全 文 ：毛细管电泳高频电导法测定女贞子中
齐墩果酸和熊果酸的含量
巫利璇 1 ,朱培仪2 ,宋粉云 2＊
(1.广东省中医院 ,广东 广州 510105;2.广东药学院 ,广东 广州 510240)
摘要 目的:建立女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法。方法:采用毛细管区带电泳 , 高频电导检测;
未涂层弹性融硅石英毛细管柱(55 cm×75 μmID);1.2 mmol/L三乙胺-HCl(pH=10.60), 0.08 mmol/Lβ-环糊精
为运行缓冲液;分离电压 12.5 kV;重力进样 10s(高度 20 cm)。结果:以布洛芬为内标 ,齐墩果酸 、熊果酸线性范围
分别为 4.1 ～ 114.8 μg/mL(r=0.9995)和 4.3 ～ 120.4 μg/mL(r=0.9996);平均回收率分别为 95.9%和 97.1%。
结论:该法简便 、准确 、快速 、重现性好 , 可用于女贞子药材中齐墩果酸和熊果酸的含量测定。
关键词 毛细管电泳;高频电导检测;女贞子;齐墩果酸;熊果酸
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2009)04-0543-02
收稿日期:2008-08-21基金项目:广东省自然科学基金项目(5002841)作者简介:巫利璇(1955-),女,主管药师 ,研究方向:医院药学工作;Tel:15918847872, E-mail:wwxx37@163.com。＊通讯作者:宋粉云 , Tel:13660528126, E-mail:fuhaiwu@ 163.com。
女贞子为木犀科女贞属植物女贞 Ligustrumlu-
cidumAit的干燥成熟果实 ,性凉 ,味甘 、苦 ,用于眩
晕耳鸣 、腰膝酸软 、须发早白 、目暗不明〔1〕。 2005年
版中国药典一部对女贞子中的齐墩果酸(OA)采用
薄层色谱法进行定量控制 ,但因女贞子中还含有熊
果酸(UA),二者属同分异构体 , TLC法定量时 ,二者
相互干扰。本文采用毛细管区带电泳高频电导检测
的方法 ,对不同产地女贞子药材中的 OA和 UA进
行含量测定研究 。避免了化合物末端紫外吸收的限
制 ,并且装置简单 ,方法易行 。从测定结果显示 ,该
法具有分离效果好 、快速 、价廉 、简便等优点 ,为药材
质量控制提供依据。
1 仪器和试药
CES2003毛细管电泳仪 ,包括高压电源 、高频电
导检测器及毛细管电泳数据工作站(中山大学化学
与化学工程学院研制)。 ORIONMODEL828型 pH
计(美国)。 DL-360超声波清洗器(宁波石浦每天
电子仪器厂)。未涂层弹性融硅石英毛细管柱(55
cm×75 μmID,河北永年锐沣色谱器件有限公司)。
女贞子样品(批号 1:购自浙江;批号 2:购自四
川;批号 3:购自江苏),经广东药学院生药学教研室
房志坚教授鉴定为真品。将其粉碎 ,于 60℃下干燥
4 h,置干燥器内备用 。定量方法学考察采用的样品
为批号 1的女贞子药材。
齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号:110709-200505);熊果酸对照品(中国药品生
物制品检定所 ,批号:110742-200506);布洛芬对照
品 (中国药品生物制品检定所 , 批号:100179-
200303);β-环糊精(中国医药集团上海化学试剂公
司);三乙胺等试剂均为分析纯;水为去离子水。
2 实验部分
2.1 溶液的制备
2.1.1 内标溶液:精密称取布洛芬对照品 40.6
mg,置 50mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,作为内标贮备液(浓度为 812 μg/mL)。
2.1.2 对照品溶液:精密称取 OA对照品 16.4
mg、UA对照品 17.2 mg,置 50 mL量瓶中 ,加甲醇溶
解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品贮备液(浓度分
别为 328μg/mL和 344μg/mL)。
2.1.3 供试品溶液:取本品粉末约 1 g,精密称定 ,
置索氏提取器中 ,加甲醇 80 mL,加热回流 2 h,放
冷 ,提取液置 100 mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,
溶液经 0.45 μm滤膜过滤 ,作为供试品溶液 。
2.2 电泳条件 未涂层弹性融硅石英毛细管柱
(55 cm×75μmID),有效长度 50 cm;以 1.2 mmol/
L三乙胺 -HCl(pH=10.60), 0.08 mmol/Lβ-环糊精
为运行缓冲液;分离电压 12.5 kV;重力进样 10 s
(高度 20 cm);温度 25℃,湿度小于 45%。毛细管
柱在使用前依次用去离子水 、0.1 mol/L的 NaOH溶
液 、去离子水 、缓冲液各冲洗 5min;检测电极和缓冲
液容器用超声波清洗 10min。进样 5次之后也需按
照上述步骤清洗毛细管 。在此条件下 ,对照品 、样品
色谱图如图 1所示 。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线制备:分别吸取一定量的对照品
贮备液 、内标溶液 ,加甲醇稀释成齐墩果酸浓度为
·543·JournalofChineseMedicinalMaterials 第 32卷第 4期 2009年 4月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2009.04.028
图 1 对照品(A)和样品(B)的毛细管电泳色谱图
1.齐墩果酸 2.熊果酸 3.布洛芬 4.系统峰
4.1、8.2、16.4、32.8、49.2、82.0、114.8 μg/mL,熊果
酸浓度为 4.3、 8.6、 17.2、 34.4、 51.6、 86.0、 120.4
μg/mL与内标溶液浓度均为 40.6 μg/mL的溶液 。
依次重力进样 10 s,每个浓度测定 3次以上 。以对
照品与内标峰面积的比值(Y)为纵坐标 ,对照品溶
液浓度(C)为横坐标进行线性回归 ,分别得回归方
程 YOA = 0.012C-0.0321 (r=0.9995);YUA =
0.0119C-0.0309(r=0.9996)。表明 OA浓度在 4.1
～ 114.8 μg/mL、UA浓度在 4.3 ～ 120.4 μg/mL范
围内与峰面积的线性关系良好 。
2.3.2 精密度试验:取浓度分别为 82.0、86.0μg/
mL的 OA与 UA对照品溶液 ,重力进样 10s,连续测
定 5次 ,记录峰面积并计算 RSD。结果 OA的 RSD
为 2.48%、UA的 RSD为 3.73%,表明仪器精密度
良好。
2.3.3 稳定性试验:取供试品溶液(批号 1)在 0、
2、4、8、24h,分别重力进样 10 s,记录峰面积 。结果
OA的 RSD为 4.54%、UA的 RSD为 3.71%,表明供
试品溶液在 24h内基本稳定 。
2.3.4 重复性试验:取同一批号(批号 1)样品 6
份 ,按 “2.1.3”项下方法提取 、测定 。结果 OA的平
均含量为 10.44 mg/g, RSD为 2.16%(n=6);UA
的平均含量为 2.60 mg/g, RSD为 2.38%(n=6)。
表明分析方法重复性良好 。
2.3.5 加样回收率试验:精密称取同一批号(批号
1)的女贞子药材共 6份 ,加入相应量的 OA和 UA
对照品 ,按 “2.1.3”项下方法处理并测定 ,计算回收
率 ,结果见表 1 和表 2。 OA的平均回收率为
95.9%、 RSD为 0.88%;UA的 平均回收 率为
97.1%、RSD为 2.83%。
表 1 OA加样回收率试验结果(n=6)
样品重 /g OA量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
0.5122 5.345 4.920 10.121 97.3
0.5031 5.250 4.920 9.950 95.8
0.5068 5.290 4.920 9.940 94.9
0.4976 5.193 4.920 9.864 95.2
0.5068 5.289 4.920 10.003 96.1
0.5024 5.243 4.920 9.964 96.2
平均回收率:95.9% RSD=0.88%
表 2 UA加样回收率试验结果(n=6)
样品重 /g OA量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
0.5122 1.333 1.376 2.740 102.3
0.5031 1.309 1.376 2.623 95.3
0.5068 1.319 1.376 2.645 96.2
0.4976 1.295 1.376 2.604 94.8
0.5068 1.319 1.376 2.644 96.1
0.5024 1.307 1.376 2.653 97.7
平均回收率:97.1% RSD=2.83%
2.4 样品测定 取不同产地的女贞子 ,按 “2.1.3”
项下方法处理后测定 ,记录峰面积 ,计算样品中齐墩
果酸和熊果酸的含量 ,结果见表 3。
表 3 女贞子样品中 OA和 UA的含量测定结果
产地 OA含量 /(mg/g) RSD/% UA含量 /(mg/g) RSD/%
浙江 10.44 2.16 2.60 2.38
四川 9.79 2.57 2.47 2.79
江苏 10.28 3.53 3.22 1.95
3 结论
在优化的实验条件下 ,女贞子样品中 OA和 UA
可以在 6 min之内得到很好的分离 ,且高频电导检
测器使用方便 ,灵敏度较高 ,可用于女贞子药材中
OA和 UA的含量测定。
参 考 文 献
[ 1] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [ S] .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005:31.
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