全 文 ：［制 剂］
荭草花提取物中 5 种成分在大鼠体内的肠吸收动力学
谢玉敏1， 杨 武1， 陆 苑1，2， 郑 林1，2， 陈思颖1，2， 黄 勇1，2*
(1． 贵州医科大学，贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004;2． 贵州医科大学药学院，贵州 贵阳
550004)
收稿日期:2015-06-12
基金项目:国家自然科学基金项目 (81360664) ;国家科技支撑计划课题 (2013BAI11B01) ;贵州省中药现代化科技产业专项基金项目
(黔科合重 G字 ［2013］ 4001)
作者简介:谢玉敏 (1992—) ，女，硕士生，研究方向为中药药代动力学、活性物质基础与药物新剂型。Tel: (0851)6908468，E-mail:
xym-999@ foxmail． com
* 通信作者:黄 勇 (1976—) ，男，教授，研究方向为中药活性物质基础、药动学与药物新剂型、新技术。Tel: (0851)6908468，E-
mail:mailofhy@ 126． com
摘要:目的 研究荭草花 Polygonum orientale L． 提取物中原儿茶酸、花旗松素、山柰素-葡萄糖苷、槲皮苷、山柰素-
鼠李糖苷在大鼠体内的肠吸收动力学特征。方法 采用在体肠灌流模型，超高效液相色谱-电喷雾-串联质谱 (UPLC-
ESI-MS /MS)法测定这 5 种成分质量浓度。结果 这些成分对 pH 值均不敏感，可能不是药物转运蛋白 P-gp 的底物;
原儿茶酸、山柰素-葡萄糖苷、槲皮苷和山柰素-鼠李糖苷在高质量浓度下存在饱和现象;胆汁对原儿茶酸的吸收具有
抑制作用，而对山柰素-葡萄糖苷的吸收具有促进作用。结论 荭草花提取物中这 5 种成分在整个肠段都有吸收，而
且小肠优于结肠，符合一级动力学特征。
关键词:荭草花提取物;原儿茶酸;花旗松素;山柰素-葡萄糖苷;槲皮苷;山柰素-鼠李糖苷;肠吸收动力学;UP-
LC-MS /MS
中图分类号:Ｒ969. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2016)04-0770-07
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 04. 011
Intestine absorption kinetics for five constituents in Polygonum orientale flower
extract in rats
XIE Yu-min1， YANG Wu1， LU Yuan1，2， ZHENG Lin1，2， CHEN Si-ying1，2， HUANG Yong1，2*
(1． Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，China;2． School of Pharmacy，Guizhou Medical
University，Guiyang 550004，China)
ABSTＲACT:AIM To study the intestinal absorption kinetic characteristics of protocatechuic acid，taxifolin，
kaempferol-3-O-β-D-glucosid，quercitrin and kaempferol-3-O-α-L-rhamnosid in Polygonum orientale flower extract
in rats． METHODS Based on the in situ intestinal perfusion model，the concentrations of these five constituents
were determined by ultra-performance liquid chromatography electrospray ionization-tandem mass (UPLC-MS /
MS)． ＲESULTS Being insensitive to pH，these constituents might not be the P-gp substrates． Saturation phe-
nomenon occurred in protocatechuic acid，kaempferol-3-O-β-D-glucosid，quercitrin and kaempferol-3-O-α-L-rh-
amnosid at high concentration． The bile inhibited the absorption of protocatechuic acid and promoted that of
kaempferol-3-O-β-D-glucosid． CONCLUSION These five constituents in Polygonum orientale flower extract can
be absorbed in the whole intestinal segments and they are absorbed more in small intestine than those in the colon，
which accords with first-order absorption kinetics．
KEY WOＲDS:Polygonum orientale flower extract;protocatechuic acid;taxifolin;kaempferol-3-O-β-D-glucosid;
quercitrin;kaempferol-3-O-α-L-rhamnosid;intestinal absorption kinetics;UPLC-MS /MS
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荭草为蓼科植物荭草 Polygonum orientale L．
的干燥全草，在贵州省广泛分布，为当地地产药
材，具有祛风利湿、活血、消积、止痛功能，民间
常用于胸痛、胸闷、气短、中风偏瘫 (嘴角歪
斜)、风湿疼痛等疾病的治疗［1-3］。本课题组前期
在筛选荭草各部位药理活性时发现，花比全草有着
更明显的抗心肌缺血作用，是该植物的主要药用部
位［4］，但其吸收影响因素并不明确，有待作进一
步研究。在体肠灌流模型是一种根据灌流液中药物
的剩余量来评价其吸收速率和吸收量，广泛用于研
究药物的吸收，在整个实验过程中，灌流的肠段都
有血供，更接近生物体的实际情况［5-7］，可分为单
向灌流、循环灌流和振动灌流等类型。本实验利用
超高效液相色谱-电喷雾-串联质谱 (UPLC-ESI-MS /
MS)法，同时测定肠灌流液中原儿茶酸、花旗松
素、山柰素-葡萄糖苷、槲皮苷、山柰素-鼠李糖
苷，结合在体肠灌流模型，考察质量浓度、pH值、
P-糖蛋白抑制剂、肠段等因素对荭草花提取物中这
5 种成分吸收的影响。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱
联用仪 (美国 Waters公司) ;HL-2S 蠕动泵 (上海
青浦沪西仪器厂) ;EL204 电子天平 (万分之一，
梅特勒-托利多仪器上海有限公司) ;ZH-2 涡旋混
合器 (天津药典标准仪器厂) ;Allegra64Ｒ 低温高
速离心机 (美国 Beckman Coulter 公司) ;MTN-
2800D 氮吹浓缩装置 (奥特塞恩斯仪器公司) ;
CQ250A-TS超声波清洗机 (上海跃进医用光学器
械厂) ;超纯水机 (四川沃特尔科技发展有限公
司) ;DK-98-ⅡA恒温水裕锅 (天津泰斯特仪器有
限公司)。
1. 2 材料 盐酸维拉帕米 (批号 29940，阿拉丁
试剂上海有限公司) ;葛根素 (批号 0752-9605)、
原儿茶酸 (批号 809-200102)对照品 (中国食品
药品检定研究院) ;花旗松素、山柰素-葡萄糖苷、
槲皮苷、山柰素-鼠李糖苷对照品 (自制，纯度均
≥98%)。荭草花提取物 (批号 20140815，自制)。
乙腈为色谱纯 (德国 Merck 公司) ;水为超纯水;
其他试剂均为分析纯。
1. 3 试验动物 健康 SD 大鼠，雄性，体质量为
(250 ± 20)g，由贵阳医学院动物中心提供，批号
SCXK (黔)2012-0001。
2 方法
2. 1 标准溶液的配制
2. 1. 1 5 种物质标准溶液的配制 精密称取原儿
茶酸，花旗松素、山柰素-葡萄糖苷、槲皮苷和山
柰素-鼠李糖苷适量，甲醇定容至 10 mL，得到原儿
茶酸 (1. 202 mg /mL)、花旗松素 (1. 208 mg /mL)、
山 柰 素-葡 萄 糖 (1. 216 mg /mL)、槲 皮 苷
(1. 200 mg /mL)和山柰素-鼠李糖苷(1. 210 mg /mL)
的贮备液。
2. 1. 2 内标溶液的配制 精密称取葛根素
10. 33 mg，甲 醇 定 容 至 25 mL，得 到 葛 根 素
(0. 413 2 mg /mL)的贮备液。取适量置于 10 mL量
瓶中，甲醇定容至刻度，配制成 9. 999 4 μg /mL的
内标溶液， － 20 ℃冰箱中保存备用，即得。
2. 1. 3 Krebs-Ｒinger’s (K-Ｒ)营养液的配制 称
取 CaCl2 0. 37 g、葡萄糖 1. 4 g，分别加少量蒸馏水
溶解。再称取 NaCl 7. 8 g、KCl 0. 35 g、NaHCO3
1. 37 g、NaH2PO4 0. 32 g、MgCl2 0. 02 g，蒸馏水溶
解后与 CaCl2和葡萄糖混匀，蒸馏水定容至 1 L，
即得。
2. 1. 4 荭草花提取物的制备 取荭草花 15 kg，加
10 倍量水煎煮 3 次，滤液合并浓缩，加乙醇至醇
体积分数达 65%，静置过滤，回收乙醇，残留物
用 1 /2 倍量水饱和正丁醇萃取 4 次，回收溶剂，残
留物用乙醇溶解，上聚酰胺柱，80%乙醇洗脱，收
集洗脱液，回收溶剂，即得。
2. 1. 5 供试液的制备 取 “2. 1. 4”项下提取物
及 K-Ｒ 营养液适量，超声 10 min，5 000 r /min 离
心 5 min，取 上 清 液 备 用，得 到 2. 5、 5. 0、
10. 0 mg /mL的供试液。
2. 2 色谱条件 Waters BEH C18色谱柱(2. 1 mm ×
100 mm，1. 7 μm) ;Waters Van Guard BEH C18保护
柱 (2. 1 mm ×5 mm，1. 7 μm) ;柱温 45 ℃;流动
相为 0. 1%甲酸乙腈 (A)-0. 1%甲酸水 (B) ;体
积流量 0. 35 mL /min;进样体积 1 μL;梯度洗脱
(0 ～ 0. 5 min，12%A;0. 5 ～ 0. 8 min，12% ～ 20%
A;0. 8 ～ 3. 0 min，20% ～ 25% A;3. 0 ～ 4. 0 min，
25% ～90%A;4. 0 ～ 5. 0 min，12%A)。
2. 3 质谱条件 电喷雾电离源 (ESI) ;毛细管
电离电压 3 kV;离子源温度 120 ℃;去溶剂气
N2，体积流量 650 L /h，温度 350 ℃;反吹气 N2，
体积 流 量 50 L /h;碰 撞 气 氩 气，体 积 流 量
0. 16 mL /min;质谱数据采集及处理软件为 Mass-
Lynx V4. 1 工作站，扫描方式为多反应离子监测
(MＲM)。离子对条件见表 1。
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表 1 质谱条件
Tab. 1 Mass spectrometric conditions
成分
质谱条件
ESI Parent(m/z) Daughter(m/z) Cone(V) collision(V)
原儿茶酸 － 153. 0 109. 0 30 15
花旗松素 － 303. 1 284. 9 35 10
山柰素-葡萄糖苷 + 449. 2 287. 1 20 15
槲皮苷 + 449. 2 303. 1 20 10
山柰素-鼠李糖苷 + 433. 2 287. 1 20 10
葛根素(内标) + 417. 0 267. 0 40 30
2. 4 样品处理方法 取肠循环供试液适量，初始
流动相稀释 3 倍后冷藏备用。取 100 μL 置于
1. 5 mL塑料离心管中，加 10 μg /mL 内标溶液
20 μL，加入 400 μL 初始流动相，涡旋混合 1 min，
15 000 r /min 离心 5 min，取上清液，采用 UPLC-
MS /MS法进样分析。
2. 5 大鼠在体循环灌流实验 参照文献 ［8-11］，
手术前大鼠禁食 12 h (自由饮水) ，腹腔注射 30%
乌拉坦溶液 (1. 4 g /kg)麻醉，固定动物。沿腹中
线切口，打开腹腔，于肠段两端切小口，分别插入
硅胶管后绑紧。实验时，先用等渗生理盐水洗去肠
管内容物，装好循环装置，量筒法校正循环液体
积，量取 50 mL 肠循环液，5 mL /min 速率平衡
10 min后立即读出体积，从中取出 1 mL，补加
1 mL K-Ｒ 缓冲液，记为 0 时。调节流量，再以
2. 5 mL /min体积流量继续循环，分别于 30、60、
90、120、150、180 min同法读数，取样，补加 K-
Ｒ 缓冲液，循环 180 min终止。根据量筒读数的变
化来计算大鼠吸水量，进而计算各时间点药物量，
即剩余药量 (P tn) ，以其自然对数 ln(P tn)对取样
时间 t作图，求出吸收转化速率常数 Ka、3 h 百分
吸收转化率 A 等参数。按照同样方法，分别考察
十二指肠段、空肠段、回肠段、结肠段。
2. 6 数据分析［12-13］
2. 6. 1 荭草花提取物在体肠吸收肠剩余药量的
计算
Ptn = Ctn × Vtn + 1. 0 ×∑
n－1
i = 1
Cti
注:Ptn为剩余药量;Ctn为药物质量浓度;Vtn为肠
循环液体积;tn为循环液灌注时间
2. 6. 2 吸收动力学参数的计算 以小肠内剩余药
量的对数 ln(X)对取样时间 t 作图，由直线斜率
计算吸收转化速率常数 Ka (h
－1)。计算公式为 3 h
累计吸收转化率 A = 0 h剩余药量 － 3 h剩余药量0 h剩余药量
× 100%
3 结果
3. 1 方法学研究
3. 1. 1 专属性试验 比较空白肠循环液、混合对
照品溶液和荭草花循环灌流样品溶液的色谱行为，
在“2. 2”项色谱条件下考察其专属性。结果，5
种成分及内标的保留时间分别为 1. 26、1. 72、
2. 55、2. 71、2. 79 和 3. 44 min，空白肠液无干扰，
见图 1。
3. 1. 2 标准曲线的制备 分别精密量取 5 种对照
品贮备液适量，用 3 倍稀释后的空白肠循环液溶
解，梯度稀释，得到混合系列标准溶液，按
“2. 4”项下方法处理，进样测定。以待测物的峰
面积与内标峰面积之比 (A /Ai)为纵坐标 (Y) ，
成分的质量浓度 (C)为横坐标 (X)进行回归，
得到原儿茶酸 (Y = 0. 086X + 0. 058，r = 0. 996 2，
2. 13 ～ 136. 2 μg /mL)、花旗松素 (Y = 0. 061X +
0. 008，r = 0. 999 5，1. 57 ～ 100. 7 μg /mL)、山柰
素-葡萄糖苷 (Y = 0. 148X － 0. 047，r = 0. 995 1，
1. 58 ～ 101. 3 μg /mL)、槲皮苷 (Y = 0. 183X +
0. 028，r = 0. 999 0，6. 25 ～ 399. 9 μg /mL)、山柰
素-鼠李糖苷 (Y = 0. 313X + 0. 328，r = 0. 999 3，
6. 30 ～ 403. 2 μg /mL)的回归方程，表明这 5 个成
分的线性关系良好。
3. 1. 3 回收率和精密度试验 按 “3. 1. 2”项下
方法，分别配制高，中，低 3 个质量浓度的溶液，
平行 5 份，所测 5 个成分的 A /Ai代入标准曲线方
程，以测得量与加入量之比计算方法回收率，结果
均大于 90%。同法计算日内精密度，再连续测定 5
天来计算日间精密度，结果 5 种成分的日内精密度
ＲSD为 2. 2% ～6. 7%，日间精密度 ＲSD为2. 5% ～
6. 7%，均符合要求。
3. 1. 4 稳定性试验 按 “2. 4”项下方法处理肠
灌流液样品，分别于 0、1、2、4、6、8、12 h 取
样分析。结果，5 种成分的 ＲSD 值均小于 5%，表
明样品溶液至少在 12 h内稳定。
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1． 原儿茶酸 2． 葛根素 3． 花旗松素 4． 山柰素-葡萄糖苷 5． 槲皮苷 6． 山柰素-鼠李糖苷
1． protocatechuie acid 2． puerarin 3． taxifolin 4． kaempferol-3-O-β-D-glucosid 5． quercitrin 6． kaempferol-3-O-α-L-rhamnosid
图 1 专属性试验结果
Fig. 1 Ｒesults of specificity tests
3. 1. 5 基质效应 取低、中、高 3 个质量浓度的
对照溶液，加入空白肠溶液 100 μL 溶解，按
“2. 4”项下方法操作，平行 5 次，得到相应峰面
积。另取 3 个质量浓度的对照溶液，45 ℃氮气流
下吹干，残留物以 100 μL 初始流动相溶解，按
“2. 4”项下方法操作，平行 5 次，得到相应峰面
积，取两个峰面积的比值来计算基质效应，然后同
法考察内标。结果，5 种待测成分和内标的比值均
在 85% ～ 115%之间，内标基质效应为 101. 1%，
均不存在基质效应。
3. 2 荭草花提取物的肠道吸收特性研究
3. 2. 1 荭草花提取物在 37 ℃ K-Ｒ 液中的稳定性
试验 以 K-Ｒ 液制备质量浓度为 5. 0 mg /mL 的荭
草花提取物溶液 50 mL，37 ℃下水浴，分别于 0、
3 h取样 (n = 3) ，测定 5 种成分的含有量变化，
考察其在 K-Ｒ液 (不同 pH值)中的稳定性。结果
表明，这 5 种成分在 37 ℃ K-Ｒ 液中稳定性较好，
其百分剩余量为 95. 2% ～104. 0%，见表 2。
表 2 K-Ｒ液中稳定性试验结果 (%，x ± s，n =3)
Tab. 2 Ｒesults of stability tests in K-Ｒ solution (%，x ±
s，n =3)
成分 pH = 7. 4 pH = 6. 86 pH = 6. 0 pH = 5. 0
原儿茶酸 101. 3 ± 4. 7 100. 1 ± 4. 5 104. 0 ± 5. 6 101. 6 ± 6. 3
花旗松素 100. 9 ± 5. 8 99. 7 ± 3. 6 99. 4 ± 5. 6 96. 7 ± 3. 7
山柰素-葡萄糖苷 95. 2 ± 4. 1 97. 2 ± 4. 3 96. 1 ± 4. 4 99. 4 ± 5. 7
槲皮苷 98. 2 ± 1. 8 98. 7 ± 2. 9 97. 8 ± 5. 0 97. 3 ± 6. 3
山柰素-鼠李糖苷 97. 6 ± 3. 6 98. 6 ± 1. 7 102. 0 ± 1. 0 96. 7 ± 4. 8
3. 2. 2 荭草花提取物在蠕动泵管路中的物理吸附考
察 以 K-Ｒ液制备质量浓度为 5. 0 mg /mL的荭草花
提取物溶液 50 mL，37 ℃下水浴，于体外空循环
3 h，分别在 0、3 h取样测定 (n = 3) ，考察其在管
路的吸附情况。结果表明，管路无明显物理吸附作
用，其百分剩余量为 95. 4% ～102. 3%，见表 3。
表 3 循环管路及空白肠灌流液中的稳定性试验结果 (x ±
s，n =3)
Tab. 3 Ｒesults of stability tests in circuit pipe and blank
intestinal perfusate (x ± s，n =3)
成分 管路吸附作用 /% 空白肠循环液中稳定性 /%
原儿茶酸 95. 4 ± 3. 3 102. 6 ± 3. 3
花旗松素 102. 1 ± 2. 3 102. 2 ± 5. 2
山柰素-葡萄糖苷 100. 3 ± 5. 3 98. 5 ± 2. 0
槲皮苷 102. 1 ± 4. 6 99. 8 ± 3. 9
山柰素-鼠李糖苷 102. 3 ± 1. 1 100. 1 ± 3. 8
3. 2. 3 荭草花提取物在空白肠灌流液中的稳定性
考察 取空白 K-Ｒ液 50 mL，于大鼠肠中循环 3 h，
制成空白肠液。再以其制备质量浓度为 5. 0 mg /mL
的荭草花提取物溶液，37 ℃下水浴恒温，分别在
0、3 h取样测定 (n = 3) ，考察其在空白肠液中的
稳定性。结果表明，这 5 种成分稳定性良好，其百
分剩余量为 98. 5% ～102. 6%，见表 3。
3. 2. 4 荭草花提取物的 pH 值对吸收的影响 由
于药物吸收可能受到循环液 pH 的影响，故进行全
肠段实验，考察 5. 0 mg /mL 荭草花提取物在不同
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pH (7. 4、6. 86、6. 0、5. 0)下 5 种成分的吸收，
比较 3 h累计吸收转化率 A。结果表明，花旗松素
在 pH 6. 86 时的吸收明显高于 pH 7. 4，具有显著
性差异 (P ＜ 0. 05)。经方差分析，这 5 种成分在
各 pH 值下没有显著性差异 (P ＞ 0. 05) ，说明对
pH值不敏感，而当 pH 6. 0 时，其 3 h 累计吸收量
相对较高。因此，以 pH 6. 0 的荭草花提取物溶液
进行实验，结果见表 4。
表 4 pH值对吸收的影响 (x ± s，n =4)
Tab. 4 Effect of pH values on absorption (x ± s，n =4)
成分
pH 7. 4 pH 6. 86 pH 6. 0 pH 5. 0
A /% Ka A /% Ka A /% Ka A /% Ka
原儿茶酸 23. 9 ± 9. 3 0. 103 ± 0. 041 26. 7 ± 3. 9 0. 097 ± 0. 054 26. 8 ± 7. 6 0. 112 ± 0. 018 22. 3 ± 7. 9 0. 104 ± 0. 032
花旗松素 58. 3 ± 5. 4 0. 303 ± 0. 047 69. 2 ± 4. 0＊＊ 0. 385 ± 0. 050* 65. 8 ± 8. 2 0. 360 ± 0. 069 65. 3 ± 2. 2 0. 359 ± 0. 018
山柰素-葡萄糖苷 66. 8 ± 9. 8 0. 369 ± 0. 085 64. 3 ± 11. 0 0. 295 ± 0. 097 68. 9 ± 11. 7 0. 394 ± 0. 107 49. 1 ± 23. 2 0. 259 ± 0. 175
槲皮苷 19. 0 ± 4. 3 0. 065 ± 0. 020 17. 7 ± 4. 6 0. 053 ± 0. 033 21. 4 ± 6. 8 0. 074 ± 0. 023 17. 6 ± 7. 5 0. 072 ± 0. 016
山柰素-鼠李糖苷 19. 1 ± 4. 8 0. 068 ± 0. 016 18. 8 ± 2. 4 0. 062 ± 0. 023 22. 7 ± 5. 3 0. 079 ± 0. 019 20. 3 ± 7. 3 0. 080 ± 0. 016
注:与 pH 7. 4 比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 2. 5 荭草花提取物的质量浓度对吸收的影响
取禁食后的大鼠随机分组，每组 4 只，进行全肠段
实验，分别考察不同质量浓度 (pH 6. 0)荭草花
提取物中这 5 种成分的 Ka和 3 h 累计吸收转化率
A。结果，原儿茶酸在低质量浓度时的 3 h 累计吸
收转化率明显高于中、高质量浓度 (P ＜ 0. 05) ;
中质量浓度山柰素-葡萄糖苷明显高于高质量浓度
(P ＜ 0. 05) ;低、中质量浓度槲皮苷、山柰素-鼠
李糖苷明显高于高质量浓度 (P ＜ 0. 05)。由此表
明，原儿茶酸、山柰素-葡萄糖苷、槲皮苷和山柰
素-鼠李糖苷在高质量浓度下可能存在饱和现象，
其在体内的吸收机制不仅是单纯的被动吸收过程，
还存在主动转运和易化扩散;花旗松素 3 h 累计吸
收转化率 A与吸收转化速率常数 Ka无显著性差异
(P ＞ 0. 05) ，提示其在体内的吸收机制可能是被动
吸收过程，见表 5。
表 5 质量浓度对吸收的影响 (x ± s，n =4)
Tab. 5 Effect of concertration on absorption (x ± s，n =4)
成分
2. 5 mg /mL 5. 0 mg /mL 10 mg /mL
A /% Ka A /% Ka A /% Ka
原儿茶酸 53. 0 ± 21. 0 0. 311 ± 0. 224* 26. 8 ± 7. 6## 0. 112 ± 0. 018 20. 3 ± 2. 4## 0. 077 ± 0. 015
花旗松素 64. 4 ± 4. 7 0. 351 ± 0. 057 65. 8 ± 8. 2 0. 360 ± 0. 069 62. 8 ± 1. 8 0. 322 ± 0. 025
山柰素-葡萄糖苷 54. 8 ± 17. 9 0. 284 ± 0. 143 68. 9 ± 11. 7＊＊ 0. 394 ± 0. 107* 32. 6 ± 12. 4 0. 130 ± 0. 085
槲皮苷 22. 2 ± 1. 5＊＊ 0. 088 ± 0. 023 21. 4 ± 6. 8＊＊ 0. 074 ± 0. 023* 11. 0 ± 1. 5 0. 039 ± 0. 015
山柰素-鼠李糖苷 21. 8 ± 1. 8＊＊ 0. 094 ± 0. 024* 22. 7 ± 5. 3＊＊ 0. 079 ± 0. 019 14. 2 ± 3. 7 0. 050 ± 0. 015
注:与高质量浓度比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01;与低质量浓度比较，##P ＜ 0. 01
3. 2. 6 胆汁对荭草花提取物吸收的影响 取 4 只
大鼠，按“2. 5”项下方法操作，结扎胆管，选择
5. 0 mg /mL荭草花提取物溶液 (pH 6. 0)50 mL作
为肠灌流液，进行整肠段循环实验，比较 3 h 累计
吸收转化率 A。结果表明，胆汁对原儿茶酸、山柰
素-葡萄糖苷在小肠内的吸收具有显著影响 (P ＜
0. 05) ，对原儿茶酸的吸收具有抑制作用，见表 6。
表 6 胆汁及 P-gp抑制剂对吸收的影响 (x ± s，n =4)
Tab. 6 Effects of bile and P-gp inhibitor on absorption (x ± s，n =4)
成分
不结扎 结扎 P-gp抑制剂
A /% Ka A /% Ka A /% Ka
原儿茶酸 26. 8 ± 7. 6 0. 112 ± 0. 018 54. 3 ± 20. 7＊＊ 0. 296 ± 0. 174* 41. 4 ± 15. 2 0. 179 ± 0. 077
花旗松素 65. 8 ± 8. 2 0. 360 ± 0. 069 65. 8 ± 2. 1 0. 364 ± 0. 020 62. 2 ± 5. 6 0. 325 ± 0. 037
山柰素-葡萄糖苷 68. 9 ± 11. 7 0. 394 ± 0. 107 34. 2 ± 10. 0＊＊ 0. 144 ± 0. 049* 31. 9 ± 5. 5＊＊ 0. 121 ± 0. 014*
槲皮苷 21. 4 ± 6. 8 0. 074 ± 0. 023 19. 4 ± 3. 0 0. 076 ± 0. 006 21. 3 ± 4. 8 0. 077 ± 0. 011
山柰素-鼠李糖苷 22. 7 ± 5. 3 0. 079 ± 0. 019 20. 7 ± 2. 7 0. 079 ± 0. 011 21. 5 ± 4. 4 0. 082 ± 0. 006
注:与不结扎组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 2. 7 P-gp抑制剂荭草花提取物吸收的影响 取
禁食 后 的 大 鼠 随 机 分 组，每 组 4 只。选 择
5. 0 mg /mL荭草花提取物溶液 (pH 6. 0)50 mL 作
为肠灌流液，进行全肠段实验，考察加入 P-gp 抑
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制剂维拉帕米后这 5 种成分的吸收情况，验证其是
否受到抑制剂外泵作用的影响，比较 3 h 累计吸收
转化率 A。结果表明，加入 P-gp 抑制剂后，原儿
茶酸的吸收增加，但无显著性差异 (P ＞ 0. 05) ;
山柰素-葡萄糖苷在小肠内的吸收降低，具有显著
性差异 (P ＜ 0. 05) ，可能与其他相互作用有关，
有待作进一步考察;花旗松素等其它成分的吸收无
明显差异 (P ＞ 0. 05) ，显示荭草花提取中成分可
能并不是药物转运蛋白 P-gp的底物。
3. 2. 8 荭草花提取物在不同肠段的吸收特点 取
禁食后的大鼠随机分组，每组 4 只，对各肠段进行
结扎，分别为十二指肠段 (自幽门 l． 0 cm 处开始
往下 10 cm 处、空肠段 (自幽门 15 cm 起往下
10 cm处) ;回肠段 (离盲肠上行 20 cm 处开始往
下 10 cm 处) ;结肠段 (从盲肠后端开始往下取
10 cm处)。选择 5. 0 mg /mL 荭草花提取物溶液
(pH 6. 0)50 mL作为肠灌流液，不同肠段分别用
供试液进行回流，考察大鼠肠道各区段的吸收情
况，比较不同肠段各成分的 3 h累计吸收转化率 A。
结果表明，花旗松素在十二指肠、空肠、回肠的吸
收较结肠快，同时十二指肠的吸收较回肠快，有显
著性差异 (P ＜ 0. 05) ;山柰素-葡萄糖苷在十二指
肠、空肠的吸收较结肠、回肠快，统计学有显著性
差异 (P ＜ 0. 05) ;槲皮苷在十二指肠的吸收较结
肠快，统计学有显著性差异 (P ＜ 0. 05) ;其余成
分在各肠段的吸收没有显著性差异 (P ＞ 0. 05)。
各成分在不同肠段的吸收趋势为原儿茶酸，空
肠 ＞回肠 ＞十二指肠 ＞结肠;花旗松素，十二指
肠 ＞空肠 ＞回肠 ＞结肠;山柰素-葡萄糖苷，十二
指肠 ＞空肠 ＞回肠 ＞结肠;槲皮苷，十二指肠 ＞空
肠 ＞回肠 ＞结肠;山柰素-鼠李糖苷，十二指肠 ＞
空肠 ＞回肠 ＞结肠。结果见表 7。
表 7 各成分在不同肠段的吸收 (x ± s，n =4)
Tab. 7 Absorptions of various constituents in different intestinal segments (x ± s，n =4)
成分
十二指肠 空肠 回肠 结肠
A /% Ka A /% Ka A /% Ka A /% Ka
原儿茶酸 7. 6 ± 5. 5 0. 018 ± 0. 015 11. 4 ± 9. 6 0. 027 ± 0. 025 8. 5 ± 2. 3 0. 021 ± 0. 010 5. 8 ± 2. 7 0. 014 ± 0. 008
花旗松素 24. 6 ± 3. 2＊＊## 0. 081 ± 0. 016* 21. 9 ± 6. 9＊＊ 0. 079 ± 0. 032* 15. 5 ± 2. 1＊＊ 0. 059 ±0. 008* 8. 9 ± 2. 8 0. 030 ± 0. 006
山柰素-葡萄糖苷 10. 7 ± 1. 3＊＊## 0. 024 ± 0. 005 9. 4 ± 6. 0＊＊## 0. 028 ± 0. 022 4. 0 ± 1. 9 0. 010 ± 0. 004 3. 8 ± 1. 9 0. 013 ± 0. 004
槲皮苷 10. 7 ± 4. 5＊＊ 0. 028 ± 0. 016 6. 6 ± 3. 9 0. 020 ± 0. 017 5. 6 ± 4. 4 0. 017 ± 0. 013 4. 0 ± 1. 3 0. 013 ± 0. 003
山柰素-鼠李糖苷 10. 4 ± 3. 3 0. 024 ± 0. 011 8. 1 ± 6. 1 0. 023 ± 0. 022 5. 6 ± 2. 2 0. 021 ± 0. 005 5. 5 ± 3. 1 0. 018 ± 0. 005
注:与结肠比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01;与回肠比较，##P ＜ 0. 01
4 讨论
在预实验期间，曾采用相对简便的单向灌流
法，但实验结果不稳定，易出现负值。分析原因，
可能为荭草花提取物中成分在肠道的吸收量小，其
误差导致了负值的出现。而选择循环灌流法时，各
成分的吸收趋势较明显，相关系数较好，得到了较
为稳定的数据。因此，正式实验采用在体肠循环灌
流模型进行研究。
正常肠道会吸收水分，从而使药物质量浓度升
高，故必须对水分进行校正。通过查阅文献发现，
循环灌流法使用酚红法或量筒法［12］进行校正，但
酚红本身存在一定的吸收［14-15］，会对实验造成误
差，尤其是本身吸收量小的化合物。通过预实验发
现，量筒法所得结果的稳定性更好，因此选择该方
法进行水分校正。
本实验结果表明，原儿茶酸、山柰素-葡萄糖
苷、槲皮苷和山柰素-鼠李糖苷在体内的吸收机制不
仅是单纯的被动吸收过程，还可能存在主动转运和
易化扩散因素;花旗松素在体内仅属被动吸收过程。
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独一味胶囊中 2 种成分的同时测定及在大鼠血浆中的药动学特征
雷旭伟1， 王双虎2， 周云芳2*
(1． 丽水市第二人民医院药剂科，浙江 丽水 323000;2． 丽水市人民医院临床药学实验室，浙江 丽水
323000)
收稿日期:2015-09-25
基金项目:2015 年浙江省医药卫生一般研究计划 (2015KYB457)
作者简介:雷旭伟 (1972—) ，女，副主任药师，研究方向为医院药学。Tel: (0578)2780158，E-mail:leixuwei1972@ 163． com
* 通信作者:周云芳，男，硕士，主任药师，研究方向为临床药理学和药代动力学。Tel: (0578)2780158，E-mail:zyf2808@ 126． com
摘要:目的 建立超高效液相串联质谱 (UPLC-MS /MS)法同时测定独一味胶囊 (独一味)中胡麻属苷和类叶升麻
苷，并研究其在大鼠血浆中的药代动力学特征。方法 蛋白沉淀法处理血浆后，采用 Acquity UPLC BEH C18色谱柱
(50 mm ×2. 1 mm，1. 7 μm)分析;流动相为乙腈-0. 1%甲酸水，梯度洗脱;体积流量为 0. 4 mL /min。结果 类叶升麻
苷的线性范围为 1 ～ 250 ng /mL (r = 0. 998 9) ，最低定量限为 0. 2 ng /mL;胡麻属苷的线性范围为 0. 5 ～ 100 ng /mL (r =
0. 998 6) ，最低定量限为 0. 1 ng /mL;低、中、高质量浓度的日内、日间精密度 ＲSD 均 ＜ 8. 84%，类叶升麻苷的相对
回收率分别为 (105. 33 ± 8. 64)%、(101. 55 ± 1. 22)%和 (96. 89 ± 5. 42)%，而胡麻属苷分别为 (103. 89 ± 9. 18)%、
(99. 34 ± 6. 63)%和 (95. 88 ± 3. 69)%。大鼠静脉注射胡麻属苷和类叶升麻苷后，两者的 t1 /2分别为 (1. 45 ± 0. 28)h
和 (0. 7 ± 0. 25)h，AUC(0 － t)分别为 (128. 79 ± 30. 52)ng /(h·mL)和 (98. 39 ± 16. 52)ng /(h·mL)。结论 该方法
简便、快捷，灵敏，适用于这两种成分的药代动力学研究。
关键词:独一味胶囊;胡麻属苷;类叶升麻苷;药代动力学;UPLC-MS /MS
中图分类号:Ｒ969. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2016)04-0776-05
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 04. 012
Simultaneous determination of two constituents in Duyiwei Capsules and their
pharmacokinetic characters in rat plasma
LEI Xu-wei1， WANG Shuang-hu2， ZHOU Yun-fang2*
(1． Department of Pharmacy，The Second People＇s Hospital of Lishui City，Lishui 323000，China;2． The Laboratory of Clinical Pharmacy，People＇s Hospi-
tal of Lishui City，Lishui 323000，China)
ABSTＲACT:AIM To develop an ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-
MS /MS)method for the simultaneous determination of sesamoside and verbascoside in Duyiwei Capsules (Lamio-
phlomis rotata)and to study their pharmacokinetic characters in rat plasma． METHODS After the plasma was
treated with protein precipitation method，the analysis was performed on an Acquity UPLC BEH C18 column
(50 mm ×2. 1 mm，1. 7 μm) ，mobile phase was acetonitrile-0. 1% formic acid aqueous solution with gradient elu-
tion，and flow rate was 0. 4 mL /min． ＲESULTS The linear range of verbascoside was 1 － 250 ng /mL (r =
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