全 文 ：[基金项目 ] 　浙江省中医药管理局资助项目
[作者简介 ] 　徐彩菊(1964-),女 ,学士 , 副主任医师 ,主要从事
毒理学检验与研究。
【论著】
中药三叶青提取物抗肿瘤机制初探
徐彩菊 ,丁钢强 ,孟　佳 ,傅剑云 ,章荣华 ,陈玉满 ,陈　江
(浙江省疾病预防控制中心 , 杭州　310009)
[摘要 ] 　目的:通过对三叶青提取物小鼠免疫调节功能的评价 , 初步确定其抗肿瘤作用的基本机制。方法:从细胞免疫 、
体液免疫 、单核 -巨噬细胞吞噬作用和自然杀伤细胞的攻击作用 4个方面观察三叶青提取物对小鼠免疫功能的影响。
结果:三叶青提取物 5.0、15.0、25.0 g/kg· BW剂量组均能提高 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和小鼠左后足
跖部厚度差 24 h测量值;2.5、5.0 g/kg· BW剂量组均能提高小鼠溶血空斑数;2.5、5.0、15.0和 25.0 g/kg· BW剂量组
均能提高小鼠碳廓清的能力;15.0 g/kg· BW剂量组能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数。结论:三叶青
提取物具有增强小鼠免疫力作用 ,为其抗肿瘤作用机制之一。
[关键词 ] 　三叶青提取物;小鼠免疫功能;抗肿瘤机制
[中图分类号 ] 　R730.52　　　　[文献标识码 ] 　A　　　　[文章编号 ] 　1004-8685(2006)01-0014-03
Studyontheanti-tumormechanismofextractofherbalmedicineTetrastigmaHemsley-
anumDielset.Gilg
XuCai-ju, DingGang-qiang, MengJia, FuJian-yun, ZhangRong-hua, ChenYu-man, ChenJiang
(ZhejiangCenterforDiseaseControlandPrevention, Hangzhou310009, China)
[ Abstract] 　Objective:ToevaluateextractofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilgonimmunefunctionofmice, anddefine
itsanti-tumormechanismpreliminarily.Methods:EfectsofextractofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilgonimmunefunc-
tionofmicewereobservedbyfouraspectsofcellarimmunity, humoralimmunity, momonuclear-macrophagesandNK
cells.Results:The5.0、15.0、25.0 g/kg· BW groupsofextractofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilgcouldobviouslyen-
hancetheabilityofmicespleenlymphocytetransformationinducedbyConA, andincreasemiceleft-hindfeetthickness′sdifer-
encebetween24 hoursandzero.The2.5、5.0 g/kg· BWgroupsofitcouldenhancethenumberofplagueformingcel(PFC).
The2.5、5.0、 15.0and25.0g/kg· BWgroupsofextractofitcouldobviouslyincreaseinkclearanceabilitiesinmice.The15.0
g/kg· BWgroupofitcouldobviouslyenhancephagocytosisindexofmomonuclear-macrophages.Conclusion:ExtractofTet-
rastigmaHemsleyanumDielset.Gilgcouldenhanceimmuncefunctionofmice.Itcouldbeoneofanti-tumormechanism.
[ Keywords] 　ExtractofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilg;Immunefunctionofmice;Anti-tumormechanism
　　三叶青为葡萄科崖爬藤属植物 , 学名为三叶崖爬藤(Tet-
rastigmaHemsleyanumDielset.Gilg)。生于林中阴处 , 沟谷土
壤肥沃湿润处 , 主要分布于浙江 、江西 、福建 、台湾 、湖北 、湖
南 、广东 、广西 、四川 、贵州 、云南等省区 [ 1] 。三叶青以块根或
全草入药 ,具有清热解毒 、祛风化痰 、活血止痛的功效 , 用于治
疗高热惊厥 、肺炎 、哮喘 、肝炎 、风湿 、月经不调 、咽痛 、瘰疬等
症 , 具有很好的疗效 [ 2] 。药理实验表明三叶青提取物有抗病
毒作用和明显的消炎镇痛 [ 3]及保肝作用 [ 4] , 在民间三叶青还
用于肿瘤的治疗。三叶青为中国特有物种 , 又主产于浙江。
为了开发和利用本土资源 , 我们对其抗肿瘤机理的一个方面
(上接第 13页)
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(收稿日期:2005-11-05)
14 中国卫生检验杂志 2006年 1月 第 16卷 第 1期　ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology, Jan2006;Vol16　No1
—机体免疫调节作用进行了研究。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验动物　清洁级 ICR雌性小鼠 , 体重 18 ～ 22g, 由
中科院上海实验动物中心提供 , 实验动物生产许可证号为
SCXK(沪)2002-0010。
1.1.2　受试物　三叶青提取物采用乙酸乙酯提取法。
1.2　方法
参照《免疫毒理学实验技术》[ 5] 。试验项目包括:
1.2.1　剂量设计　实验设 4个剂量组和一个蒸馏水对照组。
剂量分别为 2.5、5.0、15.0、25.0 g/kg· BW。
1.2.2　小鼠脏器 /体重比值测定(包括胸腺 /体重和脾脏 /体
重比值)　雌性 ICR小鼠 50只 , 体重 18 ～ 22g, 随机分 5组。
每日分别以 2.5、5.0、15.0、25.0 g/kg· BW剂量给予受试物 ,
连续灌胃给受试物 30d。另设阴性对照组。
1.2.3　细胞免疫功能测定
1.2.3.1　ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)法。
动物及剂量同 1.2.2。
1.2.3.2　绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠 DTH(足跖增厚法)。
动物及剂量同 1.2.2。
1.2.4　体液免疫功能测定
1.2.4.1　小鼠血清溶血素测定(血凝法)。 动物及剂量同
1.2.2。
1.2.4.2　抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)。动物及剂
量同 1.2.2。
1.2.5　单核巨噬细胞吞噬功能测定
1.2.5.1　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)。
动物及剂量同 1.2.2。
1.2.5.2　小鼠碳廓清试验。动物及剂量同 1.2.2。
1.2.6　NK细胞活性测定(LDH测定法)　动物及剂量同
1.2.2。
1.2.7　统计方法　全部数据采用 SPSS/PC软件包在微机上
进行统计处理。
2　结果
2.1　对小鼠免疫器官的影响
从表 1可见 , 三叶青提取物各剂量组小鼠胸腺 /体重比
值 、脾脏 /体重比值和阴性对照组(蒸馏水)比较 , 均无显著性
差异(方差分析 , P>0.05)。
表 1　三叶青提取物对小鼠脏器 /体重比值的影响
组别 剂量(g/kg)
动物数
(只)
胸腺 /体重
(mg/g)
脾脏 /体重
(mg/g)
阴性对照(H2O) - 10 2.6±0.4 4.5±0.5
受试物 2.5 10 2.6±0.7 4.5±0.9
5.0 10 2.7±0.8 3.8±0.8
15.0 10 2.8±0.5 4.2±0.4
25.0 10 2.4±0.7 3.8±0.7
2.2　对小鼠细胞免疫功能的影响
从表 2可见 ,与阴性对照组(蒸馏水)比较 , 三叶青提取物
5.0、15.0和 25.0 g/kg· BW剂量组均能提高 ConA诱导的小
鼠脾淋巴细胞的增殖能力和小鼠左后足跖部厚度差 24 h测量
值 , 均有显著性差异(q检验 , P<0.05)。
表 2　三叶青提取物对细胞免疫功能的影响
组别 剂量(g/kg)
动物数
(只)
淋转光密度差值
(OD)
左后足跖部 24h
厚度差(cm)
阴性对照(H
2
O) - 10 0.178±0.029 0.026±0.007
受试物 2.5 10 0.171±0.019 0.031±0.008
5.0 10 0.215±0.015＊ 0.035±0.007＊
15.0 10 0.204±0.020＊ 0.038±0.006＊
25.0 10 0.219±0.015＊ 0.038±0.004＊
　　与阴性对照比较 , ＊ P<0.05
2.3　对小鼠体液免疫功能的影响
从表 3可见 ,三叶青提取物各剂量组小鼠血清溶血素抗
体积数值和阴性对照组(蒸馏水)比较 ,无显著性差异(方差分
析 , P >0.05)。 与 阴性对照组 (蒸馏水 )比较 , 2.5 和
5.0 g/kg· BW剂量组均能提高小鼠溶血空斑数 , 均有显著性
差异(q检验 , P<0.05)。
表 3　三叶青提取物对体液免疫功能及 NK细胞活性的影响
组别 剂量(g/kg)
动物数
(只) 抗体积数值
溶血空斑数
(个)
NK细胞活性
(%)
阴性对照(H2O) - 10 148.6±21.3 58±11 34.5±8.9
受试物 2.5 10 153.3±14.9 80±19＊ 36.0±5.7
5.0 10 150.9±13.2 94±19＊ 31.4±9.3
15.0 10 140.7±25.8 72±18 37.5±9.7
25.0 10 151.6±21.9 64±12 33.1±9.7
　　与阴性对照比较 , ＊ P<0.05
2.4　对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
从表 4可见 ,与阴性对照组(蒸馏水)比较 , 三叶青提取物
15.0 g/kg· BW剂量组能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细
胞的吞噬指数 , 有显著性差异(q检验 , P<0.05);各剂量组均
能提高小鼠吞噬碳末的吞噬指数 , 有显著性差异(q检验 , P<
0.05);小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数和阴性对
照组(蒸馏水)比较 , 无显著性差异(方差分析 , P>0.05)。
表 4　三叶青提取物对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
组别 剂量(g/kg)
动物数
(只)
吞噬率
(%) 吞噬指数
碳廓清
吞噬指数
阴性对照(H2O) - 10 34.8±7.6 0.65±0.30 5.00±0.38
受试物 2.5 10 34.2±5.8 0.70±0.15 5.46±0.36＊
5.0 10 34.7±10.9 0.79±0.25 5.63±0.59＊
15.0 10 44.3±8.6 1.04±0.23＊ 5.66±0.66＊
25.0 10 36.1±5.6 0.90±0.27 5.73±0.31＊
　　与阴性对照比较 , ＊ P<0.05
15中国卫生检验杂志 2006年 1月第 16卷 第 1期　ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology, Jan2006;Vol16　No1
2.5　对小鼠 NK细胞活性的影响
从表 3可见 , 三叶青提取物各剂量组小鼠 NK细胞活性和
阴性对照组(蒸馏水)比较 , 无显著性差异(方差分析 , P>
0.05)。
3　讨论
三叶青的化学成分目前尚未十分明了 , 丁钢强等对三叶
青的乙酸乙酯 、正丁醇和水 3种提取法进行了比较 ,结果显示
以乙酸乙酯提取法效果最好 [ 6] 。通过三叶青的块根乙酸乙酯
提取后李瑛琦等分离到 7个化合物 , 经鉴定的有 4个化合物 ,
分别为 β -谷甾醇 、山奈酚 、槲皮素和山奈酚 -3-O-新橙皮
糖苷 [ 7] 。槲皮素(Quercetin)是植物界分布最广 , 具有多种生
物活性的黄酮类化合物 ,广泛存在于蔬菜和水果中 ,同时它也
是多种中草药的成分。槲皮素具有抗肿瘤 、降血压 、降血脂 、
抗炎 、抗过敏 、抗病毒等多种生物学活性 , 所以对人类肿瘤 、衰
老 、感染 、心血管疾病的治疗和预防具有重要意义 [ 8] 。最近的
研究表明 , 槲皮素一方面可以诱导多种肿瘤细胞凋亡 [ 9 ～ 11] ,另
一方面又可以阻止一些非肿瘤细胞凋亡的发生 [ 12, 13] 。 β -谷
甾醇(β -sitosterol)和山奈酚(Kaempferol)均属黄酮类化合物 ,
对它们的生物活性作用研究得不多。 三叶青含有多种生物活
性成分 , 但其抗肿瘤机理尚不明确。
机体的免疫应答过程是由一系列复杂的免疫反应组成
的 。完整的免疫系统包含了细胞免疫 、体液免疫 、单核 -巨
噬细胞吞噬作用和自然杀伤细胞的攻击作用。为了全面观
察三叶青提取物在改善小鼠免疫力方面的功能 , 从而初步确
定其抗肿瘤作用的机制。我们选择了反应细胞免疫功能的
小鼠脾淋巴细胞转化试验和迟发型变态反应试验;反应体液
免疫功能的抗体生成细胞检测和血清溶血素测定;反应单核
-巨噬细胞吞噬功能的小鼠碳廓清试验和小鼠腹腔巨噬细
胞吞噬鸡红细胞试验;反应自然杀伤作用的 NK细胞活性测
定 。
从本试验结果可见 , 不同剂量的三叶青提取物对小鼠主
要免疫器官(胸腺和脾脏)和 NK细胞活性均无明显增强或抑
制作用。三叶青提取物剂量为 5.0、 15.0、25.0g/kg· BW时
其 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的 OD差值和小鼠左后足跖部
厚度差 24 h测量值与对照组比较均有显著性差异 ,说明三叶
青提取物能提高小鼠细胞免疫功能;2.5、 5.0g/kg· BW两剂
量组均能提高小鼠溶血空斑数 , 与对照组比较有显著性差异;
2.5、 5.0、15.0、5.0g/kg· BW四剂量组小鼠吞噬碳末的吞噬
指数 , 15.0g/kg· BW剂量组能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬
鸡红细胞的吞噬指数 ,与对照组比较均有显著性差异 , 说明三
叶青提取物能增强单核 -巨噬细胞吞噬功能。
巨噬细胞除对异物 、死亡细胞进行吞噬和消化外 , 还参与
识别 、吞噬和处理抗原 、传递免疫信息等免疫反应过程。在细
胞免疫反应中 , 巨噬细胞在胸腺依赖性抗原(TD抗原)致敏 T
淋巴细胞的过程中起着重要的作用;在体液免疫反应中 , TD
抗原活化 B细胞也必须有巨噬细胞参与。因此 , 三叶青提取
物增强小鼠免疫功能 , 可能与其首先激活巨噬细胞功能有
关。
80年代初 , 肿瘤生物治疗的创始人之一 Oldham博士提出
生物应答调节剂(biologicalresponsemodifier, BMR)的概念 , 该
理论普遍为美国医学界所接受 [ 14] 。我国传统中医理论强调整
体 ,辨证论治 ,扶正固本 , 标本兼治 , 这些与 BMR理论颇为吻
合。调节机体免疫功能状态 , 使机体的抗肿瘤免疫功能得以
加强是中药抗肿瘤重要机制之一。因此 , 调节机体的免疫功
能也是三叶青提取物抗肿瘤作用的机制之一。 至于三叶青提
取物其他的抗肿瘤作用机理则有待于进一步的研究。
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