全 文 ：浙江中医杂志 2016年 3月第 51卷第 3期
木豆叶中牡荆苷的含量检测
王海英 朱发伟
浙江省台州市立医院 浙江 台州 318000
摘要 目的：旨在建立牡荆苷的HPLC检测方法。方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为Kro-
masil KR100-5μm C18 250×4.6mm；先以甲醇-0.05%冰醋酸（27∶73）洗脱 50min，再以甲醇-0.05%冰
醋酸（90∶10）洗脱 15min;流速 1.0ml/min；柱温 30℃；在 338nm波长下测定牡荆苷含量。结果：对同一批药
材的叶、嫩枝和老枝进行了牡荆苷含量检测，结果发现，木豆叶药材的叶、嫩枝和老枝的含量有明显的差
别，嫩枝叶最高达0.46mg/g。结论：本检测方法简单、准确，可用于木豆叶质量控制。
关键词 木豆叶 牡荆苷 检测 中药研究
中药研究
木豆叶来源于豆科植物木豆 Cajanus cajan
(L.)Millsp的干燥幼嫩枝叶。现代研究表明，木豆叶能
抑制破骨细胞的形成[1]，有抗氧化作用[2]、能降低血脂、
降低胆固醇[3]。临床上用于治疗股骨头坏死[4]、促进伤口
愈合[5]。指标成分牡荆苷(Vitexin)，为黄酮类 8位葡萄
糖碳苷。牡荆苷具有多方面的药理作用，如能抗肿瘤[6]、
抗氧化[2]、还能抗病毒[7]、抗菌及抗炎等。本实验通过建
立木豆叶中牡荆苷含量的检验方法，对木豆叶的不同部
位进行检测，从而为木豆叶药材的筛选提供依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器：分光光度仪：UV-2550型，SHIMADZU公司；高
效液相色谱仪：Agilent 1100型，检测器：VWD；色谱工
作站：Agilent。
1.2 药品与试剂：牡荆苷对照品采购自中国药品生物
制品检定所(批号 111687-200602,20mg)，其余试剂均
为分析纯。
1.3 实验材料：木豆叶药材采购自海南龙塘，采收时间
为2012年11月，在检测前将药材老枝、嫩枝、叶分开。
2 方法和结果
2.1 系统适应性试验和色谱条件：分述如下。
2.1.1 系统适应性试验：为了确定牡荆苷的检测波长，
将牡荆苷对照品溶液用紫外-可见光分光光度仪在
200～700nm范围内进行全波长扫描如图 1，结果显示，
牡荆苷在269.00nm和338.50nm处有两个最大吸收峰，1
号峰为宽峰，2号峰为尖峰，两吸收峰吸收强度相当，由
于宽峰在检测波长略有变化时，吸收值变化比尖峰更
小，因此检测结果更准确，故选定 338nm为检测波长来
测定木豆叶中牡荆苷的含量。见图1。
2.1.2 色谱条件：色谱柱：Kromasil KR100-5μm C18
图1 牡荆苷紫外吸收图
（250×4.6mm）；流动相：先以甲醇-0.05%冰醋酸（27∶73）
洗脱 50min，再以甲醇 - 0.05%冰醋酸（90∶10）洗脱
15min；流速：1.0ml/min；柱温：32℃；进样量：10μl；检
测波长：338nm。在上述色谱条件下，理论塔板数按牡荆
苷峰计算，应不低于 6000。对照品和典型样品图谱见图
2、图3。
图2 牡荆苷对照品HPLC图谱
图3 牡荆苷样品HPLC典型图谱
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浙江中医杂志 2016年 3月第 51卷第 3期
2.2 对照品溶液制备：精密称取 105℃干燥至恒重的
牡荆苷对照品适量，加 50%甲醇制成每 1ml含 0.1mg溶
液，即得。
2.3 供试品溶液的制备：取木豆叶药材 1g，粉碎过 20
目筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氯仿适量，超声处
理，滤过，弃去氯仿液，药渣挥干，加入 50%甲醇，超声处
理，取出放冷，摇匀，滤过，滤液蒸干，残渣用水 10ml溶
解，滤过，上预先处理好的大孔吸附树脂柱,先用水
100ml洗柱，弃去水洗脱液，再用50%乙醇150ml洗脱，收
集乙醇洗脱液，蒸干，残渣用50%甲醇溶解并转移至5ml
容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察：取 0.1mg/ml的牡荆苷对照品溶
液，分别进样 1µl、2µl、3µl、5µl、8µl、10µl，以峰面积积
分值 X为横坐标，对照品质量 Y（μg）为纵坐标，绘制标
准曲线，计算得回归方程为：Y=0.0004X-0.0073，r=
0.9999，线性范围0.1～1μg。
2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液 10µl进样测
定，重复进样 6次，结果牡荆苷峰面积积分值的RSD为
0.3%（n=6）。
2.6 重现性试验：取同一批次的供试品溶液，进样，分
别测定6次，所得峰面积代入回归方程，RSD为1.9%（n=
6），所以该测定方法重现性良好。
2.7 稳定性试验：取上述对照品溶液室温放置，分别在
0、12、24、36、60、72h测定，峰面积的RSD为 1.5%，表明
对照品溶液在72h内稳定。
2.8 加样回收率：精密称取含量为 0.40mg/g的药材各
0.5g，共取9份，分别精密加入牡荆苷对照品适量，按供
试品溶液制备方法制备，测定，计算加样回收率。样品平
均加样回收率为 99.63%，RSD为 1.99%，表明本测定方
法具有良好的回收率。见表1。
表1 牡荆苷加样回收率数据表
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
称样量
g
0.5002
0.5002
0.5003
0.5006
0.5005
0.5005
0.5004
0.5006
0.5004
含量
mg
0.2001
0.2001
0.2001
0.2002
0.2002
0.2002
0.2002
0.2002
0.2002
加入量
mg
0.21
0.22
0.24
0.25
0.23
0.22
0.25
0.23
0.21
测得量
mg
0.4155
0.4125
0.4404
0.4457
0.4357
0.4155
0.4499
0.4289
0.4094
回收率
102.58%
96.55%
100.12%
98.19%
102.39%
97.86%
99.90%
99.42%
99.64%
2.9 样品测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶
液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。见表2。
表2 药材不同部位牡荆苷含量表
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
药材部位
嫩叶
嫩枝
老枝
含量(mg/g)
0.46
0.51
0.49
0.05
0.06
0.06
0.01
0.01
0.01
平均(mg/g)
0.49
0.06
0.01
3 结论
在以往的研究中，曾对比过牡荆苷在常用 HPLC分
离体系乙腈-水和甲醇-水中的分离情况，结果显示牡荆
苷在甲醇-水中的分离情况明显好于乙腈-水，但主峰有
拖尾，而加入醋酸后，能明显改善主峰拖尾情况。本文通
过牡荆苷在 200～700nm全波长扫描的方法确定了牡荆
苷检测波长为 338nm，并以此为基础建立了分析方法，
通过线性关系考察、精密度试验和重现性试验等实验验
证了本方法准确、可靠，可用于木豆叶质量控制。木豆是
华南地区习用的中草药，其种子、根、叶均能入药，对其
有效成分的研究将有助于加强木豆资源的综合利用。本
文通过对木豆叶的不同部位的牡荆苷含量进行检测，发
现嫩叶牡荆苷含量明显高于嫩枝和老枝，说明药用部位
应以嫩叶为主。
4 参考文献
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收稿日期 2015-11-25
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