关的细胞信号传导通路等有关。
PAB具有明确的抑制血管生成作用 ,血管内皮生长因子
(VEGF)是最具有效性和特异性的诱导血管内皮生成的因
子 [ 7] ,是多种抗肿瘤药物的作用靶点。 2004年 TanWF等的
研究显示 PAB可以阻止 VEGF诱导的KDR磷酸化 , 但是并不
影响 KDR的总蛋白水平。另外 PAB也降低了 Akt和 ERK的
磷酸化 [ 8] 。土槿皮乙酸有效剂量内并未观察到毒性反应 , 通
过用 BALB/C-nu祼鼠进行活体肝肿瘤药敏试验显示:PAB对
·160· 中国实用医药 2011年 2月第 6卷第 4期　ChinaPracMed, Feb2011, Vol.6, No.4DOI :10.14163/j.cnki.11-5547/r.2011.04.018
肿廇的抑制呈剂量依赖性 , 25mg/(kg· d)的剂量可以被动物
耐受 , 且没有毒性表现和体质量减轻现象 [ 9] 。
综上所述 , 土槿皮乙酸对肝癌细胞增殖和凋亡 [ 3]确实有
影响 , 本实验发现土槿皮乙酸对肝癌转移能力有抑制作用 , 但
其作用机制还有待进一步研究 , 以为进一步开发治疗肝癌的
新药提供试验依据。
参　考　文　献
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头孢他啶联合阿米卡星治疗重症社区获得性
肺炎 54例临床分析
郭慎
　　作者单位:476800 河南省民权县公疗医院
　　重症社区获得性肺炎除常见呼吸系统症状外 ,尚有呼吸
衰竭和其他系统受累的表现 ,预后差 , 病死率高 ,早期合理抗
菌治疗是降低死亡率的关键。我院内科 2008年共收治重症
社区获得性肺炎患者 54例 , 通过头孢他啶联合阿米卡星治
疗 , 疗效显著 ,报告如下。
1　临床资料
1.1　病例纳入标准　按照 2007年美国感染病学会 /美国胸
科学会共同发布的成人社区获得性肺炎诊治指南中关于重症
社区获得性肺炎的界定 , 主要指标:①需行机械通气;②出现
感染性休克 , 需要使用血管升压类药物。次要指标:①呼吸频
率≥ 30次 /min;②动脉血氧分压 /吸入气体中氧的含量≤
250;③多肺叶浸润;④意识错乱 /定向障碍;⑤尿毒症 [血尿
素氮≥200mg/L] ;⑥白细胞减少(<4 ×109 /L);⑦血小板减
少(<100×109 /L);⑧低体温;⑨需要积极体液复苏的低血
压。符合 1条主要标准或 3条次要标准即可诊断为重症社区
获得性肺炎 [ 1] 。
1.2　病例选择　2008年我院内科收治的符合上述诊断标准
且有痰培养结果的患者 54例 ,男 31例 , 女 23例 ,年龄 36 ～ 86
岁 , 平均 (57.0 ± 2.7)岁。 其中伴 随高血压 病 10 例
(18.5%), 糖尿病 7例(13.1%),冠心病 5例(9.3%),肿瘤 3
例(5.6%), 风湿性心脏瓣膜病 1例 ,贫血 1例。
1.3　实验室检查　全部病例在治疗开始前行痰培养 , 晨起口
腔清洁后协助患者咳出深部痰 ,以无菌生理盐水冲洗后送检。
共检出病原菌 46株 ,其中铜绿假单胞菌 15株 , 肺炎克雷佰菌
11株 , 鲍氏不动杆菌 7株 , 大肠埃希菌 5株 ,阴沟肠杆菌 4株 ,
肺炎链球菌 3株 , 金黄色葡萄球菌 1株。对头孢他啶高度敏
感 27株 ,对阿米卡星高度敏感 21株。 54例重症社区获得性
肺炎患者 , 入院均行血 、尿常规 ,肝 、肾功能检查 ,疗程结束后
重复以上检查 , 以观察药物疗效和不良反应。结果:血 、尿常
规 , 肝 、肾功能除受原发疾病影响外 , 均无异常改变。
1.4　治疗　全部病例抗生素均为:每日给予头孢他啶 6 g, 分
两次稀释于 100 ml生理盐水中静脉点滴;阿米卡星 0.4 g稀
释于 250ml生理盐水中静脉点滴。 14 d一个疗程。同时配
合解痉 、化痰 、平喘 、支持 、调节水电解质平衡紊乱等综合
治疗。
1.5　疗效标准　按卫生部颁布的《抗菌药物临床研究指导
原则》 [ 2] :痊愈为症状 、体征 , 实验室检查及细胞学检查 4项
指标均完全恢复正常。显效:病情明显好转 ,但 4项指标中至
少 1项未完全恢复正常。进步:病情有好转 ,但不够明显。无
效:用药 72 h后 , 病情无好转或病情加重。根据痊愈和显效
计算有效率。
2　结果
54例患者痊愈 38例(70.4%), 显效 11例(20.4%), 进
步 3例(5.6%),无效 2例(3.7%), 有效率为 90.8%。不良
反应:本组病例未发生明显不良反应 , 治疗前后查血 、尿常规
及肝 、肾功能等未见相关异常。
3　讨论
重症社区获得性肺炎是严重威胁人类健康的常见呼吸道
感染性疾病 , 在全球各个国家均有很高的发病率和病死率 , 且
多为老年患者 , 合并症多 , 合理选择抗菌药物 , 迅速有效的控
制感染是治疗的关键。 头孢他啶属第三代广谱头孢菌素 , 通
过抑制细菌壁的生成而起杀菌作用 , 对 β -内酰胺酶作用高度
稳定 [ 3] ,对临床常见的革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌 、肺
炎链球菌等和大多数革兰氏阴性菌 , 包括肺炎克雷伯杆菌 、大
肠杆菌等均有较强的抗菌作用 , 对肠球菌 、绿脓杆菌等也有一
定的抗菌作用。阿米卡星是一种氨基糖苷类抗生素 , 为卡那
霉素 A的酰化衍生物 , 结构修饰之后 , 对氨基糖苷灭活酶具
有较高的稳定性 , 对多数肠杆菌科细菌 、铜绿假单胞菌及部分
·161·中国实用医药 2011年 2月第 6卷第 4期　ChinaPracMed, Feb2011, Vol.6, No.4