全 文 ：复方南板蓝根提取物中秦皮乙素的含量测定
梁洪，李波，沈春丽，胡淑毅，宋艳刚(丽珠集团利民制药厂，广东 韶关 512028)
摘要:目的 建立复方南板蓝根提取物中秦皮乙素的含量测定方法，以有效控制复方南板蓝根提取物的质量。方法 色谱
柱:Phenomex Luna5u C18 250 m×4．6 mm;流动相:甲醇－0．015%磷酸水(20 ∶80)，流速:1．0 mL /min;检测波长为 353 nm;柱温
35 ℃。结果 秦皮乙素含量在 16．18～258．88 μg /mL浓度范围内呈现良好的线性关系，阴性无干扰，精密度、稳定性、重复性良
好，平均回收率 102．6%。结论 建立的 HPLC方法准确、简便、重复性好，可用于控制复方南板蓝根提取物的质量。
关键词:复方南板蓝根提取物;HPLC法;秦皮乙素
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1673-4610(2016)08-0562-02
作者简介:梁洪，工程师，主要从事中药制剂研发工作，Tel:0751-8726056，E-mail:lianghong@ livzon．cn 通讯作者:宋艳刚，高级工程
师，主要从事中药制剂研发工作，Tel:0751-8722690，E-mail:songyangang@ livzon．cn
Content Determination of Aesculetin in Compound South Isatis Ｒoot Extract
LIANG Hong，LI Bo，SHEN Chunli，HU Shuyi，SONG Yangang(Livzon Group Limin Pharmaceutical Factory，Shaoguan，
Guangdong 512028，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To establish a content determination method of Aesculetin in compound south isatis root extract，so as to
effectively control the quality of south isatis root extract． METHODS The chromatographic column Phenomex Luna5u C18 250 m×4．6
mm was used，and the mobile phase was consisted of methanol-0．015% phosphoric acid (20 ∶80);the flow rate was 1．0 mL /min;the
detection wavelength was 353 nm;the column temperature was 35 ℃ ． ＲESULTS The content of aesculetine showed good linear
relationship in the range of 1．618－258．88 g /mL，with no negative interference，and its precision，stability，repeatability is good． The
average recovery rate was 102．6%． CONCLUSION The established HPLC method is accurate，simple and reproducible，it can be
used for the quality control of Ｒadix Isatidis south．
KEY WOＲDS:compound south isatis root extract;HPLC method;Aesculetin
复方南板蓝根提取物由南板蓝根、紫花地丁、蒲
公英提取精制而成，主要用于复方南板蓝根颗粒、复
方南板蓝根片［1］的制剂生产，后两者均收载于《部颁
标准》中药成方制剂第五册，标准均无含量测定项。
近年来，有文献报道了复方南板蓝根冲剂、颗粒剂、
片剂以及紫花地丁药材中秦皮乙素的含量测定研
究［2-3］，但对其生产过程中间体“复方南板蓝根提取
物”的质量控制尚未见报道。为进一步阐明生产过
程中关键质量指标的转移情况，本文选择复方南板
蓝根提取物中主要成分秦皮乙素作为含量控制指
标，建立了复方南板蓝根提取物含量控制方法。
1 仪器与试药
1．1 仪器
Agilent1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公
司)，Openlab色谱工作站;超声波清洗器(上海沪超
超声仪器有限公司，功率 250 W，频率 40 kHz)。
1．2 试药
复方南板蓝根提取物(丽珠集团利民制药厂，批
号:150601、150602、150603)，秦皮乙素对照品(中国
药品生物制品检定所，批号 110741-200506 供含量
测定用);甲醇、乙腈为色谱纯(美国天地公司)、水
为超纯水(美国颇尔公司)，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱:Phenomex Luna5u C18 250 m×4．6 mm;
流动相:甲醇 － 0． 015%磷酸水(20 ∶ 80)，流速:1． 0
mL /min;检测波长为 353 nm;柱温 35 ℃。
2．2 对照品溶液的制备
取秦皮乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成
每 1 mL含 60 μg的溶液作为对照品溶液。
2．3 供试品溶液的制备
取本品约 0．5 g，精密称定，置 50 mL 具塞锥形
瓶中，精密加入 5%甲酸的甲醇溶液 25 mL 密塞，摇
匀，称定重量，超声处理(功率 250 W，频率 40 kHz)
30 min，取出，称重，用 5%甲酸的甲醇溶液补足减失
的重量，摇匀，离心，取上清液，微孔滤膜过滤，即得。
2．4 阴性对照溶液的制备
按复方南板蓝根提取物处方，取除紫花地丁药
材外的相应药材按复方南板蓝根提取物制备工艺，
配制缺紫花地丁阴性制剂，取适量，按“2．3”项下方
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法配制，即得。
2．5 专属性
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液各
10 μL，按“2．1”项下色谱条件分别进样测定，记录色
谱图，结果秦皮乙素峰保留时间约为 17 min，阴性对
照溶液色谱图在与秦皮乙素峰峰位置无色谱峰(见
图 1)，表明阴性对照无干扰、专属性较好。
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图 1 HPLC图谱
A．秦皮乙素对照;B．阴性对照溶液;C．供试品溶液;峰 1．秦皮
乙素
2．6 线性关系考察
精密吸取对照品溶液 2．5、5、10、20、30、40 μL，
依次进样，按“2．1”项下色谱条件分别测定，记录峰
面积。以峰面积(Y)为纵坐标，进样浓度为横坐标
进行线性回归，得回归方程:Y= 35．016X－0．715 2，相
关系数 r = 1，结果表明秦皮乙素含量在 16． 18 ～
258．88 μg /mL范围内有良好线性关系。
2．7 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液 10 μL，连续进样 6
次，按“2．1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计
算。结果秦皮乙素峰面积 ＲSD值为 0．09%。结果表
明:本方法具有良好的精密度。
2．8 稳定性试验
取样品(批号:150601)0．5 g，精密称定，照供试
品制备方法制备。按“2．1”项下色谱条件，分别于
0、3、6、12、18、24 h 进样测定，每次进样 10 μL，记录
峰面积，结果秦皮乙素峰峰面积在 24 h内 ＲSD值为
0．9%，表明样品制备后 24 h内测定，结果均稳定。
2．9 重复性试验
分别取同一批号样品(150601)6 份，按供试品
溶液制备方法制备，按“2．1”项下色谱条件分别测
定，6 份样品含量测定结果 ＲSD 值为 0．3%，表明本
方法重复性良好。
2．10 回收率试验
取同一批号样品(批号:150601)6 份，每份约
0．3 g，精密称定。按加样回收法每份各加秦皮乙素标
准品溶液(浓度为 187．20 μg /mL)6 mL，放置 5 min，
按供试品溶液制备方法制备溶液，取样测定，计算回
收率。结果(见表 1)表明，本方法回收率良好。
表 1 秦皮乙素加样回收率试验结果
试验
编号
样品中量
(mg)
对照加入量
(mg)
实测量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
1 1．74 1．12 2．94 102．6
2 1．67 1．12 2．87 102．9
3 1．76 1．12 2．90 100．7
102．6
4 1．65 1．12 2．91 104．7
5 1．66 1．12 2．82 101．0
6 1．72 1．12 2．95 103．8
2．11 样品测定
取样品适量，研细，取约 0．5 g，精密称定，置 50
mL具塞锥形瓶中，精密加入 5%甲酸的甲醇溶液 25
mL密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率 250 W，频
率 40 kHz)30 min，取出，称重，用 5%甲酸的甲醇溶
液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，微孔滤膜
过滤，进样测定，计算含量，结果见表 2。
表 2 样品测定结果
批号
秦皮乙素含量
(mg /g)
3批平均值
(mg /g)
ＲSD
(%)
130601 0．590
130602 0．605 0．602 2．82
130603 0．580
3 讨论
在供试品溶液制备方法考察时，考察了提取溶
剂:甲醇、5%甲酸甲醇提取效果，发现 5%甲酸甲醇提
取效果明显优于甲醇，同时比较了超声提取 30 min和
加热回流提取 2 h 的效果，结果两者提取效果无明显
差异;色谱柱考查了 Discovery、Dikma色谱柱，二者除
出峰时间存在差异外，分离度、峰对称度均符合要
求。经验证，本文方法准确、检测结果稳定，操作简
便，可有效用于复方南板蓝根提取物的质量控制。
参考文献
［1］中华人民共和国卫生部药典委员会［M］．中华人民共和国卫
生部药品标准中药成方制剂第五册，1992．
［2］陈胡兰，汤沛然．高效液相色谱法测定紫花地丁中秦皮乙素
的含量［J］ ．成都中医药大学学报，2007，30(3):57-61．
［3］林远凤，黄燕萍． 高效液相色谱法测定复文南板蓝根片中秦
皮乙素含量［J］．中国药业，2009，18(13):31．
(收稿日期:2016-05-30)
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