全 文 ：薄层扫描法测定复方黄槐颗粒中大黄素的含量
姜晓东
(蚌埠医学院附属医院药剂科 ,安徽 蚌埠 233004)
摘要:目的 建立复方黄槐颗粒中大黄素的含量测定方法。方法 采用薄层扫描法。展开剂:正己烷-乙酸乙酯-甲酸
(30∶10∶0.5),检测波长 λS=442nm, λR=610 nm。结果 大黄素在 0.048 ～ 0.240μg范围内呈良好线性关系 , r=0.998 0, 平均
回收率 =99.29%, RSD=1.09%。结论 本法简单 ,准确 , 重现性好 ,可用于复方黄槐颗粒中大黄素的含量测定。
关键词:薄层扫描法;大黄素;复方黄槐颗粒;含量测定
DeterminationofemodininfufanghuanghuaigranulesbyTLC-scanning
JIANGXiao-dong
(AffiliatedHospitalofBengbuMedicalColegeofTCM, Bengbu233004, China)
Abstract:Aim Toestablishamethodfordeterminationofemodininfufanghuanghuaigranules.Method Emodininfufanghuanghuai
granuleswasdeterminatedbyTLC-scanningwithamixtureofn-hexane-ethylacetate-formicacid(30∶10∶0.5)asthedevelopingsystem.
Thedetectionwavelengthwas442 nm.Results Thecalibractioncurvewaslinearintherangebetween0.048 and0.240μg, r=0.998
0.Averagerecoveryratewas99.29%, andRSDwas1.09%.Conclusion Themethodwassimple, accurate, welrepeatableandsuit-
ableforthecontentdeterminationofemodininfufanghuanghuaigranules.
Keywords:TLC-scanning;emodin;fufanghuanghuaigranules;contentdetermination
复方黄槐颗粒是由大黄 、槐米 、土茯苓 、六月雪等成分组
成 , 具有解毒泄浊的功效 ,主治各种原因所致肾功能衰竭而表
现为湿浊邪毒内蕰之症。大黄为本方的君药 , 所含的大黄素
是大黄中的主要有效成份 ,故以大黄素为指标 , 参考有关文献
资料及试验研究 [ 1 ～ 3] ,测定了 3批复方黄槐颗粒中大黄素的
含量 , 建立了本品的含量测定方法。
1 仪器与试药
CAMAGⅢ型薄层色谱扫描仪;CAMAGNANOMAT
4
手动
点样仪;定量毛细管(瑞士 CAMAG公司);硅胶 G薄层板(青
岛海洋化工集团);复方黄槐颗粒(批号 20050414, 20050509,
20050606);大黄素对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号:
110756-200110);试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备 [ 4] 取本品 1 g,精密称定 , 置具塞锥
形瓶中 , 加入甲醇 25 ml,加热回流 1 h, 放冷 , 摇匀 ,滤过。用
甲醇 30 ml分三次洗涤不溶物 , 每次 10 ml, 过滤 , 合并滤液 ,
滤液蒸干 , 残渣加 8%盐酸溶液 10 ml, 超声处理 2 min, 再加
三氯甲烷 10ml,加热回流 1 h, 放冷 ,置分液漏斗中 , 用少量三
氯甲烷洗涤容器 , 并入分液漏斗中 ,分取三氯甲烷层 , 酸液再
用三氯甲烷提取 3次 , 每次 10 ml,合并三氯甲烷液 , 减压回收
溶剂至干 , 残渣加甲醇使溶解 ,转移至 5 ml量瓶中 ,加甲醇至
刻度 , 摇匀 ,滤过 , 取续滤液 ,作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品 ,用甲醇适
量使溶解 , 制成每 1 ml含大黄素 0.048 mg的溶液 , 作为对照
品溶液。
2.3 色谱条件 吸附剂:硅胶 G板。展开剂:正己烷-乙酸乙
酯-甲酸(30∶10∶0.5)[ 5] ,预饱和 20 min。
2.4 检测波长 供试品溶液 , 对照品溶液经点样展开后 , 在
用 400 ～ 700 nm波长内扫描大黄素斑点 , 结果供试品与对照
品在 442 nm处均有最大吸收 , 故选用 λS=442 nm, λR =610
nm, 见图 1。
图 1 大黄素的波长扫描图
2.5 线性关系考察试验 精密吸取对照品溶液 1.0、 2.0、
3.0、4.0、5.0 μl, 点于同一硅胶 G板上 , 展开 , 取出 , 晾干 , 按
选定的色谱条件扫描测定 , 以点样量(X)为横坐标 , 峰面积
(Y)为纵坐标作图 , 得一直线 , 回归方程为 Y=114.907 +
911.370X, r=0.998 0, 结果表明大黄素在 0.048 ～ 0.240 μg
范围内具有良好的线性关系。
2.6 阴性对照试验 按处方组成和工艺要求制备缺大黄的
样品 , 按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。 取供试品
溶液 、对照品溶液与阴性对照溶液点于同一硅胶 G板上 , 展
开 , 取出 ,晾干 , 阴性对照溶液在对照品溶液斑点相应的位置
上无斑点 ,经薄层扫描后阴性对照溶液在对照品溶液斑点相
应的位置上也无相应的峰 , 说明阴性无干扰。
2.7 稳定性试验 吸取供试品溶液点于同一硅胶 G薄层板
上 , 依法展开后 ,取出 , 晾干 ,扫描测定峰面积积分值。在室温
下放置 , 每隔 40min测一次 , 结果大黄素斑点至少在 3 h内稳
定 , RSD=0.21%。
2.8 精密度试验 分别吸取同一对照品溶液 2 μl,点于同一
硅胶 G薄层板上 ,依法展开后 , 取出 , 晾干 , 扫描测定峰面积
积分值 , RSD=3.21%, 结果表明精密度良好 , n=6。
2.9 重现性试验 精密称取同一批(批号:20050606)样品 6
份 ,按上述供试品溶液制备方法制备 ,并分别点样 , 展开 , 扫描
测定峰面积积分值 , RSD=3.92%,结果表明重现性良好。
·20· 安 徽 医 药 AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal 2008January;12(1)
高效液相色谱法测定四环素眼膏的含量
王美英
(河南省洛阳市食品药品检验所 , 河南 洛阳 471003)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定四环素眼膏中四环素的含量。方法 采用 BDSC
18
色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm), 以
0.05 mol· L-1草酸铵溶液 -二甲基甲酰胺 -磷酸氢二铵(75∶20∶5)为流动相 , 检测波长为 280 nm, 流速为 1.0 ml· min-1。结
果 四环素的峰面积与浓度呈良好的线性关系 , 线性范围为 0.01 ～ 0.25 g· L-1 , 回归方程:Y=2.14×107X+1.46×104 , r=
0.999 9, n=7。平均回收率为 99.5%, RSD=0.72%。分析方法精密度 RSD=1.15%(n=5)。结论 该方法简便 、快速 、准确。
关键字:高效液相色谱法;四环素眼膏
DeterminationofointmenteyetetracyclinebyHPLC
WANGMei-ying
(LuoyangInstituteforFoodandDrugControl, Luoyang471003, China)
Abstract:Aim ToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofointmenteyetetracycline.Methods BDSC
18
wasused.Themo-
bilephaseconsistedofAmmoniumoxalatesolution, dimethylformamidesolutionanddiammoniumhydrogenphosphatesolution(75∶20∶5,
v/v).Theflowratewas1.0 ml· min-1 , andthedetectionwavelengthwassetat280 nm.Results Thecalibrationcarvewaslinearwith-
intherangeof0.01and0.25g· L-1 forthetetracycline, andtheregressionequationwasY=2.14×107X+1.46×104 , r=0.999 9, n
=7.Theaveragerecoveryratewas99.5%, andRSDwas0.72%.ThemethodprecisionRSDwas1.15%(n=5).Conclusion The
methodwasrapid, simpleandaccurate.
Keywords:HPLC;ointmenteyetetracycline
四环素为广谱抗生素 , 属于四环素类抗生素 ,为四环素
碱。 2000年版《中国药典》二部 [ 1] 、 2005年版《中国药典》二
部 [ 2]均收载有盐酸四环素及其制剂 , 含量测定均采用 HPLC
(高效液相色谱法)。四环素及其制剂仍采用生物测定法 [ 3, 4];
2.10 加样回收率试验 取批号为 20050509的样品(含大黄
素为 1.244 mg· g-1), 精密称取 5份 , 各加入大黄素对照品
0.96 mg, 并按照供试品溶液的制备方法制备 , 依法展开后 ,
测定大黄素的含量 , 结果本方回收率较好 , 见表 1,平均回收
率为 99.29%, RSD为 1.16%。
表 1 加样回收试验结果
编号 取样量 /g 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
1 0.908 0.96 2.086 99.69
2 0.913 0.96 2.071 97.39
3 0.940 0.96 2.133 100.42
4 0.947 0.96 2.136 99.79
5 0.921 0.96 2.096 99.17
2.11 样品含量测定 取三个批号的复方黄槐颗粒 , 分别吸
取大黄素对照品溶液 1 μl,供试品溶液 1 μl, 大黄素对照品溶
液 5 μl, 点于同一硅胶 G板上(20 cm×10 cm),依法展开 , 测
定三批样品中大黄素的含量。结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果
编号 批号 测得大黄素的量 /mg· g-1(n=3) RSD/%
1 20050414 1.109 2.39%
2 20050509 1.244 3.09%
3 20050606 1.252 1.22%
3 讨论
供试品溶液 , 对照品溶液经点样展开后 , 在 200 ～ 700 nm
波长之间内扫描时发现在 200 nm处有最大吸收 , 但是发现供
试品大黄素与对照品大黄素吸收波长有差距 , 后采用 400 ～
700 nm波长之间内扫描大黄素斑点 , 结果供试品与对照品在
442 nm处均有最大吸收 , 在波长 610 nm处有最小吸收 ,故采
用 λS=442 nm, λR=610 nm。
本试验展开剂为正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5), 试
验中还曾使用了三氯甲烷-甲醇(4∶1)和石油醚(30 ～ 60℃)-
甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂 , 经比较后 , 以
正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5)为展开剂效果较好 , 故本
文采用正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5)为展开剂。
2005版《中国药典》大黄素的含量测定方法为高效液相
法 , 然而实际工作中我们发现薄层扫描法操作更为简单 , 准
确 ,且重现性好 ,故制定本品质量标准时 , 采用了薄层扫描法 ,
可作为本制剂的质量控制方法。
参考文献:
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量 [ J] .安徽医药 , 2006, 10(9):671.
[ 4] 国家药典委员会.中国药典(一部)[ S] .北京:化学工业出版
社 , 2005:17.
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安徽医药 , 2005, 9(1):37.
(收稿日期:2007-08-07)
·21·安 徽 医 药 AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal 2008January;12(1)