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费菜对鲤鱼肝脏抗氧化酶活性及MDA含量的影响



全 文 :收稿日期:2012-05-21 接受日期:2012-07-30 基金项目:菏泽学院科学研究基金(XY08SW01)
作者简介:张贵生(1972 ~) ,男,硕士,副教授,研究方向:鱼类生态毒理研究,E-mail:zgz2007hzxy@ 126. com
* 通讯作者 Corresponding author,教授,研究方向:植物的抑菌作用及应用,E-mail:w7815@ 126. com
DOI:10. 3969 / j. issn. 1000 - 7083. 2012. 06. 013
费菜对鲤鱼肝脏抗氧化酶活性及 MDA含量的影响
张贵生,王桂萍*
( 菏泽学院生命科学系,山东菏泽 274015)
摘要:研究了费菜原汁液和馏出液对鲤鱼肝脏抗氧化性的影响。实验共分 3 组,自来水对照组、费菜馏出液处
理组和原汁液处理组,连续处理 3 d和 7 d。结果表明:处理 3 d和 7 d时,馏出液组和原汁液组 SOD酶活性均显著
高于对照,MDA含量均极显著低于对照。处理 3 d时,馏出液组 POD活性与对照组相比相差不显著,但原汁液组极
显著高于对照。处理 7 d时,馏出液组和原汁液组 POD酶活性均显著高于对照。研究还表明,随处理时间的延长,
SOD、POD酶活性、MDA含量均明显升高,但 MDA含量仍极显著低于对照。表明费菜能明显增强鲤鱼肝脏的抗氧
化性。
关键词:费菜;鲤鱼;超氧化物歧化酶;过氧化物酶;丙二醛
中图分类号:Q176 文献标识码:A 文章编号:1000 - 7083(2012)06 - 0909 - 03
Effect of Sedum aizoon L. on the Antioxidase Activity and MDA Content of the Liver
in Cyprinus carpio Linnaeus
ZHANG Gui-sheng,WANG Gui-ping*
( The Department of Life Sciences,Heze University,Heze,Shandong Province 274015,China)
Abstract:In this paper,effect of original juice and distillated solution of Sedum aizoon L. was studied on the oxidation
resistance of the liver in Cyprinus carpio Linnaeus. There were three designed groups in this experiment. Every Cyprinus
carpio Linnaeus was treated with original juice,distillated solution and tap water in each group respectively for three and
seven days. Results showed that SOD activity was markedly higher and MDA content was significantly lower than those of the
control after the treatment with original juice and distillated solution for three and seven days. There was no evident differ-
ence on POD activities between the treatment with distillated solution and original juice for three days. However,POD activ-
ities were significantly higher than those of the control after treating with original juice for three days. POD activities were re-
markably higher than those of the control in the treatment of original juice and distillated solution for seven days. Studies al-
so showed that the activities of SOD,POD and MDA content increased evidently with the treatment time,but MDA content
was still significantly lower than that of the control. In conclusion,the oxidation resistance of the liver in Cyprinus carpio
Linnaeus could be enhanced significantly with the treatment of Sedum aizoon L.
Key words:Sedum aizoon L.;Cyprinus carpio Linnaeus;SOD;POD;MDA
费菜 Sedum aizoon L. 为景天科景天属植物,在
全国广泛分布,又名救心草、景天三七、还阳草等。
近年来,费菜作为一种新兴的保健蔬菜得到人们的
重视和推广,并用来制作养心茶和费菜汁、酿酒、烤
胶等(尚成武,2000;李宋香,2001)。费菜作为园艺
花卉植物,在欧洲、俄罗斯、日本、韩国都有栽培,而
且费菜在日本和韩国还有一定的民间药用。有研究
表明,费菜有止血活血、养血安神的功效,主治吐血、
衄血、咯血、尿血、崩漏等,并对外伤出血、跌打损伤
有一定疗效,临床上可用于治疗神经衰弱、失眠、烦
躁不安等(国家中医药管理局,《中华本草》编委会,
1999)。有报道表明,用新鲜叶片滤汁治疗肺癌患者
大咯血、鼻衄血 20 例,出血均一次根治,不再复发
(王蕴蕴,1990)。费菜还具有解毒消肿(刘云,
1991;郑长宏,1991)、防治心脏病、降血压(林水金,
1997;陈伟超,2000)、抗肿瘤(付煜荣等,2008)、强
壮身体、治疗虚弱(国家中医药管理局,《中华本草》
编委会,1999)等作用。目前对费菜的药物开发尚处
于起步阶段,对费菜的抗氧化功能国内外未见报道。
鲤鱼在全国各地均有分布,是最重要的经济鱼类之
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一,也是我国最重要的养殖鱼种之一。本实验以鲤
鱼为实验动物,研究费菜对鲤鱼肝脏过氧化物酶
(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含
量的影响,为开发中草药及鱼类的绿色养殖提供科
学依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 实验动物 鲤鱼,购于山东省菏泽市牡丹区
鱼苗场,体重 42 ~ 49 g,体长 14 ~ 16 cm,驯养在温室
内,温度控制在 24℃ ±2℃。实验前将鲤鱼驯养 15 d。
1. 1. 2 试剂和仪器 SOD 测试盒、POD 测试盒、
MDA测试盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒均购自南
京建成生物工程研究所。723 分光光度计,榨汁机,
冰冻离心机,旋转蒸发仪,真空泵等。
1. 1. 3 费菜汁液的制备 费菜为本课题组栽培。
原汁液的提取:取新鲜费菜茎叶,洗净沥干,用榨汁
机榨汁,将榨出的汁液常温 6000 r /min离心 10 min,
取上清液 500 mL 做原汁液。馏出液的制备:取 500
mL原汁液用旋转蒸发仪 40℃,- 0. 1 MPa 蒸馏,收
集馏出液。
1. 2 方法
1. 2. 1 实验动物的处理 将费菜馏出液和原汁液
分别配成浓度均为 0. 2%的两个浓度组,驯养 15 d
的鲤鱼随机分为 3 组,每组 15 条,置于 60 L 的塑料
箱中浸泡,同时设一自来水对照组。水均为曝气一
周的自来水,充氧机充氧,每天喂饵料一次,2 d 换水
一次,处理 3 d、7 d时,分别从每组随机取鱼 6 条,解
剖、分离出肝脏。
1. 2. 2 酶液的制备 取肝脏,按质量体积比 = 1∶ 4
加入 0. 65% 的生理盐水,玻璃匀浆器匀浆,4℃,
10 000 rpm离心 10 min,取上清液待测。
1. 2. 3 酶活性的测定 SOD、POD 的酶活性,MDA
及蛋白质含量的测定,均按试剂盒上的测定方法进
行。SOD活力定义为每毫克组织蛋白在 1 mL 反应
液中 SOD抑制率达 50%时所对应的 SOD 量为一个
SOD活力单位。POD定义为在 37℃条件下,每毫克
组织蛋白每分钟催化产生 1 μg 的底物的酶量定义
为一个酶活力单位。MDA采用 TBA法,蛋白质测定
采用考马斯亮兰法。
1. 3 数据处理
利用 SPSS软件,求出平均值 ±标准偏差,并进
行单因素方差分析(ANOVA) ,各实验组与对照组之
间的两两比较采用最小显著差数法(LSD) ,取显著
性水平为 0. 05。
2 结果与分析
2. 1 费菜对鲤鱼肝脏超氧化物岐化酶(SOD)活性
的影响
由表 1 可知,在用馏出液和原汁处理鲤鱼 3 d
时,SOD活力均显著高于对照,在处理 7 d 时,SOD
活力均极显著高于对照,并且原汁组鲤鱼肝脏 SOD
活力与处理相同时间的馏出液组 SOD 酶活力基本
相等。同一处理组(馏出液组或原汁组)处理 7 d 时
的 SOD酶活力均明显高于处理 3 d 时的 SOD 酶活
力。说明费菜能显著提高鲤鱼肝脏 SOD 酶活力,而
且随处理时间的延长 SOD酶活力升高。
表 1 费菜对鲤鱼肝脏 SOD酶活性的影响(x ± s,n =6)
Table 1 Effect of Sedum aizoon L. on the SOD activity
in the liver of Cyprinus carpio Linnaeus (x ± s,n =6)
费菜
SOD酶活性(U /mg·prot)
3 d 7 d
对照组 25. 238 ± 5. 106 25. 238 ± 5. 106
馏出液组 36. 314 ± 3. 982* 55. 123 ± 3. 624**
原汁液组 39. 322 ± 2. 275* 57. 062 ± 7. 120**
注:* 表示与对照组相比差异显著(P < 0. 05) ,**表示与对照组
相比差异极显著(P < 0. 01) ,下同
Note:Compared with the control,* represents significant diffrence(P
< 0. 05) ,and ** represent extremely significant diffrence (P < 0. 01) ,
the same as below
2. 2 费菜对鲤鱼肝脏过氧化物酶(POD)活性的影响
由表 2 可知,在用馏出液处理鲤鱼 3 d 时,鲤鱼
肝脏 POD酶活性略高于对照组,但相差并不显著,
但在处理 7 d 时,POD酶活性显著上升,且极显著高
于对照。原汁组,处理 7 d时明显高于处理 3 d时的
POD酶活性,并且均极显著高于对照。说明费菜能
一定程度地提高鲤鱼肝脏 POD 酶活性,并且随处理
时间的延长,POD酶活性提高。
表 2 费菜对鲤鱼肝脏 POD酶活性的影响(x ± s,n =6)
Table 2 Effect of Sedum aizoon L. on the POD activity
in the liver of Cyprinus carpio Linnaeus(x ± s,n =6)
费菜
POD酶活性(U /mg·prot)
3 d 7 d
对照组 0. 605 ± 0. 027 0. 605 ± 0. 027
馏出液组 0. 672 ± 0. 030 1. 873 ± 0. 120**
原汁液组 0. 792 ± 0. 033** 1. 625 ± 0. 453**
2. 3 费菜对鲤鱼肝脏丙二醛(MDA)含量的影响
由表3可知,馏出液组和原汁组在处理3 d和7 d
时,MDA含量均极显著低于对照,但处理 7 d 时的
MDA含量均高于同一处理组处理 3 d 时的 MDA 含
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量。处理 3 d 时,原汁组 MDA 含量高于提取液组,
而处理 7 d 时,原汁组 MDA 含量却低于提取液组。
说明了费菜能显著降低鲤鱼肝脏 MDA的含量,防止
肝脏细胞膜的脂质过氧化损伤,但随处理时间的延
长,这种作用有所减弱。
表 3 费菜对鲤鱼肝脏MDA含量的影响(x ± s,n =6)
Table 3 Effect of Sedum aizoon L. on the MDA content
in the liver of Cyprinus carpio Linnaeus (x ± s,n =6)
费菜
MDA含量(nmol /mg·prot)
3 d 7 d
对照组 2. 015 ± 0. 274 2. 015 ± 0. 274
馏出液组 0. 431 ± 0. 113** 1. 028 ± 0. 171**
原汁液组 0. 577 ± 0. 296** 0. 834 ± 0. 225**
3 讨论
机体在代谢过程中,可能生成活性氧中间体
(ROIs) ,如·OH -、·O -2 、和 H2O2,这些自由基若不
及时消除,就会对机体造成氧化胁迫,引起酶失活、
脂质过氧化,并进而引起 DNA断裂、癌症、机体死亡
等(张贵生,2008)。丙二醛(MDA)是脂质过氧化的
产物之一。因此,MDA的含量反映了机体内脂质过
氧化的程度,间接地反映出细胞损伤的程度。SOD
是清除超氧阴离子自由基的主要酶类,POD 是催化
分解 H2O2 的重要酶类。因此,SOD、POD 是组成机
体抗氧化防御体系中的重要酶类,是保护细胞膜免
受损伤,降低细胞脂质过氧化的重要抗氧化酶类。
据报道,费菜富含多种营养成分,如蛋白质、脂
肪、糖和维生素 C、B;同时含有钙、磷、铁及锌、硒、铜
等微量元素,还含有丰富的药用成分没食子酸、熊果
苷、齐墩果酸、熊果酸、B-谷甾醇、黄酮类成分和生物
碱等(于志斌等,2007;付煜荣等,2008) ,是一个药
食两用的药物,在民间有很广泛的应用基础。传统
医学认为费菜性平、味甘、微酸,归心、肝经,具散瘀
止血、宁心安神、解毒之功效。文献报道了费菜中的
谷甾醇能阻止人体对胆固醇的吸收,降血脂,防血管
硬化;黄酮类可扩张血管促进血液循环,齐墩果酸可
保护肝脏,延缓老年性肝组织纤维化的作用(陈华
珍,陈建华,2003)。本实验研究发现费菜馏出液和
原汁液均有升高鲤鱼肝脏 SOD、POD 活性,降低
MDA含量的作用,而且在处理相同时间时,二者对
SOD、POD活性的促进作用及对 MDA含量的降低作
用基本相同。但随处理时间的延长,SOD、POD 活性
升高,而 MDA含量均有上升(但仍显著低于对照组
MDA含量)。这可能与费菜原汁液与馏出液所含的
化学成分基本相同有关,这种起作用的化学成分可
能是多糖或其衍生物。有研究报道多糖及其衍生物
具有抗氧化的作用,其作用机理主要是通过直接清
除自由基,提高抗氧化酶活性来实现的(赵琳静等,
2008)。连续处理 7 d比处理 3 d 时 SOD、POD 活性
增高,可能是因为费菜的某些成分改变了 SOD、POD
的构象,或激活了某些活性部位的原因,而 MDA 含
量有所上升可能是因为应激性,或随着处理时间的
延长,某些直接清除自由基的成分具累积性,累积到
一定的量这种清除自由基的作用减弱的结果,但具
体的作用机理有待进一步深入研究。
4 结论
对鲤鱼肝脏抗氧化性的影响研究结果表明,费
菜能显著提高鲤鱼肝脏 SOD、POD 的酶活性,降低
MDA的含量,抑制机体的脂质过氧化,而且随处理
时间的延长抗氧化酶活性增强。但关于费菜抗氧化
作用的机理尚不清楚,有许多问题需要进一步深入
研究。首先,费菜的化学成分复杂,其所含的化学成
分尚不清楚;其次,费菜中哪些物质具抗氧化性等都
有待进一步深入研究。
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