全 文 ： 2010, Vol. 31, No. 04 食品科学 ※分析检测236
反相高效液相色谱法测定肉果秤锤树叶中的熊果酸
刘素君，周泽斌，唐 梅
(乐山师范学院化学与生命科学学院，四川 乐山 614004)
摘 要：目的：建立肉果秤锤树树叶中熊果酸含量的高效液相色谱测定方法。方法：采用 Shim-pack VP-ODS C18
柱(150mm× 4.6mm，5μm)，甲醇 -水 -磷酸(850:147:3，V/V)为流动相，检测波长 210nm，流速 1.0mL/min。结
果：熊果酸的进样量在 0.124～2.48μg/μL范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系(R2＝ 0.9971)，平均回收率为
10 0 . 5%，R SD 为 0 . 91 %。超声提取的熊果酸含量最高。结论：该方法稳定性、重现性好，且简单易行。
关键词：反相高效液相色谱法；秤锤树；熊果酸
HPLC Determination of Ursolic Acid in Leaves of Sinojackia sarcocarpa L.Q.Luo
LIU Su-jun，ZHOU Ze-bin，TANG Mei
(Department of Chemistry and Life Sciences, Leshan Normal University, Leshan 614004, China)
Abstract ：A HPLC method was developed for the determination of ursolic acid in leaves of Sinojackia sarcocarpa L.Q.Luo.
The chromatographic separation was achieved on a Shim-pack VP-ODS C18 column using a mobile phase composed of H2O and
H3PO4 (850:147:3, V/V) at a flow rate of 1 mL/min, and the detection wavelength was set at 210 nm. A good linearity of the standard
curve for peak area versus ursolic acid concentration was obtained over the range of 0.124－2.48μ g/μL (R2 = 0.9971). The
average spike recovery of ursolic acid at three levels was 100.5% (n = 3), with 0.91% RSD. In sample preparation, ultrasonic
extraction resulted in higher efficiency when compared to reflux extraction and percolation extraction. This method reveals the
characteristics of good stability and repeatability, simplicity, and easy operation.
Key words：HPLC；Sinojackia sarcocarpa；ursolic acid
中图分类号：R284.1；O657.72 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)04-0236-03
收稿日期：2009-04-15
基金项目：乐山师范学院青年教师基金项目(Z07033)
作者简介：刘素君(1968—)，女，副教授，博士，主要从事天然产物研究。E-mail：zouliurui@126.com
熊果酸在自然界分布很广，存在于杜鹃花科植物熊
果的叶、果实，玄参科植物毛泡桐的叶，茜草科植物
栀子的果实，龙胆科植物湿生蕾，木樨科植物女贞的
叶，紫薇科植物毛子草的地上部分[1]。熊果酸在药用植
物中分布同样广泛，现已从 30多种药用植物中提取到熊
果酸，如女贞子、山楂、夏枯草、栀子、白花蛇舌
草、山香圆叶、石楠叶、猫须草、锁阳、拘骨叶、
山楂等[ 2 ]。熊果酸具有广泛的药理作用，如保肝、抗
肝炎[ 3 ]、抗肿瘤[ 4 ]等作用。
肉果秤锤树，安息香科(Styrac ac ea e)秤锤树属，
为罗利群[5]近年发现的新种，分布于四川省乐山市峨眉
山。安息香科植物在临床上对各种关节炎、血栓闭塞
性脉管炎和心绞痛等疾病的治疗具有重要作用。目前
对秤锤树的研究仅停留在核型研究、离体培养和植株
再生[ 6- 7]等初级阶段，而对其药用价值、活性成分的研
究，特别是其枝叶的药用价值和活性成分[ 8 ]的研究较
少。研究肉果秤锤树的化学成分时首先分离出含有活性
化合物熊果酸，本实验用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法
测定肉果秤锤树叶中的熊果酸。为肉果秤锤树的开发利
用，特别是熊果酸的提取及分离提供有效的实验手段。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
肉果秤锤树叶收集于乐山经罗利群教授鉴定；熊果
酸对照品(批号：110742-200516) 中国药品生物制品检
验所；甲醇(色谱纯)；乙醇(分析纯)；三蒸水；其余
试剂均为分析纯。
1.2 仪器与设备
LC-2010AHT高效液相色谱仪配紫外检测器 日本岛
津公司；FZ102型植物粉碎机 天津市泰斯特仪器有限
公司；KQ318T型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限
公司；ZFQ85A型旋转蒸发仪 上海医械专机有限公
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司；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有
限公司；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱 上海一恒
科技有限公司；AL204型电子天平 梅特勒 -托利多仪
器(上海)有限公司。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件
色谱柱：Shim-pack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm，
5μm)；流动相：甲醇 -水 -磷酸(850:147:3，V/V)；流
速：1mL/min；检测波长：210nm；进样量：10μL；
柱温：3 0℃。
1.3.2 对照品溶液的制备
精密称取 6 . 20 mg 熊果酸对照品，用甲醇定容于
10mL容量瓶中，摇匀，制得质量浓度为 0.620mg/mL的
熊果酸贮备液。精密吸取熊果酸贮备液 2.0mL置于 10mL
容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制得质量浓度
为 0.124mg/mL熊果酸对照品溶液。
1.3.3 样品处理
将肉果秤锤树叶阴干、粉碎，过 20 0 目筛，精密
称取该粉末 10.00g，置于 250mL容量瓶中，用体积分
数 95%的乙醇 60mL浸泡 12h，于 40℃超声提取 0.5h，
共提取 3 次，合并提取液，减压回收乙醇得浸膏。浸
膏中加适量水，用石油醚萃取。除去醚层，将水层用
100mL乙醚萃取，共萃取 3 次。合并乙醚萃取液，减
压回收乙醚得浸膏，用甲醇溶解浸膏并定容至 50mL。
取适量离心，上清液即为供试品液。
2 结果与分析
2.1 溶剂及吸收波长的选择
分别以乙醚、氯仿、乙醇、甲醇作为提取溶剂，
前两者提取率略低于乙醇；熊果酸在甲醇中也有很好的
溶解度。权衡提取溶剂、产品价格、操作难易程度及
溶剂性质，本实验选择乙醇作为提取溶剂。
熊果酸甲醇溶液的紫外吸收光谱扫描结果表明，其
最大吸收波长为 203nm。但甲醇在此波长处有很强的背
景吸收。为减少干扰，故选择 210nm作为熊果酸的检
测波长。
2.2 流动相的选择
选择甲醇和水的体积比为 95:5时，熊果酸峰的保留
时间为 8.07min，未能与其他杂质峰分开；调整其比例
为甲醇 -水 -磷酸(850:147:3，V/V)，熊果酸的保留时间
为 14.87min，能与杂质峰分开，峰形较好。
2.3 提取方法的考察
用超声提取法、回流提取法、渗漉提取法进行提
取，比较熊果酸的提取量，结果表明超声提取法所得
熊果酸提取量最高。
2.4 线性关系的考察
分别精密量取对照品混合储备液依次取 1.0、5.0、
10.0、15.0、20.0mL定容至 10mL至色谱柱测定峰面积。
以熊果酸含量(X，μg)作横坐标、峰面积积分值( Y )作
纵坐标绘制标准曲线，得到熊果酸的线性回归方程为
Y＝ 347061X+7626(R2＝ 0.9971)。结果表明，熊果酸
的进样量在 0.124～2.48μg/μL范围内与峰面积呈良好的
线性关系。
2.5 精密度实验
精密吸取 10μL对照品溶液，重复进样 6次，测得
峰面积的 RSD为 0.24%，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性实验
精密吸取 1 0μL 供试品溶液，分别于 0、2、4、
6、8h测定熊果酸的 RSD为 0.4%，表明供试品溶液在
配制后 8 h 内稳定。
2.7 重现性实验　
取同一批样品，精密称取 6 份供试品，R S D 为
0 .58%，表明方法重现性良好。
2.8 回收率实验　
精密称取 9 份药材粉末 0.25g，依次加入 0.124、
0.620、2.48μg/μL的熊果酸对照品溶液，测定其含量。
结果平均回收率为 100.5%，RSD为 0.91%。
2.9 样品测定　
样品处理 超声提取 回流提取 渗漉提取
含量 /(mg/mg) 0.35 0.25 0.28
表1 不同的提取方法所得的熊果酸的含量
Table 1 Contents of ursolic in leaves of Sinojackia sarcocarpa L.
Q.Luo extracted by different methods
图1 对照品和样品的HPLC图
Fig.1 HPLC chromatograms of ursolic acid standard and sample
from leaves of Sinojackia sarcocarpa L.Q.Luo
0.03
0.02
0.01
0
A
U
时间 /min
A.对照品
0 5 10 15 20
0.03
0.02
0.01
0
A
U
时间 /min
B.样品
0 5 10 15 20
1
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称取各药材样品粉末按 1.3.3节方法用表 1的方法制
成样品溶液。各取 10μL 样品溶液和对照品溶液进样，
记录峰面积，按外标法计算，其液相色谱图见图 1，其
中 A 为对照品，B 中 1 为熊果酸，其保留时间为
14.87min，同时考察了 3 种提取方法，结果显示，肉
果秤锤树叶超声提取的熊果酸含量最高为 0.3485mg/mg
(以干质量计)。
3 结 论
通过对肉果秤锤树叶中熊果酸的提取溶剂和提取方
法的选择，以及优化高效液相色谱条件，成功摸索出
测定肉果秤锤树叶中熊果酸含量的方法，该方法杂质干
扰少，且稳定和重现性好，为肉果秤锤树叶中熊果酸
的提取分离提供一定的实验方法。
参考文献：
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