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苦荞生物类黄酮及其测定方法研究进展



全 文 : 2005, Vol. 26, No. 9 食品科学 ※专题论述542
苦荞生物类黄酮及其测定方法研究进展
罗光宏,陈天仁,祖廷勋,杨生辉,张汉燚
(甘肃河西学院生物中心 ,甘肃 张掖 734000)
摘 要:概述了苦荞麦生物黄酮化学组成、分布、药用功效以及测定方法,目的为苦荞及制品的深度开发和日
常检验监测提供一些参考。
关键词:苦荞麦;生物类黄酮; 测定方法
Research of Fag pyrum Tatarium Biof vonoids and Its Quantitave Methods
LUO Guang-hong,CHEN Tian-ren,ZU Ting-xun,YANG Shen-hui,ZHANG Han-yi
(Gansu Hexi College Biology Center, Zhangye 734000, China)
Abstract :The article anlysis the element. distract. Medical effect and quantitave methods of buekwheat(Fagopyrum,s tatarium)
biofavonoids, in order to supply some reference to fagopyrum tatarium,s deep davelop and detect.
Key words:Fagopyrum tatarium;biofavonoids;quantitave methods
中图分类号: S517 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2005)09-0542-04
苦荞即苦荞麦,学名鞑靼荞麦( T a r t a r y
buckwheat)。属双子叶蓼科(Polygonaceae)荞麦属
(Fagopyrum esculentum)植物,主要分布于我国内蒙古、
陕西、甘肃、宁夏、四川、云南等高寒地区[1,2]。《本
草纲目》记载:苦荞麦性味苦、平、寒,有益气力,
续精神,利耳目,降气宽肠健胃的作用。现代临床医
学观察表现:苦荞制品具有降血糖、降血脂,防治糖
尿病、冠心病、抗癌;防止内出血等药用疗效,这
些功效都与苦荞中生物类黄酮功效有关。本文综述了苦
荞生物黄酮功效及测定方法,目的在于为苦荞保健食品
深度开发和质量检测提供一些参考。
1 苦荞生物黄酮化学组成与分布
1.1生物黄酮化学组成
目前,对荞麦黄酮研究报道中甜荞比苦荞多。H.
sato[3]等从荞麦未成熟种子中分离鉴定出了芦丁、金丝
桃苷、栎皮素和槲皮素等黄酮。 Mitsuru Wantwnabt
(1997年)[4]以收割于Tohoku Mational Agriculaural Experi-
ment Station的甜荞壳为原科,采用Sephadec(羟基葡聚
糖)LH-20对甜荞壳乙醇提取物柱层析获7个馏分。对它
们进行抗氧化研究时,定性定量测定了其活性化合物结
构,主 要 有 五 种 抗 氧 化 活 性 物 质 , 即槲皮素
(quercetin)、海棠苷(hyperin)、芦丁(rutin)、原儿茶酸
(protocateehuic)和3,4一二羟基苯甲酸(3,4-
dihydroxybenzaldehyde)。此外尚有牡荆苷(vitexin)和异
杜荆苷(isovitexin)。Mitsura Wantanabe(1998年)[5]以甜
荞为原料,用乙醇提取,采用Sephsclen(葡聚糖凝胶)
LH-20柱色谱和预备HPLC柱色谱分离种子提取液得到四
种儿茶精物质和芦丁。采用1H和13C NMR鉴定这四种儿
茶精物质分别是(一)麦儿茶精类、(十)一儿茶精-7-O-β-
D-吡喃型葡萄糖苷、(一)一表儿茶精-3-0-对羟基苯甲酸
和(一)一表儿茶精-3-0-(3、4)二一O一甲基没食子酸。
Dorocta Dietrych-szostak (1999年)[6]在甜荞籽粒中发
现6种类黄酮化合物:即芦丁、荭草苷(orientin)、牡
荆苷、槲皮素、异牡荆苷(isovitexin)、异荭草苷
(isoorientin)。
Samiya G C et al(1989年)[7]从荞麦籽粒中分离出两种
新二氢黄酮醇糖苷:Aromadendrin 3-O-半乳糖苷和
毒叶素 3-木糖苷(taxifolin3-o-xyloside)。 Jian-Ya Oian et
al(1999年)[8]发现了白藜芦醇、原儿茶酸/儿茶素。
苦荞生物黄酮化学组成研究报道较少。李丹博士
(2001年)[9]报道山西、四川两地苦荞籽粒中黄酮化合物主
要有槲皮素-3-葡萄糖芸香糖苷、槲皮素-3-0-芸荞苷(芦
丁)、山奈酚-3-芸香糖苷、槲皮素。后来在定量槲皮
收稿日期:2005-06-12
基金项目:教育部科学技术研究重点项目(地方高校,205160);甘肃省教育厅2004年项目(048B-08)
作者简介:罗光宏(1965-),男,副教授,主要从事植物保护教学和保健食品的研究与开发。
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素-3-葡萄糖芸香糖苷时,又发现了槲皮素-3-芸香糖双
葡萄苷。徐宝才博士等(2003年)[10]采用反相高效液相色
谱法,在分析苦荞黄酮含量时又发现了一种新黄酮苷
元:即山奈酚,因此四川苦荞黄酮主要有以上6种化合
物组成,其中以芦丁含量最高。包塔娜、彭树林(2003
年)[11]也从四川苦荞籽粒面粉中分离出芦丁、槲皮素、
山奈酚-3-0-芸香糖苷和山奈酚四种黄酮化合物。朱瑞,
高南南等(2003年) [12]从苦荞种子的80%乙醇提取物中析
出芦丁,通过聚酰胺柱、硅胶柱梯度洗脱,同样分得
槲皮素、山奈酚-3-0-芸香糖苷和山奈酚黄酮化合物,与
前者研究结果相一致。郭玉蓉博士等(2004年)[13]在甘肃
荞麦提取液中也分离出黄酮醇、5一羟基黄酮或2-羟基
黄酮等不同黄酮类化合物。荞麦品种、产地不同,所
含的黄酮种类不同[14]。
1.2苦荞生物类黄酮分布
苦荞麦中含有其它谷物中所不含有的黄酮类化合
物,其黄酮化合物含量比甜荞高10~100倍[15,16]。不同
荞麦品种及品种不同部位,黄酮含量差异较大,朱友
春等(2003年)[17]测得九江苦荞黄酮含量高于会宁苦荞和凉
荞一号,不同生育期黄酮含量顺序为幼苗>植株>籽
粒。唐宁等(2001年)[17]通过对2种荞麦的叶、茎、和
花中黄酮含量测定后,发现各部位含量均不相同,整
个生育期以花中黄酮含量最高,其平均值为7.4%,叶
中含量其次,平均值为5.3%,茎中含量最低,平均值
为1.0%,苦荞种子外层粉类黄酮含量为5.23~7.43%,
中层粉为3.10~4.13%,心粉0.47~0.98%。徐宝才博士
等(2003年)[10]采用反相高效液相色谱法测定了四川苦荞黄
酮含量,其种皮含量最高达4.614%,其次是外层粉,
壳,心粉中含量最低。芦丁是其主要成分,占总黄酮
质量分数90%以上,与文献报道相一致。郭玉蓉博士
等(2004 年)[13]测得苦荞面粉中黄酮含量高达 2.5%,籽壳
中含量较少为1.7%。
2 苦荞黄酮功效
类黄酮是一类具有广泛生物活性的植物次生代谢
物,人体不能自身合成黄酮类化合物,主要从植中摄
取。现代医学研究表明,类黄酮具有多种药用功效。
2.1降血糖、降血脂作用
Hvsain S R(1987年)[18],Wojciki J (1996年)[19]报道荞麦
种子提取物能使实验动物血脂降低,减小自由基产生。
刘叔梅,韩淑英等[20]研究结果显示,荞麦种子总
黄酮能改善饲诱性高脂血症及链尿佐菌素导致的糖尿病
大鼠血清脂蛋的失调,不同程试度地抑制Tc、TG apo-
B和LDL-C的升高,明显升高HDL-C、apo-A降低
动脉硬化指数,可降低血糖,改善糖耐量。而对胰岛
素影响不明显,可能是具有增加组织中胰岛素受体数量
或通过信号传导通路而增加组织对胰岛素的敏感性而发
挥降血糖作用。李洁,梁月琴等 (2004年)[21]报道,苦
荞类黄酮(180mg/kg)和苦荞类黄酮+维生素C对高血脂小
鼠均有降血脂作用 ;苦荞类黄酮125mg/kg对高糖高脂
大鼠有降血脂和降血糖作用。
2.2对心血管作用
苦荞中芦丁、槲皮素黄酮化合物具有维持血管张
力,降低毛细血管脆性和通透的作用,对预防脑溢血
有很好的作用。
2.3抗氧化及清除自由基作用
自由基(free radical)是引起癌症、衰老、心血管
等退变性疾病的罪恶之源。生物体内常见的自由基有:
超氧阴离子自由基、羟基自由基、烷氧基自由基。苦
荞黄酮有清除这三种自由基效果,其有效浓度为10-3 ~
10-4mg/ml,并且表现为协同效应,其中以清除羟基自由
基效果最显著[22]。李丹博士等[23](2001 年)进一步研究了
苦荞黄酮对猪油和亚油酸的抗氧化效果,认为在两种脂
类体系中的抗氧化效果不同,在猪油体系中含槲皮素较
多的苦荞黄酮抗氧化作用强;在亚油酸体系中,苦荞黄
酮各组分协同抗氧化效果较好。 Rafat Husaind等[24](1987
年)研究也指出,类黄酮化合物具有清除自由基能力,
以杨酶黄酮、槲皮素清除能力最强。
2.4抗癌、防癌作用
生物类黄酮通过抗自由基作用,直接抵制癌细胞生
长和抗致癌因子三种途径达到抗癌防癌作用。如槲皮素
在亳摩尔浓度下就可抑制癌细胞生长发育阶段所需酶系
统,从而有效阻滞癌细胞增殖[25]。
2.5抑菌、抗病毒作用
据国外学者研究生物黄酮槲皮素,山奈酚等均有抗
菌和抗病毒作用,特别是对白喉菌、金黄色葡萄球菌
和溶血性链球菌有较强的抑制作用[24]。
2.6改善记忆力,预防老年痴呆症
临床观察及动物实验证明,荞麦中多酚物质对脑血
管障碍、改善记忆力、预防老年痴呆症有很好的效果[26]。
此外苦荞黄酮还具有止咳、去痰、镇痛、解痉、
护肝和抗紫外线作用 。
3 黄酮含量测定方法
3.1分光光度法
3.1.1紫外分光光度法:利用苦荞黄酮母核上有3-OH/
5-OH,B环上有邻笨二羟基,可与A13+在碱性溶液中
显色的原理测定其含量。常见有NaN02-A1(N03)3法和
AlCl3分光度法。陈运中[27](1998年)采用NaN02-A1(N03)3
法以甲醇一索氏抽取苦荞麦粉总黄酮,在波长500nm处
比色,测定了荞麦黄酮含量。其吸光度回归方程式为
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y=0.1026A-0.00195,相关系数r为0.9999。其方法操作
简单,结果稳定可靠。朱友春、田世龙等[28](2003年)
在上述方法的基础上进行了一些改进,选择将亚硝酸钠
和硝酸铝溶液混合后加入。减小了操作步骤,加快了
操作时间;同时还证明在加入 显色试剂后再用30%的
乙醇溶液定容,不影响显色效果,且结果稳定,线性
关系良好,灵敏度也有所提高,回收率较好。张琪、
刘慧灵等[29](2003年)采用AlC13比色法在波长420nm处测
定了苦荞麦总黄酮的含量。通过稳定实验,表明该显
色反应在90min内基本稳定;通过重现性实验,表明重
现性符合实验;通过回收率实验,测得回收率为99.3%
RSD为2.62%,符合实验要求。该法操作简单、准确。
徐宝才、丁霄霖(2003年)[30],比较了两种测定方法,并
分析了其影响因素。实验结果表明,NaN02-A1(N03)3法
测定结果高于AlC13法,偏差高达46.36%~136.63%,而
AlC13法偏差只有3.91%~4.91%(与HPLC法比较),所以
AlCl3比色法比常用的NaN02-A1(N03)3更适合苦荞黄酮测
定,方法简单,结果准确可靠。分析其影响因素时他
认为:四川苦荞含有的原儿茶酸、原花色素物质具有邻
苯二羟基结构,显色反应后在波长510nm都有很强的吸
收度,对黄酮含量的测定造成了一定干扰,因此用
NaN02-A1(N03)3法测定结果偏高。AlC13比色法测定时,
芦丁、桑色素等黄酮类物质反应强烈,而对酚酸、原
花色素反应较小,因此该法对黄酮类结合物的专属性较
强,较适宜于苦荞黄酮的测定。
3.1.2薄层层析一比色法
郭玉蓉,韩舜愈等[13](2004年)利用硅胶G薄层板V
(CH3Cl): V(CH3OH)=3:1作展开,展开后喷1%AlCl3显色,
在波长410nm处有最大吸收峰测定了苦荞麦黄酮含量。
在几种显色反应中AlCl3反应灵敏,颜色变化比较显
著,该法对黄酮化合物专属性较强,与徐宝才,丁霄
霖等报道相一致。
3.2色谱法
3.2.1薄层扫描法(TLCS)多于测定苦荞中芦丁含量。
具有取样量少、操作简便、分离效果好、结果准确的
特点。景仁忠、陈波(1997年)[30]采用此法测定了苦荞叶
中芦丁的含量。以固定相:聚酰胺薄膜(8cm×8cm):
移动相:乙酸:水=18:1:1在一张聚酰胺薄膜上同时对标样
和待测样品进行薄层分析,层析完毕后用0.1moL/L AlCl3
甲醇溶液染色。确定λr为510nm,λs为410nm,根
据两点工作法公式(C=F1A+F2),求得样品的芦丁含量。
其标准差为0.093,变异数为3.29%,结果更为准确。
3.2.2高效液相色谱法(HPLC):多用于苦荞及其制品
中芦丁含量的测定。具有分析精度高、测定结果准确
的特点,样品多采用不同浓度的甲醇、乙醇直接提取,
也有经柱层层析分离等方法。
徐宝才,丁霄霖(2003年)[31]采用Hypersil ODS(4.
6mm×100mm;5μm)色谱柱,可变波长检测器( VWD),
波长354nm,流动相A:体积分数为65%的甲溶液(含质
量分数为0.5%乙酸);流动相B:超纯水(含质量分数为
0.5%乙酸),流量:0.8ml /min;进样量:5μl,10min
完成样品分析,。以芦丁为标样,峰面积外标法定量。
样品不水解,直接进行分析,测得四川苦荞黄酮主要
有槲皮素-3-芸香糖葡萄糖苷、芦丁、山奈酚-3-芸香
糖苷和槲皮素四种主要成分组成,且黄酮含量麸皮>外
层粉>壳>心粉。芦丁是其主要成分,在苦荞籽粒各部
分中占总黄酮的质量分数达90%以上,他还采用RP-
HPLC-DAD/MS分析法,在四川苦荞籽粒中发现了山奈
酚黄酮类化合物[10]。张琪、刘慧灵等(2003年)[29]采用迪
马Diamonsil C18 250×4.6m色谱柱,甲醇-0.4%磷酸水
溶液(55:45)为流动相,检测波长为257nm,理论塔板数
按芦丁峰计算应不低于1800,测定苦荞麦种子中芦丁的
含量。线性范围2.52~ 5.2μg,回收率为99.79%。RSD
为0.53%。并从实验结果中发现,总黄酮的含量与芦丁
含量表现有一定相关性。芦丁占总黄酮量的50%以上,
因此他建议芦丁的含量作为评价苦荞质量标准,其含量
不得少于0.8%。若采用比色法测定总黄酮以芦丁计不少
于1.0%)。
在评价苦荞制品质量时,准确定量黄酮化合物时一
般采用高效液相色谱法(HPLC),但HPLC价格昂贵,样
品前处理时间较长,不适宜中小企业快速分析和卫生监
督部门日常监督检测。ALC13法简便可行,结果准可
靠,应为苦荞保健食品中测定总黄酮含量较为理想的方
法之一。
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信 息
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意大利称一种艾滋病疫苗已通过一期试验
据此间媒体报道,意大利国家卫生研究所5日宣布,意大利研制的一种艾滋病疫苗已经通过一期临床试
验,不久将在意大利和非洲国家进行二期试验。 意大利国家卫生研究所的声明说,在一期临床试验中,这
种艾滋病疫苗被证明使用安全,并能够激发疫苗试验人群的免疫系统功能。 声明说,与世界其它地区正在
研究的疫苗相比,这种疫苗能直接作用于一种对艾滋病病毒复制起关键作用的蛋白质--TAT,从而抑制病毒
复制;而其它艾滋病疫苗的运作原理只是试图防止艾滋病病毒进入人体细胞。 目前,该研究所正在寻求
5000万欧元(约合5941万美元)的资金援助,以保证更大规模的二期临床试验顺利进行。研究小组负责人芭
芭拉·恩索利说,研究小组希望在2010年前完成所有试验。