全 文 ： 研究简报
文章编号:1008-9926(2006)06-0448-03　　中图分类号:R917　　　文献标识码:A
HPLC法测定狗脊补肾片中原儿茶酸和原儿茶醛的含量
贾恒明① ,刘　敏 ,张　良② ,马红艳③
(①中国人民解放军空军总医院　药学部　北京　100036;②中国人民解放军 93706部队　卫生科　河北　涿州　072757;③中
国人民解放军 93550部队　卫生科　河北　涿州　072757)
摘　要:目的　建立测定狗脊补肾片中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法, 色谱柱为 ZORBAX
SB-C18(250 mm ×4. 6mm, 5μm),流动相为甲醇-0. 1%磷酸溶液(15∶85), 流速为 1. 0m l /m in,检测波长为 280nm, 柱温 40℃。结果
　原儿茶酸和原儿茶醛线性范围分别是:0. 050 88～ 1. 017 6μg, r=0. 999 9;0. 006 432 ～ 0. 128 64μg, r=0. 999 9。平均回收率分
别为 99. 56%、100. 68%, RSD分别为 2. 40%、2. 68%。结论　本法分离好, 快速 、简便 ,可作为该产品的质量控制方法。
关键词:狗脊补肾片;原儿茶酸;原儿茶醛;HPLC
Determ ination of Protocatechuic Ac id and Protocatechualdehyde in GoujiBush-
en Tab let by HPLC
JIA Heng-M ing① , LIUM in, ZHANG Liang② ,MA Hong-Yan③
(①Department of Pharm acy, G eneralHospita l o fA ir Force, Be ijing　100036　Ch ina)
(②Department ofH ea lth, Logistics Department of the 93706 th A rmy, Zhuozhou　072757, Hebei　China)
(③Department ofH ea lth, Logistics Department of the 93550 th A rmy, Zhuozhou　072757, Hebei　China)
ABSTRACT:Ami To estab lish a m ethod fo r determ ination o f pro tocatechuic acid and protoca techua ldehyde in
G ouji Bushen Table.t Methods TheHPLC separa tion w as perfo rmed on ZORBAX SB-C18(250mm ×4. 6mm , 5μm)
co lumn w ith a m ixtureme thano l-0. 1% phosphoric acid solution(15∶85)as the mobile phase, a t a flow rate o f 1. 0
m l /m in. The de tec tion w avelength w as at280 nm , and co lumn temperature at 40℃. ResultsThe linear response o f
pro tocatechu ic acid and protoca techua ldehyde ranged from 0. 050 88 ～ 1. 017 6μg ( r =0. 999 9) and 0. 006 432
～ 0. 128 64μg (r =0. 999 9);the ave rage recovery w as 99. 56% and 100. 68% w ithRSD 2. 40% and 2. 68%
respective ly. Conclusion The method is simp le, accu ra te, and su itable for the dete rm ination of the protocatechuic
acid and protocatechua ldehyde in compound preparations.
KEYWORDS:Gou ji Bushen Tab le t;Protocatechuic acid;Protocatechua ldehyde;HPLC
　　狗脊补肾片是由狗脊 、黑老虎 、金樱子等 6味中
药组成的复方制剂 ,为 6类新药;具有壮腰健肾 、养
血 、祛风湿之功效 ,临床用于治疗肾亏腰痛 、膝软无
力 、神经衰弱 ,小便频数 ,遗精早泄 ,风湿骨痛等 。狗
脊为本处方中主药 ,故选其主要有效成分原儿茶酸
和原儿茶醛作为本制剂质量控制的指标成分 ,对本
品进行质量控制 。该制剂经纯化处理后 ,有效地解
决了分离与检测的困难。
1　仪器与试药
1. 1　仪器　LC-2010AHT高效液相色谱仪 , DAD检
测器 (日本岛津制作所)。
1. 2　试药　原儿茶酸对照品 、原儿茶醛对照品(均
为中国药品生物制品检定所 )。甲醇为色谱纯 ,水
为超纯水 ,其它试剂均为分析纯 。狗脊补肾片 (规
格:0. 3g /粒 , 深圳科兴制药科技有限公司 , 批号
050901、050903、050905)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 　色谱柱:ZORBAX SB-C18(250mm
×4. 6mm , 5μm)分析柱;流动相:甲醇-0. 1%磷酸溶
液(15∶85);检测波长为 280nm;柱温:40℃。
448 　解放军药学学报　第 22卷 第 6期　　HPLC法测定狗脊补肾片中原儿茶酸和原儿茶醛的含量　　　　贾恒明　　
① 作者简介:贾恒明(1968-),男 ,江苏扬州人 ,主管药师。研究方向:药剂学。 Tel:(010)66928504
2. 2溶液的制备　(1)对照品溶液:取分别减压干燥
至恒重的原儿茶酸和原儿茶醛对照品适量 ,精密称
定 ,分别加甲醇制成每 1m l含原儿茶酸 50μg、原儿
茶醛 6μg的溶液 ,即得 。 (2)供试品溶液:取本品 20
片 ,研细 , 混匀 , 取 0. 5g,精密称定 , 置具塞锥形瓶
中 ,加入 0. 1mol L- 1盐酸 3m l, 将粉末完全润湿
10m in后 ,加醋酸乙酯 20m l,超声处理 15m in,滤过 ,
残渣再加醋酸乙酯 20m l,重复处理一次 ,残渣加 5m l
醋酸乙酯洗涤 ,合并滤液和洗液 ,减压回收醋酸乙酯
至干 ,残渣加甲醇适量使溶解 ,转移至 10m l量瓶中 ,
加甲醇至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜 (0. 45μm)滤过 ,
取续滤液 ,即得 。
2. 3　系统适用性试验　按处方量配制缺狗脊药材
的阴性对照样品 ,照本文含量测定项下方法测定 ,比
较了供试品溶液 、原儿茶酸和原儿茶醛对照品溶液 、
阴性对照样品液的色谱图 ,结果样品中原儿茶酸和
原儿茶醛峰与其它组分色谱峰能达到基线分离 ,阴
性对照液中色谱峰对测定无干扰 ,见图 1。
A对照品　B供试品　C阴性对照　1原儿茶酸　2原儿茶醛
图 1　狗脊补肾片的高效液相色谱图
F ig1　HPLC chrom a togram s of Gouji Bushen Tab let
2. 4　线性关系的考察　精密吸取原儿茶酸与原儿
茶醛对照品溶液 (每 1m l含原儿茶酸 50. 88μg、原儿
茶醛 6. 432μg),分别进样 1、5、10、15、20μl,注入液
相色谱仪 ,测定峰面积 ,以进样量 (μg)为横坐标
(X),峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线 ,计算回归
方程。原儿茶酸和原儿茶醛回归方程分别为:
Y=1 525 415. 58X - 157. 876, r =0. 999 9
Y=4 559 362. 93X - 234. 188, r =0. 999 9
分别在 0. 050 88 ～ 1. 017 6μg、 0. 006 432 ～
0. 128 64μg范围内有良好的线性关系。
2. 5　精密度试验　精密吸取原儿茶酸与原儿茶醛对
照品溶液(每 1m l含原儿茶酸 50. 88μg、原儿茶醛6. 432
μg)溶液 10μl,重复进样 6次 ,按本文所述色谱条件测
定 ,峰面积积分值的 RSD分别为 0. 30%、0. 24%。
2. 6　稳定性试验　精密称取供试品 0. 501 5g,按
2. 3项下方法制备供试品溶液 ,精密吸取 10μl,每间
隔一定时间进样测定 ,原儿茶酸与原儿茶醛峰面积
积分值 RSD分别为 0. 33%、2. 15%(n =7)。结果
表明 ,供试品溶液在 24h内基本稳定 。
2. 7　重复性试验　取同一批号 (050901)的狗脊补
肾片 6份 ,按本文含量测定方法平行试验 ,测定原儿
茶酸平均含量为 0. 793 6mg g -1 , RSD为 2. 60%;原
儿茶醛含量 0. 132 0mg g- 1 , RSD为 2. 60%。
2. 8　加样回收率试验　称取已知含量的同一批样
品 (原儿茶酸含量为 0. 793 6mg g- 1原儿茶醛含量
为 0. 132 0mg g- 1)约 0. 25g(6份 ),精密称定 ,分别
精密加入一定量的原儿茶酸和原儿茶醛对照品 ,按
上述方法制备供试液 ,测定 ,计算回收率 ,结果表明
本方法具有良好的回收率 ,结果见表 1。
表 1　原儿茶酸与原儿茶醛加样回收率试验
Tab1　R ecovery of protoca techuic acid and protoca techua ldehyde
被测
成分
样品量
(m g)
加入量
(m g)
测得量
(m g)
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
原儿茶酸 0. 1996 0. 16 0. 3612 101. 00
0. 1991 0. 16 0. 3608 101. 06
0. 2002 0. 16 0. 3642 102. 50
0. 2012 0. 20 0. 3988 98. 80
0. 1986 0. 20 0. 4006 101. 00 100. 93 1. 43
0. 2009 0. 20 0. 3997 99. 40
0. 2001 0. 24 0. 4402 100. 04
0. 1998 0. 24 0. 4425 101. 12
0. 2005 0. 24 0. 4488 103. 46
原儿茶醛 0. 0332 0. 0224 0. 0562 102. 68
0. 0331 0. 0224 0. 0558 101. 34
0. 0333 0. 0224 0. 0561 101. 79
0. 0336 0. 0280 0. 0602 95. 00
0. 0330 0. 0280 0. 0612 100. 71 99. 80 2. 41
0. 0334 0. 0280 0. 0608 97. 86
0. 0333 0. 0336 0. 0666 99. 11
0. 0332 0. 0336 0. 0672 101. 19
0. 0333 0. 0336 0. 0664 98. 51
2. 9　样品测定　分别精密吸取对照品溶液和供试
液各 10μl,依上述色谱条件测定 ,结果见表 2。
表 2　样品中原儿茶酸和原儿茶醛含量测定结果( n =4)
Tab2　Resul ts o f samp le determ ination ( n =4)
样品 原儿茶酸含量(m g /片)
R SD
(%)
原儿茶醛含量
(m g /片)
RSD
(%)
050901 0. 2381 1. 04 0. 0396 0. 88
050903 0. 2306 0. 95 0. 0388 1. 26
050905 0. 2345 0. 85 0. 0372 0. 90
449 　解放军药学学报　 2006年 12月　第 22卷　第 6期　　　Pharm J Ch in PLA　Vol 22　 No6　Dec 2006　　　　　
3　讨论
3. 1　流动相的选择 　试验比较了甲醇-水 , 乙睛-
水 ,甲醇-磷酸 ,乙腈-磷酸等系统 ,最后确定了甲醇-
0. 1%磷酸溶液(15∶85)作为流动相 ,原儿茶酸和原
儿茶醛得到了良好的分离 。
3. 2　检测波长的确定　用二极管阵列检测器分析
比较了原儿茶酸与原儿茶醛对照品色谱峰和样品中
所测成分相应色谱峰的紫外吸收光谱 ,结果紫外光
谱基本一致。原儿茶酸在 260、285nm 处有最大吸
收峰 ,原儿茶醛在 230、280、315nm 处有最大吸收
峰 ,因原儿茶醛含量相对较低 ,且在 260nm处样品
干扰峰相对较多 ,故确定检测波长为 280nm。
3. 3　提取方法的确定　测定狗脊补肾片中原儿茶
酸与原儿茶醛的含量过程中 ,曾采用甲醇 、乙醇 、乙
酸乙酯等进行比较 ,以乙酸乙酯效果最佳 ,并进行了
提取次数的比较 ,用本文方法 ,可以提取完全 。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[ S] . 北京:化
学工业出版社 , 2000. 629
[ 2] 　许重远 ,陈振德 ,陈志良 ,等.金毛狗脊的化学成分研究 [ J] .解
放军药学学报 , 2000, 16(2):65
[ 3] 　张春玲 ,王喆星.狗脊化学成分的分离与鉴定 [ J] .中国药物化
学杂志 , 2001, 11(5):279
(收稿日期:2005-08-22;修回日期:2006-09-30)
(本文编辑　狄亚敏)
文章编号:1008-9926(2006)06-0450-02　　中图分类号:R917　　文献标识码:A
HPLC法测定樟脑水合氯醛酊中樟脑的含量
李　莉① ,毕雪艳 ,张钢平 ,付乃华
(邯郸市药品检验所　河北　邯郸　056001)
摘　要:目的　建立 HPLC法测定樟脑水合氯醛酊中樟脑的含量。方法　选用 C18柱(250mm ×4. 6mm),甲醇-水(70∶30)为流
动相 , 流速:1. 0m l /m in, 检测波长:288nm , 柱温:室温 , 进样量:20μl。结果　樟脑在 0. 820 8 ～ 1. 846 8m g m l- 1浓度范围内与
峰面积呈良好的线性关系。回归方程 Y=3. 216×102 +2. 596×105X, r =0. 999 9, ( n =6)。平均回收率为 99. 61%( n =9)。
结论　本法定量准确 、操作简便。
关键词:HPLC法;樟脑水合氯醛酊;樟脑;含量测定
Determ ination ofCamphor in Camphor and ChloralHydrate Tincture by HPLC
LI Li, B IXue-Yan, ZHANG G ang-Ping, FU Na i-Hua
(H andan Institu te forD rug Contro l, Handan　056001, He ibei　China)
ABSTRACT:Ami To estab lish an HPLC me thod for the de te rm ination of Campho r in Campho r and Chlo ra lHy-
dra te T incture.M othodsU sing C18 co lumn(250mm ×4. 6mm), me thol-water(70∶30) as themobile phase at a flow
ra te o f 1. 0m l /m in;the de tec tion w aveleng th w as 288nm co lumn at room tempe ra tu re, in jec tion volumn 20μ.l Re-
sults The calibrate curve w as linear in the concentration range o f 0. 820 8 ～ 1. 846 8mg m l-1 and the linear equa-
tion w as Y =3. 216×102 +2. 596×105X , r =0. 999 9, ( n =6). The mean recoveryw as 99. 61%(n =9). Con-
clusion Th is method is accu rate and simple.
KEYWORDS:HPLC;Camphor and Ch lo ralHydra te;Camphor;De term ina tion
　　樟脑水合氯醛酊是镇静止痛药 ,由樟脑 、水合氯
醛 、丁香油等成分组成 ,收载于《国家药品标准》化
学药品地方标准上升国家标准第七册 。其樟脑含量
测定采用重量法 [ 1] ,日常检验中 ,发现其操作繁琐 、
费时 、误差较大 。
为更好控制药品质量 ,确保产品用药安全 ,本文
采用 HPLC [ 2]对其樟脑含量测定进行了研究 ,取得
了满意的结果 。
450 　解放军药学学报　第 22卷 第 6期　　HPLC法测定樟脑水合氯醛酊中樟脑的含量　　　　　　　　　李　莉　　
① 作者简介:李　莉(1974-),女 ,河北邱县人 ,双学士 ,主管药师。研究方向:药物分析。 Tel:(0310)3111576-8005