全 文 ：次证明五倍子能促进早期龋的再矿化 , 而蜂房无明显矿化作用 ,
其结果与表面显微硬度测量结果一致 。本实验通过样本再矿化
前后形态学自身对照 ,避免了不同样本之间的不均一性 , 准确地
反映了再矿化是部分溶解的晶体被来源于溶液中的钙磷离子沉
积诱导而增长的过程。五倍子中的主要成分为鞣质及没食子酸。
研究证明 ,鞣酸能与细胞外或组织外的钙离子的络合 , 形成难溶
性的络合物 , 食物中的鞣酸能影响人体对钙离子的吸收 [ 10, 11] 。
结果表明 ,五倍子对早期釉质龋具有再矿化作用 , 其再矿化主要
发生在表层和表层下 ,故推测五倍子再矿化的作用机制可能是鞣
酸与溶液中的钙离子发生反应形成络合物 ,通过釉质表面微孔道
渗透进龋损内部 ,促进钙离子沉积 , 从而引导部分溶解晶体增长
促进了再矿化。
本研究通过体外 pH循环实验 , 发现五倍子有促进早期釉质
龋再矿化的作用 ,虽然效果不如氟化钠 , 但作为一种非氟的防龋
药物 ,仍具有重要的研究前景和应用价值。
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收稿日期:2007-04-02;　修订日期:2007-05-20
基金项目:国家 “ 863”计划重点资助项目(No.2002AAZ3217)
作者简介:邹盛勤 (1970-),男(汉族),江西奉新人 ,现任江西省天然药物
活性成分研究重点实验室·宜春学院生物工程研究所副教授 ,在职硕士
研究生 ,学士学位 ,主要从事天然药物成分提取与分析研究工作.
高效液相色谱 -光电二极管阵列检测器法
同时测定柿蒂中乌索酸和齐墩果酸含量
邹盛勤 , 陈　武
(江西省天然药物活性成分研究重点实验室 ·宜春学院生物工程研究所 ,江西 宜春　336000)
摘要:目的 采用超声辅助提取 , 建立高效液相色谱 -光电二极管阵列检测法测定柿蒂中乌索酸和齐墩果酸的含量。方
法 色谱柱为 KromasilC18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),流动相为甲醇∶水∶磷酸(体积比 87∶13∶0.1),流速 0.8 ml·min-1 ,检测波长 210nm, 柱温 28 ℃。结果 乌索酸进样量在 0.359 ～ 5.744 μg时 , 与峰面积呈良好的线性关系(r=
0.999),平均回收率为 98.3 %, RSD为 2.0 %(n=6);齐墩果酸在 0.174 ～ 2.784 μg时 , 与峰面积呈良好的线性关系(r
=0.999),平均回收率为 99.6 %, RSD为 2.5 %(n=6)。结论 方法操作简便 、快速 、准确 ,可用于柿蒂中乌索酸和齐墩
果酸含量的测定。
关键词:反相高效液相色谱法;　柿蒂;　乌索酸;　齐墩果酸;　光电二极管阵列检测器
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)11-2606-02
DeterminationofUrsolicAcidandOleanolicAcidinDiospyroskakibyHPLCwithPhoto-
diodeArrayDetector
ZOUSheng-qin, CHENWu(KeyLaboratoryofJiangxiProvinceforResearchonActiveIngredientsinNaturalMedicines, BioengineeringRe-
searchInstituteofYichunUniversity, Yichun, 336000, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopanHPLCmethodwithphotodiodearraydetector(PAD)forthedeterminationofursolicacid
andoleanolicacidinDiospyroskakibyultrasowithnicwaveaidedmethod.MethodsTheseparationwasachievedonaKromasil
C18 column(4.6mm×250 mm, 5 μm)at28 ℃ usingmethanol-H2O-phosphoricacid(87∶13∶0.1, V/V)asthemobilephaseataflowrateof0.8ml· min-1 , thedetectionwavelengthwas210 nm.ResultsUrsolicacidshowedgoodrelationshipat
therangeof0.359 ～ 5.744 μg(r=0.999).Therecoverywas98.3 % andRSDwas2.0 %.Oleanolicacidshowedgoodrela-
tionshipattherangeof0.174 ～ 2.784 μg(r=0.999).Therecoverywas99.6 % andRSDwas2.5 %.ConclusionThepro-
posedmethodissimple, rapidandaccurate.ItcanbeusedtodeterminethecontentsofursolicacidandoleanolicacidinDiospy-
roskaki.
Keywords:HPLC;　Diospyroskaki;　Ursolicacid;　Oleanolicacid;　Photodiodearraydetector
　　柿蒂 DiospyroskakiThunb., 别名为柿丁 , 为柿科植物柿的干
燥花萼 ,主产于四川 、广东 、广西 、福建等地。其味苦 、性温 ,有降
气止呃功能 ,常用于胃寒气滞的呃逆。临床治疗顽固性或术后呃
逆 ,反流性胃炎等症 [ 1] 。 《中国药典》 2005版仅有柿蒂中没食子
酸的薄层鉴别方法 , 而无含量测定项 [ 2] 。 文献报道了高效液相
·2606·
时珍国医国药 2007年第 18卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.11　
色谱测定柿蒂中没食子酸 [ 3] , 金丝桃苷和齐墩果酸等 [ 4]有效成
分含量的方法 ,但同时测定柿蒂中乌索酸和齐墩果酸含量的文献
至今未见报道 。本文采用超声辅助提取 ,建立高效液相色谱法对
柿蒂中的乌索酸与齐墩果酸的含量进行了测定 ,为柿蒂的质量评
价及其有效成分的检测提供科学依据。
1　材料与试剂
Waters高效液相色谱仪(515泵 , 2996光电二极管矩阵检测
器 , 7725I进样阀 , Empower中文色谱工作站), RO-MB-10D高
纯水机(杭州永洁达膜分离设备厂), CP225D分析天平(德国
Sartorius公司), FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有
限公司), 202-26A型数显电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器
有限公司), KS-1500超声提取仪器(宁波科盛仪器厂)。
甲醇为色谱纯(色谱纯 , 上海陆忠试剂厂), 水为高纯水 ,
95%乙醇(分析纯 ,江西同盟试剂化工厂), 乌索酸和齐墩果酸对
照品(中国药品生物制品检定所 , 批号 110742-200314, 110709-
200304,供含量测定用)。柿蒂购于药材市场 ,经鉴定为柿科植物
柿的干燥花萼 DiospyroskakiThunb.。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 色谱柱为 KromasilC
18
柱(4.6 mm×250 mm, 5
μm);流动相为甲醇∶水∶磷酸(体积比 87∶13∶0.1);流速 0.8
ml· min-1;检测波长 210nm;柱温为 28℃。外标法定量分析 , 乌
索酸和齐墩果酸理论塔板数大于 13 500, 分离度分别为 1.83和
1.99,拖尾因子分别为 1.01和 1.04。对照品和样品色谱见图 1。
a-对照品　b-柿蒂样品　1-齐墩果酸　 2-乌索酸
图 1　对照品和样品的 HPLC谱图
2.2　峰纯度分析 从光电二极管检测器采集的样品三维图谱中
提取紫外光谱和不同波长的色谱进行对比 , 检测波长为 210 nm
时色谱峰信噪比高 , 峰形对称 , 分离度达到色谱方法的定量要
求 [ 5] 。采用 Empower色谱软件适应性模块对此波长的色谱峰进
行纯度分析 ,对照品和样品中乌索酸和齐墩果酸色谱峰的纯度角
值均小于阈值 ,纯度角线均位于自动阈值线下方 , 证实色谱峰为
单一组分吸收峰。乌索酸和齐墩果酸的色谱峰纯度分析见图 2。
图 2　乌索酸和齐墩果酸的色谱峰纯度分析
2.3　溶液配制
2.3.1　对照品溶液 分别精密称定乌索酸 、齐墩果酸对照品
3.59 mg和 1.74mg,置于 10ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻
度 , 摇匀 ,制成对照品混合溶液 ,备用。
2.3.2　样品溶液 取于 80 ℃干燥并粉碎过 20目筛的柿蒂粉末
约 3 g, 分别置于 50ml具塞锥形瓶中 ,用 95 %乙醇 40ml超声提
取 90min, 过滤 , 残渣用乙醇洗涤 ,合并滤液 , 定容至 50 ml量瓶
中 , 摇匀 ,作为样品溶液。
2.4　线性关系试验 分别精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混
合溶液中 1, 4, 8, 12, 16μl进样分析 , 按色谱条件测定峰面积 , 以
对照品进样量(μg)为横坐标 , 峰面积(μV· s)为纵坐标 , 进行线
性拟合 ,得乌索酸线性回归方程为:Y=6.44×105X-5.83×104
(r=0.999), 齐墩果酸线性回归方程为:Y=7.54 ×105X-3.70×
104(r=0.999)。表明当乌索酸进样量在 0.359 ～ 5.744 μg;齐墩
果酸进样量在 0.174 ～ 2.784 μg时 ,线性关系良好。
2.5 　精密度实验 分别精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混
合溶液 10 μl进样 , 平行 5次 ,测定峰面积。乌索酸和齐墩果酸
峰面积 RSD分别为 0.2 %(n=5)和 0.6%(n=5)。表明进样方
法和仪器精密度良好。
2.6 　重现性实验 取同批柿蒂样品 5份 , 每份各约 3 g, 按样品
溶液制备方法制备样品溶液。精密吸取各样品溶液 10 μl, 进样 ,
测定乌索酸和齐墩果酸峰面积 , 外标法计算含量。 乌索酸含量
RSD为 1.8 %(n=5),齐墩果酸含量 RSD为 2.3 %(n=5)。样
品处理方法重现性良好。
2.7　加样回收率实验 精密称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的
柿蒂叶样品 6份 , 每份约 3 g,按高 、中 、低 3种浓度分别加入乌索
酸和齐墩果酸对照品适量 , 制备样品溶液 , 进样测定样品中乌索
酸和齐墩果酸的含量。 乌索酸平均加样回收率为 98.3%, RSD
为 2.0%(n=6);齐墩果酸平均回收率为 99.6 %, RSD为 2.5 %
(n=6)。
2.8　样品含量测定 精密吸取不同的柿蒂样品溶液 10 μl进
样 ,平行 3次 ,测定乌索酸和齐墩果酸峰面积积分值 ,外标法计算
柿蒂样品中乌索酸和齐墩果酸的平均含量。结果见表 1。
表 1　柿蒂不同部位中乌索酸和齐墩果酸含量测定结果 %
样品编号 乌索酸含量 RSD
齐墩果酸
含量 RSD
1 0.241 0.8 0.087 1.3
2 0.326 1.5 0.116 1.0
3 0.312 1.1 0.109 1.2
3　讨论
测定结果表明 , 不同柿蒂样品中两种三萜酸成分的含量较
高 ,为药材的主要活性成分。但乌索酸和齐墩果酸含量存在差
异 ,且乌索酸含量均明显高于齐墩果酸 , 约为齐墩果酸的 2.8 ～
2.9倍 , 2组分含量的相对值基本稳定。
考察了 KromasilC18(4.6 mm×250mm, 5μm)、NucleodurC18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)和 Nova-PakC18(3.9mm×300mm, 4μm)3种色谱柱对同分异构体乌索酸和齐墩果酸的分离效果 , 结
果显示不同型号色谱柱对乌索酸和齐墩果酸的分离度有较大的
影响 , Kromasil柱的分离效果最佳 , 乌索酸和齐墩果酸达基线分
离 ,分离度为 1.9,符合色谱定量分析的要求。
采用反相高效液相色谱法测定柿蒂中的乌索酸和齐墩果酸
的含量 ,样品处理简单 , 无其它杂质的干扰 ,可同时检测待测组分
的峰纯度和紫外吸收特征光谱 ,增强了色谱的定性能力 , 方法简
便 、快速 , 分离效果好 ,数据准确可靠。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.11 时珍国医国药 2007年第 18卷第 11期