全 文 ：229※工艺技术 食品科学 2008, Vol. 29, No. 03
收稿日期：2007-02-12
作者简介：敬思群(1966-)，女，副教授，主要从事新疆特色林果产品的研究。E-mail：jingsiqun@163.com
榅桲果实中多糖含量测定及纯化
敬思群1，关延新2
(1.新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046；2.新疆巴州质量技术监督局检验所，新疆 巴州 841000)
摘 要：用水提醇沉法提取榅桲多糖，应用分光光度法对榅桲果实中的多糖含量进行了测定。经苯酚-硫酸显色，
490nm处测定，其多糖的含量为67.28%，RSD为3.08%(n=4)。该测定方法重现性较好，平均回收率为101.2%±
3.54%，RSD为3.50%(n=3)。多糖浓缩液经聚酰胺柱纯化，脱色效果明显。
关键词：榅桲多糖；苯酚-硫酸法；含量测定；纯化
Determination and Purification of Polysaccharides in Fruit of Quince
JING Si-qun1，GUAN Yan-xin2
(1.College of Life Sciences and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China；
2.Institute of Testing, Xingiang Bazhou Qulity Technology Supervision Bureau, Bazhou 841000, China)
Abstract ：Polysaccharides from fruit of quince was obtained by hotwater extraction and ethanol precipitation. The content
of polysaccharide was determined by spectrophotometry.The content of polysaccharide assayed by phenol-vitriolic colorimetry
at 490nm,was 67.28% with3.08% of RSD (n=4). Recovery value for the polysaccharides assayed was 101.2%. The concen-
trated polysaccharides was purified by polyamide column and the results showed that decolorization was significant.
Key words：quince polysaccharide；phenol-vitriolic； termination；pur fication
中图分类号：Q946.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)03-0229-04
榅桲英文quince，拉丁文名为Cydonia oblonga
Mill，异名为C.vulgaris Per，蔷薇科榅桲属，别名
木梨。榅桲属仅榅桲一种，是古老珍奇稀少的果树之
一[ 1 ]。新疆维吾尔族人称榅桲为“比也”，维吾尔族
人除生食榅桲外，主要用作抓饭的辅助品，熬制果酱
等。榅桲也是疗效独特、具有浓郁的地方民族色彩的
传统维药[2-3]。榅桲也是传统的中药之一，富含具有药
用价值的化学成分，如鞣质类、有机酸、氨基酸、挥
发油和黄酮等。鞣质类物质主要包括没食子酸鞣质、矢
车菊苷配质、儿茶精、表儿茶精等，具有抗菌、抗
病毒、抗突变、抗肿瘤、抗脂质过氧化、抑制酶活
性，以及抗溃疡、止血、收敛、解毒等功效，对心
脏和心血管也有一定的效应，在种植和常吃榅桲的地
区，人们很少感冒[4]。榅桲现居全疆果树总数第十一
位，开发前景十分广阔。
多糖是由多个相同的单糖基以糖苷键相连而形成的
高聚物，在自然界分布极广。现代研究表明，多糖具
有生物活性功能，如免疫调节功能、抗病毒、抗肿瘤、
降血脂、降血糖以及抗疲劳、预防老年白内障和糖尿
病引起的视网膜病的病发症等[5]。因此，多糖的研究已
成各国热点。
近年来，植物多糖提取的研究已有许多文献报道，
但对于榅桲多糖的研究几乎没有[6]。本实验参考多种植
物的多糖提取精制工艺，制备出精制榅桲多糖，为深
入研究榅桲多糖提供技术平台。同时，采用苯酚-硫酸
比色法对榅桲多糖的含量进行测定，该方法测得的吸光
度可以作为榅桲多糖提取率高低的指标。
1 材料与方法
1.1材料与试剂
榅桲产于喀什地区，十月份购于乌鲁木齐，自然
风干。
苯酚、浓硫酸、葡萄糖、无水乙醇、丙酮、乙
醚、石油醚、氯仿、正丁醇，以上试剂均为分析纯；
聚酰胺 中国医药集团上海化学试剂公司。
1.2仪器与设备
Spectrumlab53紫外可见分光光度计 上海棱光技术
有限公司；电子天平(FA1004N) 上海精密科学仪器有
限公司；HH-S电子恒温水浴锅；SHZ-D循环水式真空
泵；RE-52A旋转蒸发仪；DHG-9141A型电热恒温干燥
2008, Vol. 29, No. 03 食品科学 ※工艺技术230
箱 上海精宏实验设备有限公司；层析柱(16mm×
40cm)；LG10-214A 离心机 北京医用离心机厂。
1.3方法[7-11]
1.3.1榅桲多糖的提取与精制
将自然风干的榅桲粉碎，过65目筛。称取16g，
置于索氏提取器中，依次用石油醚(60～90℃)、乙醚提
取4h，挥干溶剂，再加入80%乙醇220ml，以回流装
置90℃回流提取2h，重复提取一次，滤纸过滤，滤渣
挥干溶剂，加420ml蒸馏水，沸水浴回流提取2h，滤
纸过滤，再以220ml蒸馏水重复提取一次，合并滤液，
真空浓缩(60℃，真空度0.095MPa)至50ml，Sevag法除
蛋白，反复进行至无蛋白层，加入无水乙醇使乙醇浓
度达到80%，于40C冰箱中过夜，离心(6000r/min，
5min)，多糖沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗两
次，60℃干燥至恒重，即得精制榅桲多糖，称重备用。
1.3.2标准曲线的绘制
1.3.2.16%苯酚试剂的配制
取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO3 0.05g，蒸馏，
收集182℃馏分。称取9g，加水150ml溶解，置棕色
瓶内放冰箱备用。
1.3.2.2最大吸收波长的选择及线性回归方程确定
准确称取0.1000g葡萄糖标准品，蒸馏水溶解到
100ml容量瓶中，摇匀，定容，配成葡萄糖标准溶液。
取40、60、80μl葡萄糖标准溶液，分别倒入3个10ml
具塞试管中，加水至2ml。分别加入1ml 6%苯酚，5ml
浓硫酸，静置5min，蒸馏水定容到10ml，摇匀，于
80℃的恒温水浴中加热15min，冷水冷却至室温，30min
后，在波长为400～600nm范围内，用紫外可见分光光
度计扫描，测得最大吸收波长λmax。同时在此波长下，
以试剂空白为参与，同样的方法分别测定吸取0.2、0.
4、0.6、0.8、1.0、1.2ml葡萄糖标准溶液的吸光度。
以葡萄糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准
曲线，计算得回归方程。本实验中A值均在λmax波长
下测定。
1.3.3换算因子的测定
称取干燥恒重的精制榅桲多糖30mg，置于250ml的
容量瓶中，加入蒸馏水定容(可以稍微加热助溶多糖)，
制得榅桲多糖贮备液。按照1.3.2.2的方法测定榅桲多糖
贮备液的吸光度(A)，由回归方程求出榅桲多糖贮备液
中葡萄糖浓度，按下式计算换算因子。
换算因子f=W/CD (1)
式中，W为称取多糖的重量(mg)；C为精制榅桲
多糖贮备液中葡萄糖的浓度(mg/ml)；D为多糖的稀释
因素。
1.3.4样品中榅桲多糖含量测定
1.3.4.1样品溶液的制备
称取65目榅桲粉末1.5000g，加入80%的乙醇75ml
浸泡过夜，过滤，残渣以75ml 80%的乙醇 95℃回流
提取1h，趁热滤纸过滤，同法重复回流提取一次，滤
渣用热乙醇洗涤两次，挥干溶剂。滤渣连同滤纸置于
烧瓶中加100ml蒸馏水100℃水浴回流提取1h，重复提
取一次，趁热过滤，少量热蒸馏水洗涤残渣，合并滤
液于250ml的容量瓶中定容，备用。
1.3.4.2样品中多糖含量测定
吸取样品贮备液1ml，按照1.3.2.2的方法测定吸光
度(A)，由回归方程计算样品液中葡萄浓度(C)，按照下
式计算样品中榅桲多糖的含量：
CDf
多糖含量(%)=———×100 (2)
W
式中，C为样品贮备液中葡萄糖的浓度(mg/ml)；D
为多糖的稀释因素；f为换算因子；W为称取样品的重
量(mg)。
1.3.5显色稳定性实验
称取4份65目榅桲粉末各1.5000g，按照1.3.4.1的
方法制备4份样品溶液，分别移取样品溶液1ml置于具
塞试管中，按照1.3.2.2的方法操作，在显色溶液冷却
静置15、20、30、40min时分别测定其吸光度，以后
每隔0.5h测定一次，连续5h，计算相对标准偏差RSD%
并绘制该4份显色溶液的ABS-t曲线以及RSD%-t曲线，
考察生成物颜色的稳定性。
1.3.6重现性实验
称取4份65目榅桲粉末各1.5000g，按照1.3.4.1的
方法制备4份样品溶液，分别移取样品溶液1ml置于具
塞试管中，按照1.3.2.2的方法测定吸光度(A)，计算多糖
含量并求取平均值。
1.3.7加样回收率测定
称3份65目的榅桲粉末各1.5000g，分别加入不同
量精制榅桲多糖，按照1.3.4.1的方法制备加入多糖后的
样品溶液，分别移取样品溶液1ml置于具塞试管中，按
照1.3.2.2的方法分别测定三个加标样品溶液的吸光度
(A)，并计算多糖的回收率。
1.3.8多糖的纯化
对照组1：称取65目榅桲粉末1.5000g，加入80%
的乙醇75ml浸泡过夜，过滤，残渣以75ml 80%的乙醇
95℃回流提取1h，趁热滤纸过滤，同法重复回流提取
一次，滤渣用热乙醇洗涤两次，挥干溶剂，滤渣连同
滤纸置于烧瓶中加100ml蒸馏水100℃水浴回流提取1h，
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重复提取一次，趁热过滤，少量热蒸馏水洗涤残渣，
合并滤液，滤液过聚酰胺柱。上柱时，聚酰胺用量为
需脱色粗多糖的4倍，聚酰胺柱用1倍体积的去离子水
以1.5ml/min的流速进行洗脱。将纯化后样液移入250ml
容量瓶，定容。移取样品溶液1ml置于具塞试管中，按
照1.3.2.2的方法测定吸光度(A)，计算多糖含量。同时
另称取65目榅桲粉末1.5000g按照1.3.4.1方法制备样品溶
液，按照1.3.2.2的方法测定吸光度(A)，计算多糖含量。
对照组2：称取两份65目榅桲粉末1.5000g，加入
精制榅桲多糖20mg，按对照组1方法操作。同样得到
一组经聚酰胺柱纯化和未经聚酰胺柱纯化的多糖含量效
果比较值。
2 结果与分析
2.1最大吸收波长的选择
在490nm处的吸光度。标准曲线见图2。
得回归方程为A=0.5487C－0.0135(葡萄糖浓度单位
为mg/ml)，r=0.9973，线性范围0.0～1.0mg/ml。
2.3换算因子
将测得的多糖吸光度(A)代入回归方程 A=0.5487C－
0.0135，由式(1)计算其换算因子，结果为f=9.12。
2.4多糖含量及重现性
将4份平行实验的吸光度(A)，代入回归方程，由
式2计算各个样品的多糖含量。计算结果见表1。
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0
400440480490500540580
吸
光
度
波长(nm)
图1 苯酚-硫酸法测定葡萄糖标准液的吸收光谱曲线
Fig.1 Spectrum of standard sample by phenol-vitriolic method
under different concentrations
40μl
60μl
80μl
从图1中可见，葡萄糖显色溶液在490nm处有一最
大吸收峰(λmax=490nm)，故确定490nm为测定波长。本
研究中吸光度均在此波长下测定。
2.2工作曲线及线性回归方程
以试剂空白为参比，分别测定系列葡萄糖标准溶液
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.20.40.60.81.01.2
吸
光
度
葡萄糖浓度(mg/ml)
图2 葡萄糖标准曲线
Fig.2 Standard curve of glucose sample
2.5显色稳定性实验
实验结果表明，显色30min后开始稳定，此后10min
表1 样品多糖含量测定及重现性实验结果
Table 1 Determination results content of polysaccharides and
their repeatabilites
样品号 1 2 3 4
吸光度 0.339 0.365 0.3600.356
样品液中葡萄浓度(mg/ml)0.64240.68980.68070.6734
样品多糖含量(mg) 976.41048.51034.71023.6
样品多糖含量(%) 65.10 69.90 69.1068.24
样品多糖含量(%) 68.09±0.021
RSD(%) 3.08
0.39
0.38
0.37
0.36
0.35
0.34
0.33
0.32
0.31
0.30
15 30 60 120180240300
吸
光
度
时间(min)
图3 样品显色溶液稳定性
Fig.3 Stability of colored solution of sample
样1
样2
样3
样4
4.5
4.0
3.5
3.0
0 306090120150180210240270300
R
S
D
(
%
)
时间(min)
图4 RSD(%)与时间关系曲张线
Fig.4 Relationsip curve between RSD(%) and time
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Sevag法效果更佳。
3.4 榅桲果实中多糖含量采用硫酸-苯酚法测定，测定
原理是多糖在浓硫酸的作用下能水解生成单糖，并迅速
脱水形成糠醛衍生物，然后与苯酚缩合成有色化合物，
显色与糖含量呈线性关系。由于组成多糖链的单糖种类
很多，各种单糖在浓硫酸下脱水的难易程度，脱水产
物的结构和稳定性以及其与苯酚互变异构体的显色情况
均存在差异，不同单糖的标准曲线的斜率不同，所以
用葡萄糖做标准曲线会引起系统误差。本实验采用精制
榅桲果多糖计算换算因子，从而避免了用葡萄糖做标准
而引起的系统误差。
3.5 榅桲中多糖含量比较高，为67%左右。符合植物
中碳水化合物含量规律，比较香甜的植物中糖含量比较
高，而生物碱含量较低；味道比较苦涩的植物中生物碱
含量较大。
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表2 加标回收率实验结果(n=3)
Table 2 Results of recovery (n=3)
样品号 样品中多糖平均含量(mg) 加精制多糖(mg) 测得值(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) 经校正后样品中多糖平均含量(%)
1 20 1041.8 105.0
2 1020.8 30 1051.0 100.6 101.2±3.54 67.28±0.021
3 40 1060.0 98.0
内基本无变化，显色1 h后测定，其吸光度平均降低
2%，以后每0.5h其吸光度平均降低0.3%，在显色后的
5h内其吸光度平均降低6%。因此含量测定时，规定显
色30min后立即测定，所得结果的相对偏差最小。
2.6加样回收率
测定及计算结果见表2。
样品平均加标回收率为101.2%±3.54%，RSD为
3.50%(n=3)，表明本法测定结果准确可靠。
2.7多糖的纯化
浅褐色的多糖提取液过聚酰胺柱后，几乎无色透
明，脱色效果十分显著。
关于榅桲多糖的定性分析和结构组成，有待进一步
的研究。
3 讨 论[7-11]
3.1石油醚、乙醚可以除去榅桲果实中的脂溶性杂
质，包括一些干扰性的色素，用80%乙醇回流除去所
含单糖、低聚糖及甙类等干扰性成分，再用水提醇沉
法制得榅桲多糖。
3.2 本实验确定聚酰胺为理想的脱色剂，因为聚酰胺
脱色效果较好，多糖的回收率较高，同时可去除粗多
糖中的蛋白质和杂质；作为层析柱填料的聚酰胺粉，虽
目前国内比较昂贵，但使用后的聚酰胺，经5% NaOH
洗涤后可以再生利用。即使有些杂质与聚酰胺有不可逆
的吸附作用，也可用5% NaOH液浸泡一周，反复洗涤
2～3次后杂质可基本洗去。然后用蒸馏水洗至pH8～9
后以2倍量10%醋酸洗，再用蒸馏水洗至中性，即可
供重复使用。
3.3 Sevag法除蛋白一定要彻底，直至无蛋白层产
生。因为含有苯环的氨基酸的蛋白质对显色反应有一定
的干扰。可以将除去的蛋白质合并，干燥后称量得蛋
白质含量。Sevag法除蛋白效率不高，但在避免降解上
有较好效果，如能配合加入一些蛋白水解酶，再用
表3 纯化对多糖得率的影响
Table 3 Effects of purification on yield of polysaccharide
对照组1 对照组2
取样量(g) 吸光度 样品中多糖含量(%) 加入精制多糖(mg) 吸光度 样品中多糖含量(%)
未经聚酰胺柱 1.5000 0.355 68.06 20 0.367 68.48
经聚酰胺柱 1.5000 0.265 51.43 20 0.280 52.79