全 文 ：蒙药小白蒿的质量标准研究
王青虎1， 特格喜巴雅尔2， 斯日棍其其格1， 王金辉3
(1.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000;2. 内蒙古通辽市库伦蒙药厂，内蒙古 通辽 028000;
3.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016)
收稿日期:2009-05-18
作者简介:王青虎(1969 －)，男，副教授，研究方向:蒙药化学成分及其质量标准。Tel:15894890037
关键词:小白蒿;7-羟基香豆素;5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮;TLC;HPLC
摘要:目的:建立蒙药小白蒿的质量标准。方法:采用 TLC法对不同产地的小白蒿进行鉴别研究;用 HPLC法测定其中 7-
羟基香豆素和 5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮的含量。结果:TLC鉴别条件下斑点清晰，重现性好。7-羟基香豆素在
1. 0 ～ 40. 0 μg之间线性关系良好，r = 0. 999 3(n = 7)，平均加样回收率为 97. 86%，RSD 为 0. 73%;5，3′-二羟基-6，7，4′-
三甲氧基黄酮在 0. 3 ～ 17 μg之间线性关系良好，r = 0. 999 9(n = 6)，平均加样回收率为 98. 79%，RSD为 0. 91%。结论:
本法操作简便、快速、准确，可用来控制样品的质量。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)04-0616-04
小白蒿，别名冷蒿，蒙名阿各，系菊科蒿属植物
冷蒿 Artemisia frigida Willd. 的地上部分。味苦，具
有止血、消肿、制伏痈疽等功能。主治各种出血，关
节肿胀，肾热，月经不调，疮痈，也是蒙医上常用的
“人造圣水组成之一”［1］。主要分布于我国的内蒙
古、青海、甘肃、山西和东北地区。蒿属全世界 380
余种，中国约 200 种。《蒙医甘露四部》［2］中收载有
“坎巴分为坎巴阿蓉(铺散亚菊)、坎巴嘎日布(小白
蒿)、坎巴木各部(紫茎蒿)3 种。”据考证中国内蒙
古所用的原植物主要是小白蒿。本人在小白蒿化学
成分研究的前期工作中，从全草中分离出多种倍半
萜内酯类、黄酮类和香豆素类等化合物，其中 7-羟
基香豆素和 5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮在全
草中相对含量较高。现代药理研究表明，7-羟基香
豆素具有祛风除湿，活血化瘀，抗炎和镇痛作用;5，
3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮具有扩张血管，抗
氧化，抗炎和调血脂作用。其药理作用与蒙医经典
验方和现代临床用药比较吻合。7-羟基香豆素和
5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮是小白蒿的两种
有效成分。但经查阅近几十年来的国内外相关药学
文献，我们发现目前国内外对小白蒿的化学成分，有
效物质基础研究还没有一个明确的标准。小白蒿是
重要的蒙药药用植物，19 世纪由蒙医师占布拉道尔
吉编著的《蒙药正典》中有小白蒿的蒙药用记载。
但现在蒙医药临床制剂中不常用，很有必要进一步
研究其化学成分，生物活性和质量标准，挖掘和开发
此药。本实验采用 TLC 法对不同产地的小白蒿进
行鉴别，同时用 HPLC 法测定其中 7-羟基香豆素和
5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮的含量，并对不
同产地小白蒿中两种成分的含量进行比较，以其为
综合评价小白蒿药材的质量提供参考依据。
1 仪器和试剂
日本岛津液相色谱仪:LC10-Atvp 输液泵，SPD-
M10Avp检测器，SCL-10Avp 工作站，DGU-12A 脱气
机;KQ-100 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司);AW120 型电子天平(日本岛津)。
7-羟基香豆素和 5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基
黄酮(自制)。实验中所用的小白蒿采集于我国 10
个不同地区，经内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药教
研室布和巴特尔教授鉴定均为菊科蒿属植物小白蒿
Artemisia frigida Willd. 的地上部分。来源见表 1。
表 1 不同来源的小白蒿
序号 来源 收集时间
1 新疆 2008-07
2 内蒙古锡盟 2008-08
3 内蒙古阿盟 2007-07
4 内蒙古呼盟 2008-07
5 内蒙古赤峰 2008-06
6 内蒙古通辽市 2007-07
7 青海 2008-06
8 内蒙古呼和浩特市 2008-12
9 内蒙古巴盟 2008-08
10 内蒙古兴安盟 2008-08
616
2010 年 4 月
第 32 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2010
Vol. 32 No. 4
乙腈和甲醇为色谱纯(天津市光复精细化工研
究所);水为超纯水;氯仿、无水甲醇、无水乙醇和磷
酸等均为分析纯;大孔树脂 D101(天津市北联精细化
学品开发有限公司);硅胶 G(上海海洋化工厂)。
2 方法与结果［3-7］
2. 1 TLC鉴别
2. 1. 1 供试液制备 分别称取不同产地的小白蒿
5. 0 g，精密称定，加氯仿 50 mL，超声处理 30 min，滤
过。滤液放入已装好 60 g 大孔树脂(D101)的色谱
柱，先用 20%乙醇溶液 100 mL洗脱，然后用无水乙
醇 200 mL洗脱。把无水乙醇部分减压回收至干，加
氯仿-甲醇(1 ∶ 1)混合液 5 mL既得。
2. 1. 2 展开分析 分别吸取不同产地的供试液和
5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮对照品溶液 5
μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶板
上，选用 3 种不同展开系统，展开，取出，晾干，用
10%的硫酸乙醇溶液显色，加热使斑点清晰。结果
见图 1。
1. 展开剂 ∶ 氯
仿-丙酮-甲酸(7
∶ 1 ∶ 0. 1)
2. 展开剂 ∶ 氯
仿-乙酸乙酯-甲
酸(5 ∶ 1 ∶ 0. 2)
3.展开剂 ∶ 环己
烷-丙酮-甲酸(2
∶ 1 ∶ 0. 1)
图 1 不同产地小白蒿 TLC色谱图
(注:每色谱图上从左到右顺序为样品 1 － 10;7，4′-三甲氧基黄酮对
照品)
2. 2 含量测定
2. 2. 1 提取溶剂的选择和预处理 称取样品 6(内
蒙古通辽市)3 份，每份为 5. 0 g，精密称定，以氯仿、
氯仿-甲醇(1 ∶ 1)、甲醇为溶剂，分别加 50 mL，超声
处理 30 min，滤过。分别吸取滤液 25 mL，放入已装
好 60 g大孔树脂(D101)的色谱柱，先用 20%乙醇溶
液 100 mL洗脱，然后用无水乙醇 200 mL 洗脱。把
无水乙醇部分减压回收至干，加色谱甲醇溶解并定
容至 25 mL量瓶中。根据实验结果，氯仿为提取溶
剂。预处理方法为先用 20%的乙醇 100 mL 洗脱，
再用无水乙醇 200 mL洗脱。
2. 2. 2 供试液的制备
2. 2. 2. 1 样品供试液的制备 分别称取不同产地
样品 5. 0 g，精密称定，加氯仿 50 mL，超声处理 30
min，滤过。分别吸取滤液 25 mL，放入已装好 60 g
大孔树脂(D101)的色谱柱，先用 20%乙醇溶液 100
mL洗脱，然后用无水乙醇 200 mL 洗脱。把无水乙
醇部分减压回收至干，加色谱甲醇溶解并定容至 25
mL量瓶中，既得。
2. 2. 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取 7-羟基香
豆素适量，加色谱乙腈溶解并配成浓度为 2 mg /mL
的对照品贮备液。另精密称取 5，3′-二羟基-6，7，4′-
三甲氧基黄酮适量，加色谱甲醇溶解并配成浓度为
1 mg /mL的对照品贮备液。
2. 2. 3 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:大连
依利特 hypersil ODS2 柱(200 mm ×4. 6 mm，5 μm);
检测波长:274 nm，流动相:乙腈-0. 2%磷酸溶液，梯
度洗脱;流速:1. 0 mL /min，记录色谱图时间 45 min;
进样量:20 μL。理论塔板数按 7-羟基香豆素和 5，
3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮计应不低于4 000，
与相邻峰的分离度大于 1. 5。梯度洗脱程序见表 2。
分离色谱图见图 2 ～ 4。
表 2 梯度洗脱程序
时间 /min 0. 2%磷酸 /% 乙腈 /%
0. 01 70 30
10 60 40
15 45 55
25 25 75
35 15 85
45 15 85
A
B
图 2 对照品色谱图
1. 7-羟基香豆素 2. 5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮
图 3 样品色谱图
1. 7-羟基香豆素 2. 5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮
716
2010 年 4 月
第 32 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2010
Vol. 32 No. 4
图 4 不同产地小白蒿的色谱图
2. 2. 4 线性关系 分别精密吸取 7-羟基香豆素和
5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮对照品贮备液适
量，分别用色谱甲醇和乙腈配成不同浓度的系列对
照品溶液，按上述色谱条件和方法分析测定，以对照
品的浓度为横坐标，对照品峰面积为纵坐标绘制标
准曲线，其回归方程分别为 Y = 1. 89 × 106X + 6 898
(R = 0. 999 3)和 Y = 2. 527 × 105X － 3 111(R =
0. 999 9)。结果表明，在上述色谱条件下 7-羟基香
豆素进样量在 1. 0 ～ 40 μg 和 5，3′-二羟基-6，7，4′-
三甲氧基黄酮在0. 3 ～ 17 μg 范围内与峰面积比呈
良好的线性关系。
2. 2. 5 稳定性试验 精密吸取供试液 6(内蒙古通
辽市)20 μL，注入色谱仪，在 24 h 内每隔一定时间
测定 1 次，进行稳定性考察。在 24 h 内测定 5 次，
数据稳定。7-羟基香豆素和 5，3′-二羟基-6，7，4′-三
甲氧基黄酮 RSD分别为 1. 2%和 0. 9%。
2. 2. 6 精密度试验 精密吸取 7-羟基香豆素和 5，
3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮对照液 20 μL，注入
色谱仪，重复测定 6 次，RSD 分别为 0. 51% 和
0. 58%，说明仪器的精密度良好。
2. 2. 7 重复性试验 取供试品 6(内蒙古通辽市)6
份，按含量测定方法进行测定，7-羟基香豆素和 5，
3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮 RSD 分别为 1. 1%
和 0. 7%。
2. 2. 8 回收率试验 取已知含量的供试品(内蒙
古通辽市)12 份，每份为 2. 5g，精密称定，前 6 份精
密加入相应含量的 7-羟基香豆素对照品，后 6 份精
密加入相应含量的 5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄
酮对照品，按样品供试液制备法制得供试液，并按含
量测定法进行测定，计算回收率，结果见表 3。
2. 2. 9 样品含量测定 吸取不同产地供试液 20
μL，注入色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算含
量。结果见表 4。
3 讨论
3. 1 经查阅近几十年来的国内外相关药学文献，我
表 3 加样回收率试验结果
对照品
样品中含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
7-羟基
香豆素
8. 596 8. 0 16. 43 97. 92
8. 540 8. 0 16. 45 98. 88
8. 477 8. 0 16. 22 96. 79
8. 514 8. 0 16. 38 98. 32
8. 525 8. 0 16. 32 97. 44
8. 567 8. 0 16. 39 97. 79
97. 86 0. 73
5，3′-二羟
基-6，7，4′-
三甲氧
基黄酮
4. 325 4. 0 8. 286 99. 02
4. 243 4. 0 8. 225 99. 55
4. 146 4. 0 8. 088 98. 55
4. 246 4. 0 8. 222 99. 40
4. 384 4. 0 8. 268 97. 10
4. 224 4. 0 8. 188 99. 10
98. 79 0. 91
表 4 不同产地小白蒿中 7-羟基香豆素和 5，3′-二羟基-6，7，
4′-三甲氧基黄酮含量测定结果
药材产地
7-羟基香
豆素 /%
RSD
/%
5，3′-二羟基-6，7，
4′-三甲氧基黄酮 /%
RSD
/%
新疆 0. 090 0. 98 0. 154 0. 34
内蒙古锡盟 0. 083 1. 04 0. 455 0. 42
内蒙古阿盟 0. 093 1. 23 0. 221 0. 54
内蒙古呼盟 0. 202 1. 42 0. 276 0. 43
内蒙古赤峰 0. 116 0. 86 0. 161 0. 44
内蒙古通辽市 0. 339 1. 32 0. 173 0. 38
青海 0. 263 0. 67 0. 211 0. 32
内蒙古呼市 0. 077 1. 96 0. 227 0. 46
内蒙古巴盟 1. 079 1. 28 0. 217 0. 52
内蒙古兴安盟 0. 638 1. 23 0. 088 0. 48
们发现目前国内外对小白蒿的采集时期、采集的环
境，以及采集后的加工工艺，还没有一个明确的标
准。实验所用的小白蒿药材，在不同产地和 7、8 月
份采集后，室温阴干，磨成粉末备实验用。对于小白
蒿药材的炮制工艺有待下一步进行实验研究。
3. 2 实验所用对照品 7-羟基香豆素和 5，3′-二羟
基-6，7，4′-三甲氧基黄酮，经药材 95%乙醇提取，采
用硅胶、Sephadex LH-20 等柱色谱法进行分离，NMR
等波谱学方法结构鉴定，并用 HPLC测定其纯度，纯
度均为 99. 5%以上。
3. 3 根据小白蒿化学成分研究的前期实验结果，7-
羟基香豆素和 5，3′-二羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮均
在氯仿层中分离得到。故提取溶剂选择试验中，分
别以氯仿、氯仿-甲醇(1 ∶ 1)、甲醇为溶剂进行实验。
实验结果表明，氯仿的提取率与其他两种溶剂的相
当，并且预处理后的色谱峰清晰，分离度较好。预处
理中先用 20%的乙醇 100 mL 洗脱，两种成分均没
有洗脱下来。然后用无水乙醇 200 mL洗脱，不仅两
种成分均完全洗脱下来，而且与其他杂质分离。
3. 4 流动相的选择:7-羟基香豆素不易溶于色谱甲
816
2010 年 4 月
第 32 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2010
Vol. 32 No. 4
醇，故选用了乙腈和磷酸的混合液为流动相。先用
几种比例的等梯度洗脱，色谱峰分离不好，所以选用
了梯度洗脱。在实验所用的梯度洗脱条件下，两种
成分与相邻色谱峰的分离度均大于 1. 5。
参考文献:
［1］ 白清云.中国医学百科全书［M］. 赤峰:内蒙古科学技术出版
社，1986:322.
［2］ 伊希巴拉珠尔.蒙医甘露四部［M］. 呼和浩特:内蒙古人民出
版社，2007:404.
［3］ 杨利青，李增春，肖德华，等. 蒙药冷蒿挥发油化学成分分析
［J］.内蒙古民族大学学报(自然科学版)，2006，21(3):275-
278.
［4］ 唐 丽，姚晴晴，张 婉，等.超临界二氧化碳流体萃取冷蒿挥
发油的实验研究［J］.辽宁中医杂志，2007，34(7):965-966.
［5］ 唐 丽，谢 坤，张 婉，等.蒙药冷蒿中挥发油的 GC-MS分析
［J］.中医药学报，2007，35(5):36-37.
［6］ 刘小兰，周剑波，陶燕铎，等.气相色谱-质谱联用技术对青海产
小白蒿的挥发油［J］.分析试验室，2008，27(3):26.
［7］ Taberlet P，Coissac E，Pompanon F，et al. Power and limitations
of the chloroplast trnL (UAA) intron for plant DNA barcoding
［J］. Nucleic Acids Res，2007，35(3)，414.
藏药烈香杜鹃质量标准研究
周燕雪， 宋 霞， 逯雯洁
(青海省药品检验所，青海 西宁 810000)
收稿日期:2009-08-04
作者简介:周燕雪(1964 －)，女，副主任药师，研究方向:藏药、中药质量标准。Tel:(0971)8247730 E-mail:xuexueyanhua@ 163. com
关键词:烈香杜鹃;TCL;烈香杜鹃药材;HPLC;金丝桃苷;槲皮素
摘要:目的:提高烈香杜鹃药材的质量标准。方法:建立 TLC法鉴别烈香杜鹃药材;采用 HPLC同时测定烈香杜鹃药材中
金丝桃苷、槲皮素的含量。结果:TLC鉴别烈香杜鹃药材色谱清晰;金丝桃苷进样量在 0. 114 μg ～ 1. 25 μg(r = 0. 999 4)、
槲皮素进样量在0. 040 76 μg ～ 0. 448 4 μg(r = 0. 999 9)的范围内有良好的线性关系，平均回收率(n = 6)分别为 98. 57%
(RSD为 1. 02%)，97. 53%(RSD为 1. 38%)。结论:本研究建立的 TLC和 HPLC方法简单、准确、灵敏、重现性好，能有效
控制烈香杜鹃药材质量。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)04-0619-03
烈香杜鹃(Rhododendron anthopogonoides Max-
im. et Franch)杜鹃花科植物，它的花和叶，系常用藏
药材，大量应用于藏成药制剂中，藏医常用于培根
病、肺病、脾胃虚寒、消化不良、水土不服症等治
疗［1］。该药材收载于《卫生部药品标准》藏药第一
册中，原标准除有显微、理化鉴别外，未制定任何含
量测定方法，为了更好的控制药材质量，本实验对其
标准进行了研究，对烈香杜鹃进行了薄层鉴别，并采
用高效液相色谱法同时测定烈香杜鹃中金丝桃苷、
槲皮素的含量，方法简便，专属性强，回收率好，结果
准确可靠。为烈香杜鹃药材质量控制提供依据。
1 仪器与试药
安捷伦 1100 型 G1314A高效液相色谱仪，SPD-
10AVP紫外检测器，化学工作站(美国 Agilent 公
司)。
烈香杜鹃对照药材(121394-200401)，金丝桃苷
对照品 (0717-200003)、槲皮素对照品 (0717-
200003)供含量测定用，均购自中国药品生物制品
检定所;甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水
为超纯水。
烈香杜鹃由青海省药品检验所提供，样品批号
分别为:080703，080712，080823。
2 方法与结果
2. 1 烈香杜鹃薄层鉴别
分别取烈香杜鹃粗粉约 2 g，加甲醇 25 mL，超
声处理 40 min，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇 2
mL使溶解，作为供试品溶液。另取烈香杜鹃对照药
材 1 g，同法制成对照药材溶液。再取金丝桃苷、槲
皮素对照品，加甲醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作
为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸
取样品溶液 5 ～ 10 μL，对照品溶液 5 μL，对照药材
溶液 10 μL，分别点于同一用 1%氢氧化钠制备的硅
916
2010 年 4 月
第 32 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2010
Vol. 32 No. 4