全 文 ：收稿日期:2010-01-03;　修订日期:2010-04-22
基金项目:广西壮族自治区科技攻关项目(No.[ 2009] 92)
作者简介:廖长秀(1977-),女(汉族),湖北仙桃人 ,现任右江民族医学院
副教授 ,博士学位 ,主要从事肝损伤发生机制及预防研究工作.
＊通讯作者简介:黄岑汉(1959-), 男(汉族),广西岑溪人 , 现任右江民族
医学院教授 ,学士学位 , 主要从事中医诊断的客观化 、规范化及民族医药
的发掘研究工作.
罗汉果皂苷对乙醇所致肝损伤的拮抗作用
廖长秀 , 李曙波 , 薛　强 , 黄岑汉＊
(右江民族医学院 ,广西 百色　533000)
摘要:目的 探讨罗汉果皂苷对实验小鼠急性酒精肝损伤的防治作用。方法 建立乙醇所致小鼠急性肝损伤模型 , 观察罗
汉果皂苷对肝损伤小鼠肝功能指标 、抗氧化指标 、血糖和组织学的影响。结果 罗汉果皂苷 0.5 g· kg-1· d-1连续灌胃给
药 7 d能降低乙醇所致血清谷丙转氨酶的升高。结果进一步表明 , 罗汉果皂苷可提高肝脏过氧化氢酶和超氧化物歧化酶
活性 , 且可明显减轻肝组织病理改变。结论 罗汉果皂苷对乙醇肝损伤有防治作用 ,其机制与增强肝脏抗氧化功能有关。
关键词:罗汉皂苷;　乙醇;　肝损伤;　抗氧化
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.12.035
中图分类号:R962　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)12-3116-01
　　自杜康酿酒以来 , 酒便与人们的生活结下了不解之缘。随着
越来越多人的饮酒 , 乙醇所引起的急 、慢性肝损伤已成为当前世
界范围内的一大公害。 在部分上市的复方天然解酒药中(如北
京奇效堂科技有限公司生产的奇效堂醒酒露), 罗汉果为其中配
方之一。关于罗汉果对急性酒精性肝损伤是否有确切的作用及
机制尚未见报道。本研究建立乙醇所致小鼠急性肝损伤模型上 ,
观察了罗汉果有效成分罗汉皂苷对乙醇所致急性肝损害的影响 ,
并探讨其机制。
1　材料
1.1　药品与试剂 罗汉果皂苷为桂林莱茵生物科技股份有限公
司产品 , 罗汉果皂苷含量为 80%, 临用前蒸馏水溶解。谷丙转氨
酶(Alanineaminotransferas, ALT)试剂盒为四川迈克科技有限公
司生产 , 罗康全活力型血糖试纸为罗氏诊断(上海)有限公司生
产。过氧化氢酶(catalase, CAT)试剂盒由南京建成生物工程研
究所提供。其余试剂均为国产分析纯和化学纯。
1.2　动物 ♂昆明种小鼠 30只 , 体质量 18 ～ 22 g, 由右江民族
医学院实验动物中心提供。
2　方法
2.1　动物分组及处理 将小鼠分为 3组:正常对照组 、模型对照
组和罗汉果皂苷组 , 每组均为 10只。罗汉果皂苷组 0.5 g· kg-1
· d-1连续灌胃给药 7d,正常对照组和模型对照组灌胃给等容量
的蒸馏水。在给罗汉果皂苷第 8天 , 参照文献制备肝损伤模
型 [ 1] 。实验动物 24 h内禁水不禁食 , 模型对照组和罗汉果皂苷
组灌胃给 40%乙醇 5.7 g· kg-1 , 以翻正反射消失为醉酒指标 ,
检测两组的醉酒时间及醉酒发生率 , 19h后再次灌胃给予相同剂
量的乙醇 , 对照组给等容量的蒸馏水 , 24h后 ,断尾取血测血糖浓
度 , 摘眼球取血 ,制备血清。摘取肝脏 , 称重 , 部分组织用 10%福
尔马林固定 , 测定肝脏病理改变;余下组织用生理盐水制成 10%
组织匀浆 , 测定超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)和
CAT。
2.2　观察指标及测定方法
2.2.1　血清学指标 按试剂盒说明 , 用赖氏法测定 ALT含量。
血糖测定按试剂盒要求取鼠尾血用罗氏血糖仪测定。
2.2.2　组织抗氧化指标 以牛血清蛋白为标准品 , 用考马斯亮蓝
法测定肝匀浆蛋白浓度。参照文献 [ 2]方法 ,以邻苯三酚自氧化
法测肝匀浆 SOD含量。肝匀浆 CAT按试剂盒说明操作。
2.2.3　组织学检查 常规制备组织切片 , HE染色 ,光镜观察。
2.3　统计学处理 实验数据用 x±s表示 , 在 SPSS11.0统计软件
上进行多组间 ANOVA方差分析。
3　结果
3.1　对乙醇致醉酒率和醉酒时间的影响 40%乙醇 24 h内两次
按 5.7g· kg-1灌胃给药后 ,模型对照组小鼠醉酒发生率为 40%,
平均醉酒潜伏时间为 28 min。罗汉果皂苷组的醉酒发生率为
33%, 低于模型对照组 ,但并不缩短平均醉酒潜伏时间。结果见
表 1。
表 1　罗汉果皂苷对乙醇所致肝损伤肝功能及
血糖浓度的影响( x±s)
分组 醉酒率(%) 醉酒潜伏时间 t/min
模型对照 40 28±27
罗汉果皂苷 33 20±22
3.2　对乙醇致肝损伤小鼠肝功能指标的影响 40%乙醇以 5.7 g
· kg-1 24h内灌胃给药 2次后 , 小鼠血清 ALT含量较正常对照
组明显增加(P<0.05), 肝指数增加 39% (P<0.01), 血糖浓度
也明显增加(P<0.01)。罗汉果皂苷可改善乙醇引起的 ALT增
高的症状 ,但对肝指数及血糖无明显影响。结果见表 2。
表 2　罗汉果皂苷对乙醇所致肝损伤肝功能及
血糖浓度的影响( x±s)
分组 肝指数C/g· kg-1
ALT
/U· L-1
血糖浓度
C/mmol· L-1
正常对照 26.8±6.1 10.9±10.1 2.7±0.3
模型对照 37.3±2.9＊＊ 22.4±9.8＊ 4.6±0.3＊＊
罗汉果皂苷 37.3±4.7＊＊ 11.6±6.8 4.8±0.6＊＊
　　与正常对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
3.3　对乙醇肝损伤小鼠抗氧化指标的影响 本研究进一步观察
了罗汉果皂苷对肝脏抗氧化功能的影响。结果表明 ,乙醇灌胃给
药后肝匀浆中抗氧化酶 SOD和 CAT活性均明显降低 , 分别降至
正常对照组的 70.8%和 69.7% (P< 0.05)。罗汉果皂苷可使
乙醇降低的肝组织中抗氧化酶 SOD和 CAT活性 , 接近正常对照
组水平 (P>0.05)。结果见表 3。
表 3　罗汉果皂苷对乙醇所致肝损伤抗氧化功能的影响
分组 SOD/u· mg-1 pro CAT/K· g-1pro
正常对照 4.8±1.1 109±34
模型对照 3.4±1.0＊ 76±22＊
罗汉果皂苷 4.3±1.3 102±42
　　与正常对照组比较 , ＊P<0.05
3.4　对乙醇所致小鼠肝组织形态学变化的影响 组织病理学检
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.12
查发现 , 正常小鼠肝组织肝索存在 ,肝脏结构完整 ,肝细胞胞浆未
见脂肪变性及气球样变(图 1A)。 24 h内两次乙醇处理后小鼠
肝细胞气球样变和脂肪变性明显(图 1B), 未见肝索 ,肝脏正常结
构破坏 , 炎性细胞增生(图 1C箭头所指)。罗汉果皂苷组可见肝
索 , 肝脏结构基本完整 ,肝细胞脂肪变性及气球样变性程度均明
显轻于乙醇模型组(图 1D),炎性细胞增生减轻 (图 1E)。
A-正常对照组　B, C-乙醇模型组　D, E-罗汉果皂苷组
图 1　罗汉果皂苷对乙醇所致肝损伤肝脏病理改变的影响(400×)
4　讨论
乙醇通过滤过和简单扩散方式很容易从胃肠道各部位吸收
入血 , 分布到身体的各个器官系统 , 主要在肝脏代谢。 乙醇经
CYP2E1代谢时 , 伴随产生大量的氧自由基( -
2
O · 、H
2
O
2
等),消
耗众多的还原性保护物质如 GSH,引起脂质过氧化反应 , 导致肝
损伤 [ 3] 。本研究中 , 40%乙醇 24 h内两次按 5.7 g· kg-1灌胃给
药后 , 肝脏肿胀 ,肝指数增加 , ALT升高 , 肝组织抗氧化酶 SOD和
CAT活性下降 ,表明乙醇所致急性肝损伤模型是成功的。本研究
中 , 乙醇可使血糖浓度明显增加 , 可能与乙醇致胰腺氧应激反应
增多 , 胰腺分泌胰岛素功能下降 , 使血胰岛素降低有关 [ 4] 。
我们同时还观察 40%乙醇 5.7g· kg-1灌胃给药 1次后小鼠
的醉酒发生率 , 发现不同小鼠对乙醇的反应差异较大 , 仅 40%小
鼠出现醉酒 ,且醉酒潜伏时间差别较大 , 个别小鼠 4 min可出现
醉酒 , 而个别小鼠 60 min才出现醉酒。因此 , 以醉酒潜伏期作为
观察指标判断药物的解酒作用可能要先进行动物的筛选 ,应选取
一些对酒精敏感的动物作为实验对象。
罗汉果是我国特有的葫芦科罗汉果属植物 Siraitiagrosvenori
(Swingle)C.Jeffrey的成熟果实 , 主产于广西永福 、临桂和龙胜。
罗汉果的广西民间药用历史已有三百多年 , 以果实入药 , 其性凉
味甘 , 具有清解暑热 、润肺止咳之功效 , 在治疗百日咳 、慢性气管
炎 、咽喉炎 、胃肠疾病方面疗效显著 [ 5] 。罗汉果主要有效成分为
罗汉果皂苷 ,其在干果中的总含量为 3.735% ～ 3.858%[ 5] 。 广
西中医学院王勤等发现罗汉果的主要成分罗汉果皂苷可对四氯
化碳 、硫代乙酰胺所致小鼠肝损伤有明显的保肝降酶作用 [ 6] 。
我们的研究也发现 ,罗汉果皂苷 0.5 g· kg-1· d-1连续灌胃给药
7 d对乙醇所致的急性肝损伤也有保护作用 ,可减轻乙醇所致的
肝脏脂肪变性 , 降低血清 ALT, 其机制可能与提高肝脏抗氧化酶
SOD和 CAT有关。但对肝指数和血糖影响不大 , 可能与罗汉果
皂苷给药时间还不够长 、动物个体差异大等原因有关。本研究结
果表明罗汉果皂苷对乙醇所致急性肝损伤的保护作用可能是其
作为复方解酒药配方的依据之一。
参考文献:
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用 [ J] .卫生研究 , 1998, 27(6):415.
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[ 3 ] 　LieberCS.Alcoholicliverdisease:newinsightsinpathogenesisleadto
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[ 4 ] 　郭永炼 , 吴统健 , 孙林渥 , 等.急性乙醇中毒患者血糖含量测定结
果分析 [ J] .职业与健康 , 2009, 25(17):1859.
[ 5 ] 　肖　钢 , 王　勤.罗汉果研究进展[ J] .上海中医药杂志 , 2006, 40
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[ 6 ] 　王　勤 , 肖　刚.罗汉果甜苷对大鼠慢性肝损伤的保护作用的实
验研究 [ J] .广西中医药 , 2007, 30(5):54.
收稿日期:2010-01-29;　修订日期:2010-07-12
基金项目:科技部癌基因及相关基因国家重点实验室开放课题
(No.90-08-01)
作者简介:陈军宁(1963-),男(汉族),广西桂林人 ,现任桂林医学院附属
医院副教授 ,学士学位 ,主要从事肾脏疾病基础研究与临床工作.
杏丁对过氧化氢诱导
肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及其机制
陈军宁1 ,温海滨 1 ,谭　宁2 ,黄岚珍 2 ,范才文 2
(1.桂林医学院附属医院 ,广西 桂林　541004;　2.桂林医学院科学实验中心 ,广西 桂林　541004)
摘要:目的 观察杏丁对过氧化氢 (H2O2)诱导肾小管上皮细胞(NRK52E)凋亡的抑制作用及其作用机制。方法 将人
肾小管上皮细胞分成:对照组 , H
2
O
2
(400μmol/L), 杏丁 +H
2
O
2
组 ,杏丁组 , 各组细胞培养至 80% ～ 90%汇合时加入相应
药物干预 , 采用 H2O2诱导肾小管上皮细胞凋亡模型 , 用细胞生长曲线检测细胞生长情况 , 用流式细胞仪检测细胞凋亡
率 , 并采用 RT-PCR检测 SurvivinmRNA表达。 结果 杏丁可以抑制 H
2
O
2
诱导的细胞凋亡 , 并降低细胞凋亡率 , 增加
SurvivinmRNA表达。结论 杏丁显著抑制 H2O2诱导的细胞凋亡 , 其抗细胞凋亡作用可能与其增加 Survivin表达活化有
关。
关键词:杏丁;　肾小管上皮细胞;　凋亡
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.12.036
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)12-3117-03
　　杏丁是银杏叶提取物(EGb)的复方制剂 , 其主要成分为银杏
总黄酮 。既往实验表明杏丁对心 、脑和肠等组织器官缺血再灌注
损伤有明显的保护作用 [ 1]。而肾缺血再灌注与肾小管上皮细胞
凋亡的关系以及细胞凋亡可能在肾缺血再灌注损伤的病理过程
中起重要作用亦被实验发现 [ 2] , 但具体机制未完全清楚。本实
验以体外培养的大鼠肾小管上皮细胞为基础 , 以 H2O2造成氧自
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.12 时珍国医国药 2010年第 21卷第 12期