全 文 ：收稿日期:2003-05-23
作者简介:李磊(1980-), 女(汉族),河南信阳人 , 在读硕士 , Tel:(024)23843711-3336;李发美(1947-),女(汉族),
江西兴国人 ,教授 , 博士生导师 , 主要从事药物分析和化学研究 , Tel:(024)23843711-3361 , E-mail:fameili@
163.com。
文章编号:1006-2858(2004)01-0038-03
HPLC法测定复方大青叶注射液中
大黄素和大黄素甲醚的含量
李　磊 , 袁　波 , 李发美
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳　110016)
摘要:目的 采用反相高效液相色谱法测定复方大青叶注射液中大黄素和大黄素甲醚的含量。
方法 将样品加酸水解后进行分离分析。采用 Kromasil C8(5μm , 4.6 mm×200 mm)色谱柱 ,流动
相为甲醇-水-冰醋酸(V∶V∶V =80∶20∶0.4), 流速为0.8 mL·min-1 , 检测波长为440 nm。结果 大
黄素平均回收率为 97.9%, RSD 为 1.7%;大黄素甲醚平均回收率为 100.7%, RSD 为 2.1%。
结论 方法方便 、准确 , 为复方大青叶注射液的质量控制提供一定依据。
关键词:反相高效液相色谱法;复方大青叶注射液;大黄素;大黄素甲醚
中图分类号:R 917　　　文献标识码:A
　　复方大青叶注射液由大青叶 、金银花 、大黄等
5味中药组成 ,具有清瘟解毒的功效。用于乙型
脑炎 ,急 、慢性肝炎 ,流行性感冒 ,腮腺炎 。其中大
黄药材含有大黄素 、大黄素甲醚等蒽醌类成分。
在《卫生部药品标准》中 ,采用 TLC法测定复方大
青叶注射液中总蒽醌的含量 ,但未见用 HPLC 法
测定其含量的报道。有文献报道对在其他制剂中
的蒽醌类成分进行 HPLC定量分析[ 1 , 2] 。作者建
立了反相高效液相色谱法同时测定复方大青叶注
射液中大黄素和大黄素甲醚的含量 ,方法简便 、准
确 、重现性好。
1　仪器与试药
日本岛津 LC —10A 液相色谱仪 , LC —10AT
输液泵 , SPD—10紫外可见检测器;pHS —25 型
酸度计(上海分析仪器厂)。甲醇(色谱纯 ,山东禹
王实业总公司化工厂);水为重蒸水 ,其它试剂为
分析纯(沈阳化学试剂厂)。大黄素 、大黄素甲醚
对照品(中国药品生物制品检定所),复方大青叶
注射液(山东鲁南制药股份有限公司)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱 柱:Kromasil C8 (5μm , 4.6 mm ×
200 mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(V∶V∶V =
80∶20∶0.4);流速:0.8 mL·min-1;检测波长:
440 nm 。测得对照品溶液和复方大青叶注射液
的色谱图见图 1。
　
Fig.1　The chromatogram of standard and sample
A—Standard;B—Ssample;1—Rhein;2—Physcione
2.2　标准曲线的制备
称取大黄素对照品11.2 mg , 置10 mL量瓶
中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为大黄素
对照品贮备液;称取大黄素甲醚对照品6.6 mg ,
置50 mL量瓶中 ,用氯仿5 mL溶解 ,用甲醇稀释至
刻度 ,摇匀 ,作为大黄素甲醚对照品贮备液。精密
吸取大黄素对照品贮备液 0.1 、0.3 、0.5 、0.7 、
0.9 mL ,分别置于10 mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻
度 ,摇匀。分别吸取上述溶液各20μL ,按上述色
谱条件进样分析 。以峰面积为纵坐标 ,浓度为横
坐标 , 绘制标准曲线 , 求得回归方程为:Y =
第 21 卷 第 1 期
2 0 0 4 年 1 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.21 　No.1
Jan.2004 p.38
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2004.01.012
1.02×107X -1.14×104 , r=0.999 9 ,大黄素在
0.041 4 ～ 0.373 0 mmol·L-1内线性关系良好。
精密吸取大黄素甲醚对照品贮备液 0.5 、1.5 、
2.5 、3.5 、4.5 mL ,分别置于10 mL量瓶中 ,用甲醇
稀释至刻度 ,摇匀。分别吸取上述溶液各20 μL ,
按上述色谱条件进样分析 ,求得回归方程为:Y =
5.98×106X +1.32×104 , r=0.999 9 ,大黄素甲
醚在0.023 2 ～ 0.209 0 mmol·L-1内线性关系良
好。
2.3　精密度试验
吸取对照品溶液 ,按上述液相色谱条件重复
进样 5 次 , 大黄素峰面积相对标准偏差为
0.89%, 大黄素甲醚峰面积相对标准偏差为
0.61%。分别取同一批号供试品 5份 ,按“2.6”条
制备样品溶液 ,依法测定 ,大黄素含量相对标准偏
差为 1.2%, 大黄素甲醚含量相对标准偏差为
1.3%。
2.4　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,在 0 、2 、4 、6 、8 、24 h分别
进样 ,大黄素峰面积 RE值为 1.0%,大黄素甲醚
峰面积 RE值为 2.1%。
2.5　回收率试验
精密量取已测知含量的样品 (批号为
20020325)8.0 mL ,分别加入大黄素和大黄素甲
醚对照品溶液适量 ,按“2.6”条测定大黄素和大黄
素甲醚的含量 ,计算回收率 ,结果见表 1。
Table 1　The recoveries of rhein and physcione in the Injectio Folii Isatidis Composita
Sample content/μg Added/μg Found/μg Recovery/ % Average/ % RSD/ %
194 89.6 88.0 98.2
194 89.6 89.2 99.6
Rhein 194 179 176 98.3 97.9 1.7
194 179 177 98.9
194 269 262 97.4
194 269 255 94.8
106 52.8 51.5 97.5
106 52.8 53.2 100.8
Physcione 106 106 108 101.9 100.7 2.1
106 106 109 102.8
106 158 156 98.7
106 158 162 102.5
2.6　样品测定
精密量取样品溶液8 mL ,置圆底烧瓶中 ,加
盐酸1 mL ,摇匀 ,置水浴上加热回流1 h ,立即冷
却 ,溶液转移至分液漏斗中 ,用少量水洗涤烧瓶 ,
洗液并入同一分液漏斗中 ,用氯仿萃取 6次 ,每次
10 mL ,合并氯仿液 ,蒸干 ,残渣用甲醇溶解并转
移至 5 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 过
0.45 μm滤膜 , 续滤液即为供试液 。取供试液
20μL注入色谱仪 ,在上述色谱条件下测定 ,测定
结果见表 2。
Table 2　The contents of rhein and physcione in the Injec-
tio Folii Isatidis Composita
Ba tch Rhein/(mmol·L-1) Physcione/(mmol·L-1)
20020325 0.089 6 0.046 4
20020326 0.074 4 0.036 9
20020327 0.117 7 0.060 5
3　讨论
对于蒽醌类化合物的测定 ,大多数文献报道
采用254 nm的检测波长 ,但从这类化合物的紫外
吸收光谱来看 ,在254 nm 、280 nm以及440 nm处
均有较强的吸收 。实验过程中发现 ,在紫外区检
测有大量干扰物质存在 ,故作者选择440 nm为检
测波长 。蒽醌类化合物有的以游离形式存在 ,有
的则结合成苷 ,两者在极性及溶解度方面差别悬
殊。苷在氯仿中不溶 ,而苷元及其它游离蒽醌衍
生物易溶于氯仿 ,又因为蒽醌类化合物分子中多
含酚羟基 ,故具有一定酸性 ,因此 ,为了测定该注
射剂中总蒽醌的含量 ,在样品处理过程中 ,加入盐
酸 ,并加热回流 ,使苷类水解 ,全部游离后 ,再用氯
仿进行提取。作者采用反相高效液相色谱法 ,测
定复方大青叶注射液中大黄素和大黄素甲醚的含
量 ,方法快速准确 ,对该制剂的质量控制具有一定
39第 1 期 李　磊等:HPLC 法测定复方大青叶注射液中大黄素和大黄素甲醚的含量　　　
的参考价值。
参考文献:
[ 1] 姚仲青.HPLC 法同时测定黄连上清丸中大黄素 、大
黄酚 、大黄素甲醚的含量[ J] .中草药 , 2001 , 32(8):
699-700.
[ 2] 李涉盈 ,郭增军 , 王利.HPLC 测定三黄片中大黄素 、
大黄酚及黄芩苷的含量[ J] .中成药 , 2001 , 23(6):
445-448.
Determination of the contents of rhein and physcione in
the Injectio Folii Isatidis Composita by HPLC
LI Lei , YUAN Bo , LI Fa-mei
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China)
Abstract:Objective To describe a reversed-phase HPLC method for the determination of the contents of
rhein and phy scione in the Injectio Folii Isatidis Composi ta.Methods The samples were hydrolyzed in acid
medium by ref lux and separated on a Kromasil C8 column (5 μm , 4.6 mm ×200 mm)w ith the mobile
phase of methanol-water-acetic acid(V∶V∶V =80∶20∶0.4).The flow rate was 0.8 mL·min-1 , and the
detection w as set at 440 nm.Results The average recovery of rhein was 97.9%w ith RSD of 1.7%;the av-
erage recovery of phy scione w as 100.7%w ith RSD of 2.1%.Conclusion The method is simple , accurate
and can be used fo r the quality control of the Injectio Folii Isatidis Composita.
Key words:RP-HPLC;Injectio Folii Isatidis Composita;rhein;phy scione
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