全 文 ：少97 4年第 9期 . (总 4 1 3 ) . 2 9 .
洋金花 (风茄花 )注射液中蓑若碱及
东蓑著碱的圆芯纸层比色法 .
中国医学科学院药物研究所分析室 何 丽 一
洋金花 ( lF o s D a t u r a e ) (风茄花 ) 为茄科
(s o l a
n a e e o e
)植物白曼陀罗 ( D a t u r a m e t e l L· )
或毛曼陀罗 ( D a t u r a i n n o x i a M i l l . ) 的千燥花 ,
其主要成分为东蓑若碱 、 蓑若碱及阿托品等 。
目前洋金花的注射液已被应用于手术麻醉和对
漫性气管炎的治疗 。 由于洋金花的产地 、 品种 、
采收时间及制剂方法的不同 , 洋金花注射液中
生物碱的含量及东篇若碱与蓖若碱 (包括消旋
体阿托品 ) 之间的比例亦相差悬殊 , 故在临床
应用时 , 其疗效 、 副作用等也就不同 , 因此有
必要对浑金花注射液中东蓑若碱及蓖若碱的含
量进行分别测定 。
蓖若碱及东蓖若碱的分离可用分配柱层离
澎` , 、 纸层离法 ( 2一“ ’ 、 薄层层离法 `卜 “ ,等 ; 含
量测定的方法也很多 ,在常用的比色法中 vi t 。 -
ils 比色法重现性较差“ 。一 ` 4 ’ , 雷氏盐法需样量
较大( `毛, , i晃甲酚绿法则灵放度较高 , 重现性较
好 l(6 ’ 。 由于分配柱层离法需样品量大 、 消耗有
机溶媒多、 操作时间长 , 纸层离法展开时间太
长, 因此我们曾设计了氧化铝薄层层离澳甲酚
绿比色法分别 ifl] 定了茄科植物中蓑若碱及东蓖
著碱的含量 〔。 , , 此法需样量少 、 快速、 准确 。
但为了进一步简化 ,我们又研究了一个更快速 、
简便 、 重现性好的新方法 , 即利用圆芯纸层法
分离洋金花注射液中的蓑若碱及东蓑若碱 , 并
用澳甲酚绿比色法分别&lJ 定其含量 。 由于本法
所需设备简单 、 操作方便 , 两年来已广泛应用
于实际工作中。
药品和仪器
1
. 氯仿 、 丙酮 、 甲醇: 二级 , 北京化工
厂。
2
. 甲酸胺 : 二级 。
3
. 澳 甲酚绿 : 北京化工厂 。
理 . p脚 . 5 及 p H S . 6 的 0 . 舰%澳甲酚绿缓
冲溶液 : 按中国药典 1 9 6 3 年版二部附录方法 ,
分别配制 p H 4 . 5 及 p H S . 6 的邻苯二甲酸氢钾
缓冲液 , 并用 P H 计测定 ,调整至上述 P H 值 ;
然后称 80 毫克澳 甲酚绿溶于 20 0毫升 P H 4 . 5
或 P H 5 . 6 的缓冲溶液中, 如有不溶物可过滤
除去 。
5
.
0
.
0 05 ~ O
.
01 N 氢 氧 化钾无水乙醇溶
液 。
6
. 改良 D r a g e n d o r f f 试剂 : ( z )甲液 : 次
硝酸秘 0 . 8 5 克 , 加蒸馏水 4 0 毫升 、 冰醋酸 10
毫升溶解 ; ( 2) 乙液: 碘化钾 8 克 , 溶于 2 0 毫
升蒸馏水中。 取甲液和乙液各 5 毫升 , 加冰醋
酸 20 毫升及蒸馏水 60 毫升即成。
7
.
3 0% 甲酚胺丙酮溶液 : 取甲酞胺 30 毫
升 , 加丙酮 、 7 0 毫升 , 混匀 , 密封备用 。
5
. 阿托品: E : t r a P u r e : M e r e k 药厂 。
9
, 氢澳酸东食若碱 : u . s . .P
1 0
. 层离用纸 : 普通滤纸 。
1 .1 微量住射器 (50 毫升 ) : 上海注射器三
厂 。
、 1乞 往型分光光度计。
实验方法和结果
1
, . 圆芯纸层分离— 圆芯层离纸及 展 开用层离器 : 将 普通滤纸裁成直径为 15 厘米的
圆形 , 并剪成六等分 (图 1 ) , 或裁成直径为
12
.
5厘米的圆形 , 并剪成四等分亦可 。
将上述滤纸擂上纸捻夹在两个相同直径的
培养皿中间 , 并使纸拾浸人盛有展开剂的小玻
DOI : 10. 13288 /j . 11 -2166 /r . 1974. 09. 012
·
3 0
·
(总 4 1 4 )
A : 中心小孔 , 为插纸捻用 ; B : 点样处 ;
C : 空隙 , 以免各点 的样品互相千扰。
图 1 圆芯层离纸
卜气云三几共引
A : 培养皿 ; B : 纸捻 , C : 圆芯层离纸 ;
D
: 盛有展开剂的小玻璃皿 。
图 2 展开用层离器
璃皿中。 (图 2 )
2
. 蓑著碱及东蓑著碱的分离方法 : 将阿托
品溶液 、 氢嗅酸东蓑若碱溶液或洋金花注射液
一定量分别点在圆芯层离纸的虚线 B 处 , 待溶
液在纸上挥发干后 , 将纸片放在盛有浓氨液的
密闭容器中熏约 5 分钟 , 将纸取出 , 挥发除去
多余的氨蒸气 , 用 30 % 甲酞 胺 丙酮溶液处理
纸 , 待丙酮挥发后 , 于纸片中心小孔处插一纸
捻 , 用氯仿作流动相在密闭的培养皿中作径向
水平展开 , 待氯仿扩展至纸边缘时 ,将纸取出 ,
在电炉上烤干 , 并除去纸上的甲酞胺固定相 ,
喷以改良的 D ar ge n d o r f f 试剂 , 蓑著碱及东蓑
若碱 即呈橙红色斑点 , 其 R f 值分别为 0 . 16 及
0
.
7 6
0
3
. 蓑若碱及东食若碱的标准 曲线 : 澳甲
酚绿染料比色法是根据生物碱与澳甲酚绿生成
鱼旦燮趁立
能定量溶于氯仿的黄色复合物 。 可分出此黄色
氯仿溶液进行比色 ; 如在此溶液中加稀碱则复
合物被分解 , 有机溶剂 由黄色转成蓝色 , 以蓝
色进行测定则灵敏度更高 , 本文即基于此原理
进行蓑若碱及东蓑若碱的含量侧定 。 蓑若碱用
P H 5
.
6 的澳甲酚绿缓冲溶液 , 东 蓑著碱 需要
用 P H 4 . 5 的嗅 甲酚绿缓冲溶液 , 否 则 灵敏度
太低 。
(l ) 蓑若碱的标准曲线 : 蓑若碱与阿托品
互为光学异构体 , 纸层离后 R f 值 相同 , 因此
本文采用阿托品为标准品 。
① 标准溶液的制备 : 精密 称 取 于 10六
干燥恒重的阿托品约 10 毫克于 10 毫升容量瓶
中 , 加氯仿溶解 , 并用氯仿稀释至刻度 , 即成
1微升约含 1 微克的阿托品溶液 。
② 标准曲线的制备 : 精密吸取阿 托 品氯
仿溶液 10 、 30 、 5 0 微升于 10 毫升 分液 漏斗
中 , 加入 6 毫升氯仿及 1毫升 PH 5 . 6 的 嗅甲
酚绿缓冲溶液 , 密塞后剧烈 振 摇 3 分 钟 , 放
置 , 待氯仿层完全分清后 , 分取 4 毫升氯仿溶
液于 10 毫升带 塞 刻 度 试 管 中 , 加人 1 毫升
0
.
0 5 ~ O
.
01 N氢氧化钾无水乙醇 溶液 , 摇匀
后将此蓝色溶掖在波长 6 20 毫微米处用 1厘米
比色杯比色 , 以空白实验为对照 , 将光密度与
浓度作图 , 得一通过原点的直线 。
(2 ) 东蓑著碱的标准曲线 :
① 标淮溶液的制备 : 精密称取于 10 5 Oc 干
燥至恒重的氢澳酸东蓑若碱约 12 毫克左右的
相当于东食著碱 10 毫克左右 ) 于 10 毫升容量
瓶中 , 用甲醇溶解 , 并用甲醇稀释至 10 毫升 ,
即成 1 微升约含 1 微克的东食著碱溶液。
② 标准曲线的制备 : 精密吸取 东蓑若碱
甲醇溶液 20 、 40 、 60 微升于 10 毫升分掖漏斗
中 , 待甲醇挥发干后 , 加 6 毫升氯仿 , 1毫升
p H 4
.
5 澳甲酚绿缓冲溶液 , 以下均同食若碱
项下操作 。 结果见表 1 。
4
. 回收率试验 :
( 1) 将蓑若碱及东食若碱纯品标准溶液一
定量点在空白滤纸片上 , 待溶剂挥发后 , 将滤
纸剪成细条放在 10 毫升分液漏斗中 , 然 后 如
1 9 7 4年第 9 期 (总 4 15 ) . 3 1 -
表 1 蓖若碱及东蓖若碱的标准曲线 分别为 92 . 0% 与 80 . 5% , 由于回收率稳定 ,
所以可以用这些曲线做为分离回收后测定的标
准曲线 。 (图 3 )
光密度.07.654
月 . . . . . . .
.
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纯品标准曲线项下同样操作 , 分别得到与纯品
标准曲线相同的两条通过原点的直线。
(2 ) 将蓑若碱与氢嗅酸东蓖著碱的标准溶
液一定量点在圆芯滤纸的起始线上 , 用氨气熏
5 分钟后使生物碱全部呈游离状态 ,将纸取出 ,
待纸上无氨味底 用 30 % 甲酞胺丙酮 溶液处
理纸 , 丙酮挥发后在纸中心擂入纸捻 , 用氯仿
作展开剂 , 展开完毕 , 取出 , 在电炉上烤至纸
片不冒白烟 , 用显色剂显色 , 将生物碱橙红色
斑点用铅笔划 出 , 纸在空气中晾干后 , 在氨气
中熏片刻 , 斑点颜色立 即消退 , 取 出待纸上无
氨味后 , 分别将食若碱与东蓑著碱的斑点剪成
细条 , 放在 10 毫升分液漏斗中 , 以下 均 同标
准曲线项下同样操作 , 并随行空白 , 得到的光
密度值与生物碱量作图均为直线 , 但斜率与未
经纸层离的不同 , 只分别为食若碱与东蓑若碱
的标准曲线之 92 . 0% 与 80 . 5% , 表明 回收率
0
。
2
0
。
1
0 1 0 20 30 40 5 0 6 0 7 0 80 微克
( l) 蓖若碱标准曲线 ; ( 2 ) 层离后蓖若碱标准
曲线 ; ( 3 ) 东葛若碱标准曲线 , ( 4) 层离后东
蓖若碱标准曲线
图 3 蓖若碱 、 东肖若碱的标淮曲线
5
. 样品分析 : 精密吸取洋金花 注射液 一
定量, 点在圆芯滤纸的起始线上 , 边点边低温
烘干 , 然后按照回收率项下各步骤操作 , 得到
的光密度值 , 根据纸层离后的标淮曲线及样品
用量计算洋金花注射液中蓑著碱及东蓑若碱的
含量 。 结果见表 2 。
表 2 不同批号洋金花注射液中篇著碱及东食著碱的含量 (毫克 /毫升 )
莫蓉碱 〔毫克 /毫升 )
东莫奢碱 (毫克 /毫升 )
0
。
5 3 1 0
.
30 1 0
.
06 1 0
。
0 7
3
。
94 1 2
.拐 1 1 . 1 4 1 0 。 7 2
讨 论
1
. 在研究用圆芯纸层法分 离 食若碱及东
蓑若碱时 , 我们试验了多种单一的或混合的展
开剂以及用各种方法处理层离纸 , 最后认为用
甲酞胺为固定相 , 以氯仿作流动相的水平径向
娜芯纸层分离效果较好 。
2
. 比 较了 用 5% 、 10% 、 1 5% 、 20% 、
匆% 、 40 % 的甲酞胺丙酮溶液处理纸的结果 ,
以 30 % 甲酞胺丙酮溶液的分离效果最佳 。 处理
时要使甲酞胺在纸上分布均匀 , 并注意不能使
点样处浸在固定相中 , 以免样品可能损失而引
起误差 。
3
. 本分离条件只适合 分离 游离的食若碱
及东蓖若碱 。 如果样品中只含游离碱时 , 则可
将样品直接点在用30 % 甲酞胺丙酮溶液处理过
的圆芯滤纸上 , 即用氯仿展开。 但如样品是生
物碱的盐类或为洋金花的注射液时 , 则应首先
·
3 2
·
(总4 16 )
使其转成游离状态 , 然后再进行层离 , 否则分
离不开 (见图 3 ) 。 如果将样品溶液碱化以有机
溶剂提取 , 然后再浓缩点样 , 则需要的样品量
大 , 而且提取等操作也很麻烦 , 不能达到快速
目的 。 因此我们采用将生物碱盐类或洋金花注
射液直接点在未经甲酞胺处理过的干燥滤纸片
上 , 然后将纸片放在盛有浓氨液的 密 闭 容器
中 , 以氨气熏 5 分钟 , 使生物碱全部游离后 ,
再将纸用甲酞胺处理 , 以流动相展开 , 实验证
明这样处理能得到较好的分离效果 , 也节约了
样品 、 溶剂和时间。
.新军药学杂志 .
时需重新制备标准曲线 。
7
. 不同滤纸片空白值有所不同 , 因此每片
滤纸必须留出一份作随行空白用 。
8
. 中心小孔处的纸捻粗细需合适 ,太细展
开太慢 ;太粗则展开速度虽快 ,但分离效果差 。
9
. 由于圆芯滤纸从点样处到溶剂前 缘 的
距离较短 , 故只适合于分离含有蓖著碱及东蓖
若碱的茄科植物及其制剂 , 有其它蓖著烷衍生
物存在时对分离有干扰 。 洋金花原料 、 浸膏及
其片剂 , 因有色素及其它杂质 ,故提取液需经提
纯后再分离 。 点样量视样品浓度而定 , 一般相
当于食若碱及东蓑若碱 20 ~ 4 0微克较合适。
A : 东蓖若碱 ; B : 蔑若碱 (阿托品 ) ,
C
: 硫酸阿托品与氢澳酸东蔑蓉碱 。
图 4 生物碱游离或成盐时的层离图谱
4
. 显色剂改良的 D ar ge o d or f 试 剂 是 酸
性试剂 , 当纸上有 甲酞胺时显色就很困难 , 因
此在层离后显色前 , 必须将纸片在电炉上烘烤
至纸片不冒白烟时即表示甲酞胺已全部除尽。
5
. 用改良 D ar ge o do fr f 试剂 显色确定斑
点位置后 ,用氨中和显色剂中的醋酸,辉虑立即
消褪 , 以此法消除显色剂对比色侧定的影响。
6
. 应用染料比色法时缓冲溶液的 P宜值对
测定结果有影响 , 因此每配一批新的缓冲溶液
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(上接第 2 8页 )
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1 9 36
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