全 文 ：比值降低，逆转 Thl /Th2 的失衡，减少机体的免疫炎症损
伤，增加 sIgA分泌，从而减轻气道炎症，清除病原体。但
其对 Th1 /Th2 免疫平衡的干预环节和机制尚有许多未解之
处，有待进一步研究。
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枇杷花醇提物止咳化痰作用实验研究
陈晓芳， 张 倩， 吴文倩， 刘春宇*
(苏州大学医学部药学院，江苏 苏州 215123)
收稿日期:2011-12-12
作者简介:陈晓芳 (1982—) ，女，硕士，研究方向:中药药理。
* 通信作者:刘春宇 (1961—) ，女，教授，研究方向:中药活性成分及药理。E-mail:Liuchunyu@ suda． edu． cn
摘要:目的 探讨枇杷花醇提物的止咳、祛痰作用及其作用机制。方法 采用氨水喷雾法，记录小鼠咳嗽潜伏期以及
3 min内的咳嗽次数;采用枸橼酸喷雾法，记录豚鼠咳嗽潜伏期以及 5 min 内的咳嗽次数;采用气管酚红法，比较各
给药组之间酚红排泌量的差异;采用辣椒素刺激 C-纤维释放 P 物质，观察枇杷花醇提物外周镇咳作用机制。结果
枇杷花醇提物明显减少小鼠和豚鼠的咳嗽次数 (P ＜ 0. 01) ;明显延长咳嗽潜伏期 (P ＜ 0. 01)。枇杷花醇提物能显著增
加小鼠酚红排泌量 (即气管段排痰量) (P ＜ 0. 05)。枇杷花醇提物对 C-纤维释放 P物质的释放有一定抑制作用。结论
枇杷花醇提物具有止咳、祛痰作用，其作用机制可能通过降低 C-纤维释放 P物质达到止咳作用。
关键词:枇杷花;止咳;祛痰;P物质
中图分类号:R285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2013)01-0167-03
枇杷 Eriobotrya japonica (Thunb．)Lindl 为蔷薇科植物，
药用历史悠久，具有化痰止咳、和胃降气之功效，作为传
统中药，枇杷的研究集中于叶和果实，对枇杷花的相关研
究相对较少，枇杷花气味香醇独特，性温，可入肺散寒，
化痰止咳，润肺下气［1-2］。目前，虽有枇杷花止咳方面的药
效研究，但对其作用机制及药效物质基础的研究未见报道。
另外，枇杷树在花期进行疏花以提高枇杷品质，而疏掉的
花蕾大多没有充分利用。为了进一步开发利用枇杷花的资
源，课题组对枇杷花的止咳化痰药理作用及药效物质基础
进行了系统研究，本实验采用多种动物模型观察了枇杷花
醇提物的止咳化痰作用，并初步探讨了其作用机制。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 电子天平 (EL303 梅特勒-托力多仪器) ;超声
雾化器WH-802型 (广东粤华医疗器械厂) ;小鼠 /豚鼠玻璃
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容器 (自制) ;RE-52A 旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂) ;
DZF-6050 真空干燥箱 (上海精宏实验设备有限公司)。
1. 2 实验动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体质量 18 ～ 22
g;豚鼠，雌雄兼用，体质量 150 ～ 190 g，均由苏州大学医
学部实验动物中心提供。实验动物生产许可证 SCXK (苏)
2007—0007，实 验 动 物 使 用 许 可 证 SYXK (苏 )
2007—0035。
1. 3 材料
枇杷花:采于苏州东山，经本院生药教研室刘春宇教
授鉴定为枇杷 Eriobotrya japonica (Thunb．)Lindl 的花，干
燥后备用。
枇杷花醇提物:取枇杷花粉末1 000 g，加 10 倍量 95%
乙醇，60 ℃，回流提取 2. 5 h，过滤，重复 2 次，合并滤
液，浓缩得浸膏，给药剂量以相当于原药材质量计算。豚
鼠灌胃剂量:枇杷花醇提物高剂量组 (3 g /kg) ，枇杷花醇
提物中剂量组 (1. 5 g /kg) ，枇杷花醇提物低剂量组 (0. 75
g /kg) ;小鼠灌胃剂量:枇杷花醇提物高剂量组 (4 g /kg) ，
枇杷花醇提物中剂量组 (2 g /kg) ，枇杷花醇提物低剂量组
(1 g /kg)。
念慈庵蜜炼川贝枇杷膏 (香港京都念慈总厂有限公
司，批号:Y3808010) ;P 物质试剂盒 (R＆D 分装) ;其他
试剂均为分析纯。
2 方法
2. 1 对氨水引咳小鼠的影响 采用小鼠氨水引咳法［4］，预
实验用氨水引咳法筛选一批体质量 18 ～ 22 g 的昆明小鼠，
3 min 内不发生咳嗽的小鼠不予选用，待小鼠稳定 2 d 后，
取合格小鼠 50 只，雌雄各半，按体质量随机分为 5 组，对
照组 (生理盐水)、念慈庵蜜炼川贝枇杷膏组 (5. 4 g /kg)、
枇杷花醇提物高剂量组、中剂量组、低剂量组，连续给药
7 d，小鼠每次灌胃 0. 2 mL /10 g 溶液，末次给药前禁食不
禁水 12 h，于末次给药 1 h 后，将小鼠置于自制密闭玻璃
容器中，超声雾化器喷入氨水 20 s 后，立即取出小鼠，记
录小鼠咳嗽潜伏时间和 3 min内咳嗽次数。
2. 2 对枸橼酸引咳［3］豚鼠的影响 预实验，将豚鼠放入自
制密闭玻璃容器内，待其在容器内稳定 1 min 后，用超声
波雾化吸入器匀速将 17. 5 g /L的枸橼酸喷入容器内，喷雾
时间为 40 s，以豚鼠出现第一声响亮的咳嗽声为准，开始
记录豚鼠咳嗽潜伏期及 5 min 内咳嗽次数，咳嗽次数 ＜ 10
次和 ＞ 30 次者不予选用。
次日将挑选筛选合格的豚鼠 35 只随机分 5 组，每组 7
只，分为枇杷花醇提物高剂量组、中剂量组、低剂量组，
对照组 (生理盐水)、念慈庵蜜炼川贝枇杷膏阳性药物组
(10 g /kg) ，各组灌胃给药，对照组给予生理盐水，每天 1
次，连续 7 d，于末次给药前禁食不禁水 12 h，末次给药后
1 h按预实验方法重复引咳实验，记录豚鼠咳嗽潜伏期及 5
min内豚鼠咳嗽次数。
2. 3 对小鼠酚红排泌［5］的影响 取昆明种小鼠 50 只，雌
雄各半，分为枇杷花醇提物高剂量组、中剂量组、低剂量
组，对照组 (生理盐水)、念慈庵蜜炼川贝枇杷膏组 (5. 4
g /kg) ，每组 10 只，各组按上述剂量灌胃给药，每天 1 次，
连续 7 d，模型组则灌胃等体积生理盐水 0. 1 mL /10 g，末
次给药前，禁食不禁水 12 h，末次给药 30 min 后，给小鼠
腹腔注射 0. 5%苯酚红溶液，剂量为每只 0. 5 mL，注射 1 h
后断颈处死小鼠，沿甲状软骨剪下一段气管，每只小鼠剪
下的气管要求等长，放入离心管中，加入 3 mL生理盐水和
1 mol /L的氢氧化钠溶液 0. 2 mL，离心 (转速2 000 r /min，
时间 5 min) ，取上清液，于紫外可见分光光度计 546 nm波
长处测量并记录吸光值。
2. 4 对辣椒素刺激豚鼠 C-纤维释放 P 物质的影响 取 35
只豚鼠，随机分为正常组、模型组、枇杷花醇提物高剂量
组、中剂量组、低剂量组，每组 7 只。实验前禁食不禁水
12 h，模型组按 0. 4 mL /100 g灌胃生理盐水，灌胃 1 h后将
豚鼠放入特制的4 000 mL 烧杯中，用超声波雾化器以最大
量雾化 30 μmol /L辣椒素，喷雾 2 min，制备辣椒素致豚鼠
咳嗽模型，正常组灌胃生理盐水后不进行喷雾。喷雾 2 min
后，立即取出豚鼠，深度麻醉豚鼠 (水合氯醛，0. 1 mL /
100 g，腹腔注射) ，完整取下气管心肺组织，用注射器套管
注射 5 mL冰冷的生理盐水于气管，共灌洗 3 次，收集支气
管肺泡灌洗液 (BALF) ，3 500 r /min 离心 10 min，收集上
清液，冻干，用 1 mLPBS缓冲液重溶［6］，采用酶联免疫吸
附法测定 P物质。
2. 5 统计学处理 采用 SPSS 17. 0 统计软件对数据处理，
实验结果以 x ± s 表示，采用单因素方差分析，P ＜ 0. 05 认
为有统计学差异。
3 结果
3. 1 对氨水引咳小鼠咳嗽的抑制作用 枇杷花醇提物对氨
水引起小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数的影响，结果见表 1，
念慈庵密炼川贝枇杷膏阳性药物组、枇杷花醇提物高剂量
组、中剂量组、低剂量组均有延长小鼠咳嗽潜伏期和减少
小鼠咳嗽次数的作用，与模型对照组比较有显著差异 (P ＜
0. 01) ，实验结果提示，枇杷花醇提物对氨水引起小鼠咳嗽
有良好的抑制作用。
表 1 对小鼠氨水引咳法的咳嗽次数和咳嗽潜伏期的影响
(x ± s，n =10)
组 别
剂量 /
(g·kg －1)
咳嗽潜
伏期 / s
3 min内咳
嗽次数
对照组 － 18. 25 ±4． 54 27. 58 ±6． 83
念慈庵蜜炼川贝枇杷膏组 5. 4 48. 42 ±11． 77＊＊ 13. 00 ±4． 13＊＊
枇杷花醇提物高剂量组 4 48. 17 ±12． 22＊＊ 11. 25 ±2． 60＊＊
枇杷花醇提物中剂量组 2 35. 50 ±11． 15＊＊ 13. 75 ±4． 83＊＊
枇杷花醇提物低剂量组 1 35. 17 ±10． 14＊＊ 14. 00 ±2． 63＊＊
注:与对照组比较，* P ＜0. 05，＊＊P ＜0. 01。
3. 2 对枸橼酸引咳豚鼠咳嗽的抑制作用 如表 2 所示，与
对照组相比，念慈庵蜜炼川贝枇杷膏阳性药物组、枇杷花
醇提物高剂量组，中剂量组，低剂量组豚鼠咳嗽次数和咳
嗽潜伏期均有显著差异性 (P ＜ 0. 05) ，枇杷花醇提物明显
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抑制枸橼酸引起的豚鼠咳嗽，具有显著的止咳作用。
表 2 对豚鼠枸橼酸引咳法的咳嗽次数考察 (x ± s，n =7)
组 别
剂量 /
(g·kg －1)
5 min内咳嗽
次数 /次
咳嗽潜
伏期 / s
对照组 － 25. 28 ±6. 32 19. 57 ±3. 31
念慈庵蜜炼川贝枇杷膏组 10 15. 43 ±4. 16＊＊ 66. 85 ±8. 51＊＊
枇杷花醇提物高剂量组 3 13. 29 ±4. 46＊＊ 73. 00 ±6. 43＊＊
枇杷花醇提物中剂量组 1. 5 17. 71 ±3. 68＊＊ 65. 00 ±9. 71＊＊
枇杷花醇提物低剂量组 0. 75 18. 71 ±1. 80* 55. 57 ±4. 93＊＊
注:与对照组比较，* P ＜0. 05，＊＊P ＜0. 01。
3. 3 对小鼠酚红排泌的影响 见表 3。与对照组相比，念
慈庵蜜炼川贝枇杷膏阳性药物组和枇杷花醇提物高剂量组、
中剂量组、低剂量组小鼠气管酚红排泌量均显著增加 (P ＜
0. 05) ，提示枇杷花醇提物具有一定的祛痰作用。
表 3 对小鼠酚红排泌的影响 (x ± s，n =10)
组 别 剂量 /(g·kg －1) 酚红 /(μg·mL －1)
对照组 － 0. 34 ± 0. 08
念慈庵蜜炼川贝枇杷膏组 5. 4 0. 48 ± 0. 11＊＊
枇杷花醇提物高剂量组 4 0. 46 ± 0. 08＊＊
枇杷花醇提物中剂量组 2 0. 44 ± 0. 06*
枇杷花醇提物低剂量组 1 0. 41 ± 0. 05*
注:与对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01。
3. 4 对辣椒素刺激豚鼠 C-纤维释放 P 物质的影响 咳嗽
的产生与 C-纤维受体接受刺激有关，C-纤维受体主要对
化学刺激敏感，如辣椒素、枸橼酸等。用小剂量的辣椒素
可以使豚鼠气管内 C-纤维 P 物质释放。表 4 结果显示，
模型组 P 物质量与正常组相比，具有显著性差异 (P ＜
0. 01) ，证明实验造模成功，辣椒素能显著增加气管 P 物
质释放;枇杷花醇提物高剂量组和中剂量组与模型组相比
能显著减少 P 物质生成 (P ＜ 0. 01) ，提示，枇杷花醇提
物对辣椒素致咳豚鼠气管内 C-纤维 P 物质释放有一定抑
制作用。
表 4 对豚鼠肺气管灌洗液 P物质量影响 (x ± s，n =7)
组 别 剂量 /(g·kg －1) P 物质 /(ng·L －1)
正常组 － 84. 59 ± 7． 67
模型组 － 106. 88 ± 13． 43##
枇杷花醇提物高剂量组 3 91. 61 ± 11． 99*
枇杷花醇提物中剂量组 1. 5 94. 87 ± 10． 44*
枇杷花醇提物低剂量组 0. 75 102. 30 ± 10． 11
注:与正常组比较，* P ＜ 0. 05;与模型组比较，##P ＜ 0. 01。
4 讨论
在研究药物镇咳作用时，多采用机械、化学和电刺激
等方法刺激动物的神经和感受器，引发咳嗽。本实验采用
化学刺激法，用氨水和枸橼酸雾化吸入，刺激副交感神经
系统，引发咳嗽，结果证明枇杷花醇提物有明显的镇咳作
用，各剂量组对小鼠氨水和豚鼠枸橼酸引发的咳嗽均具有
明显的拮抗作用，枇杷花醇提物能有效抑制小鼠和豚鼠的
咳嗽次数和延长咳嗽潜伏期，表明其有良好的止咳作用。P
物质是引起咳嗽不良反应发生的重要物质［6-7］，研究发现血
管紧张素Ⅰ转化酶 (ACE)参与 P物质等炎症介质的分解，
当抑制血管紧张素Ⅰ转化酶时，气道中炎症介质积聚，引
发咳嗽［8-10］。本实验采用辣椒素刺激气道模型，观察枇杷
花醇提物对 C-纤维释放 P物质的影响，探讨枇杷花醇提物
的止咳机制，实验结果表明，枇杷花醇提物对 C 纤维-P 物
质释放有一定的抑制作用，抑制 P 物质的释放可能为枇杷
花醇提物止咳作用的机制之一。
痰液是引起咳嗽的一个重要因素，气管、支气管和肺
泡的上皮杯状细胞、黏膜下腺体分泌呼吸道分泌液，润滑
气道膜、保护上皮纤毛的正常生理运动，当呼吸道受炎症
因子侵入时，纤毛运动减慢，黏膜上皮破损，黏蛋白分泌
异常，最终导致黏液分泌增加，积累的黏液变成痰状物质，
刺激呼吸道黏膜引起咳嗽，因此，稀释痰液，改善呼吸道
分泌物的增加，可以发挥祛痰作用［8］。本实验采用气管酚
红排泌法观察枇杷花醇提物的祛痰作用，实验结果表明，
枇杷花醇提物灌胃给药 7d后，能显著增加小鼠气管酚红排
泌量 (P ＜ 0. 05) ，具有明显的祛痰作用，并提示，枇杷花
醇提物通过增加呼吸道液的分泌能力，加快气管纤毛运动
速度，利于呼吸道分泌物咳出，达到促进痰液的排出，减
轻痰液对气管的刺激。
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