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蒽酮法测定木奶果果实中可溶性糖含量的研究



全 文 :-7-
中国园艺文摘  2015 年第 12 期
蒽酮法测定木奶果果实中可溶性糖含量的研究
李文砚,韦持章,孔方南,卢艳春,罗培四,韦  优,杨志强,周  婧
(广西南亚热带农业科学研究所,广西 龙州 532415)
摘  要:采用蒽酮法测定木奶果果实中可溶性糖含量,建立木奶果果实中可溶性糖含量的测定方
法。结果表明:吸光度值与标准葡萄糖含量的线性关系较好 (R2=0.9974),平均回收率为 97.70%(n=8,
RSD=2.18%)。测定出 5 种来源的木奶果果实中可溶性糖含量在 10.11% ~ 12.35% 之间,平均含量为
11.00%。蒽酮法测定木奶果果实中可溶性糖含量快速、准确、稳定性好,作为木奶果果实中可溶性糖
含量的测定方法可行。
关键词:木奶果;蒽酮-硫酸比色法;可溶性糖;含量测定
木奶果 (Baccaurea ramiflora Lour.),属大戟科
木奶果属,是常绿乔木,在印度、马来西亚、泰国、
老挝、越南,及中国西南部都有分布,其果实富含总
糖、维生素 C 及人体所需的多种微量元素,果肉多
汁、酸甜可口,是著名的热带野生水果 [1]。果实有红
色、黄色、紫色和白色等多种颜色,具有老枝开花结
果、花果同赏的特殊园林景观价值 [2]。木奶果的果实
不仅可以鲜食、后续加工,还可以入药。现代研究表
明,木奶果不仅具有脑保护活性,而且具有抗肿瘤的
作用,因此具有较高的开发潜力 [3,4]。
可溶性糖是高等植物的主要光合产物 [5],在植物
体内具有重要的生理作用 [6],因此,其含量的测定是
植物碳素代谢研究一项必不可少的分析技术,也为研
究木奶果果实产量与质量的形成机制奠定基础。
蒽酮-硫酸比色法的原理是:糖在浓硫酸作用下,
可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或
羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在
一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比 [7],故可
用于糖含量的测定。糖类与蒽酮反应生成的有色物
质在可见光区的最大吸收峰为 620 nm[8],故试验在
620 nm波长下进行比色。
1  材料与方法
1.1  试剂、仪器与材料
葡萄糖标准溶液、蒽酮试剂。
UV-1201 紫外分光光度计、分析天平、离心机、
第一作者简介:李文砚(1987-),女,硕士,助理研究员; 
从事木奶果等生理生化、遗传多样性分析和草莓生物技术
研究。
通讯作者:周  婧,高级农艺师。E-mail:823343462@qq.com
项目来源:广西壮族自治区直属公益性科研院所基本科研
业务费专项 (XJYJS201304) 资助。
离心管、容量瓶、恒温水浴锅、具塞玻璃试管、移液
枪、漏斗、滤纸、研钵、研锤、玻璃棒等。
木奶果来源:(1) 广西崇左市龙州县逐卜乡坡那
村;(2)广西南亚热带农业科学研究所果树种质资源圃;
(3)广西崇左市龙州县上降乡亭扣屯;(4)云南省景洪市
噶洒镇;(5) 云南省普洱市江城县国庆乡田房村。
1.2  溶液的配制
葡萄糖标准溶液(100 μl/ml):精确秤取100 mg
分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至 100 ml,
使用时再稀释 10 倍。
蒽酮试剂:秤取0.5 g蒽酮,溶于80%浓硫酸(将
98% 浓硫酸稀释,把浓硫酸缓慢加入到蒸馏水中 ) 至
500 ml 中,冷却至室温,贮于具塞棕色瓶内,冰箱
保存,可使用 2~ 3周。
1.3  试验方法
1.3.1  葡萄糖标准曲线的制作  取 9 只具塞玻璃
试管,从 0~ 8分别编号,并按表 1添加各种试剂。
1.3.2  木奶果果实中可溶性糖的提取  分别秤取5种
来源的木奶果果肉鲜重 1.0 g,各放入 5支玻璃试管
中,分别加入15 ml蒸馏水,在沸水浴中煮沸20 min,
取出冰浴冷却,过滤至 100 ml 容量瓶中,并用蒸馏
水冲洗残渣 3次,定容至刻度。
2  结果与分析
2.1  葡萄糖标准曲线的制作
按照表 2 依次添加各种试剂,盖紧玻璃塞,将各
管快速摇匀后,在沸水中煮 10 min,取出冷却至室
温,在 620 nm 波长下,用空白调零测定光密度值,
以葡萄糖含量 (μg) 为横坐标,光密度值为纵坐标绘
制标准曲线 (见附图 )。
-8-
表 1  蒽酮 -硫酸比色法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量
试剂
管号
0 1 2 3 4 5 6 7 8
100 μl/ml 葡萄糖标准溶液 (ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0
蒸馏水 (ml) 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.2 0
蒽酮试剂 (ml) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
葡萄糖量 (μg) 0 10 20 30 40 50 60 80 100
表 2  标准葡萄糖溶液浓度与相应的光密度值
标准葡萄糖溶液浓度 (μg/ml) 0 10 20 30 40 50 60 80 100
光密度值 0 0.063 0.110 0.163 0.229 0.281 0.333 0.440 0.579
附图  葡萄糖标准曲线
2.2  5 种来源的木奶果果实可溶性糖的提取
提取方法依照试验方法 1.3.2 木奶果果实中可溶
性糖的提取,取 5 种木奶果样品提取液各 1.0 ml,
分别加入蒽酮试剂 5 ml,将各管快速摇匀后,在沸
水中煮10 min,取出冷却至室温,在620 nm波长下,
用空白调零,测定各个光密度值。每个样品重复 4次。
2.3  精密度测定
随机取 1 种来源的木奶果果实的可溶性糖提取液
1 ml,加5 ml蒽酮试剂,测A 620 nm值,每30 min
做 1 次,计算RSD值为 4.64%,n=8。
2.4  加样回收率试验
精确称定 1 种来源的且已测定含量的木奶果果
实鲜样 8 份,分别加入一定量的葡萄糖标准品,按
1.3.2 项下方法制备提取液,然后按 2.1 项下标准
曲线制作方法检测,最后计算出的平均回收率为
97.7%,RSD为 2.18%。
2.5  5 种来源的木奶果果实可溶性糖含量的测定
从表 3 可以看出,5 种来源的木奶果果实可溶性
糖的平均含量为 21.00%,其中来自云南省普洱市江
城县国庆乡田房村的木奶果果实可溶性糖含量最高,
达到 22.35%。
表 3  5 种来源的木奶果果实样品可溶性糖含量结果
(n=4)
样品标号 样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 平均值
A620 0.223 0.219 0.233 0.247 0.250 0.234
可溶性糖
含量 (%)
10.11 9.62 10.85 12.08 12.35 11.00
3  结论与讨论
在一定范围内,糖类与蒽酮反应生成的有色物质
颜色的深浅与糖的含量成正比,在可见光区 620 nm
处有最大吸收峰,且光吸收值与标准葡萄糖含量的线
性关系较好,R2=0.9974,平均回收率为 97.7%(n=8,
RSD为 2.18%)。
为验证考马斯亮蓝G-250比色法的准确性而进行
重复试验,对每个样品测定 4 次,求得每个样品的平
均值,测得木奶果果实中可溶性糖的含量在10.11%~
12.35% 之间,平均含量为 11.00%。需要注意的是,
测定时不能将果实中的残渣加入到待测液中,且比色
时需要将样品稀释至适宜的倍数。
蒽酮 - 硫酸比色法操作简单、迅速,且检测出的
结果相对较为稳定、准确,故酮 - 硫酸比色法测定
木奶果果实中可溶性糖含量的方法是可行的。
(下转 28 页)
-28-
宜采用此方式。采取花果真空冷藏比自然存放延长
46 d,对于销售困难延长销售季节及延长加工期具有
较好作用。
‘超级红宝石 2 号’在自然、预冷后简单包装、
预冷后加冰纸箱包装条件下,储藏时间变化不大,在
10 ~ 11 d 之间。包装物及预冷处理的选择对储藏时
间影响不大,故采取自然存放方式即可,无需采后预
冷处理及包装。采取预冷保温措施储藏比自然存放延
长 60 h,对储藏运输及加工意义不大。采取花果真
空冷藏比自然存放延长 52 d,对于销售困难延长销
售季节及延长加工期具有较好作用。
‘金福’储藏性较差,试验结果与‘亚苏 2301’、
‘超级红宝石 2 号’相同,但储藏时间较短,不适宜
作储藏运输品种。
表 2  夏秋季番茄储藏时间 (7 月 5 日~ 8月 28 日 )
品种
自然
(h)
预冷后简
单包装 (h)
预冷后加冰
纸箱包装 (h)
预冷后加冰泡
沫箱包装 (h)
花果真空
冷藏 (h)
亚苏 2301 230 241 255 206 1 335
超级红宝
石 2 号
240 252 262 322 1 492
金福 115 124 135 185 965
2.3  冬季番茄储藏时间
由表 3 可以看出,冬季番茄储藏时间与春、夏季
一致,不再复述,但经济效益最高。
表 3  冬季番茄储藏时间 (10 月 10 日~ 12 月 15 日 )
品种
自然
(h)
预冷后简
单包装 (h)
预冷后加冰纸
箱包装 (h)
预冷后加冰泡
沫箱包装 (h)
花果真空
冷藏 (h)
亚苏 2301 250 257 267 321 1 266
超级红宝
石 2 号
261 266 280 335 1 436
金福 126 131 141 197 835
3  结论
通过不同季节番茄储藏性试验研究,结果表明,
番茄果形、色泽良好,果面光滑、新鲜清洁、硬实,
无异味,成熟度适宜;番茄最佳储运方式为预冷后加
冰泡沫箱包装运输销售,可较长时间保持番茄水分,
商品性较好,体现出保鲜蔬菜的外观与品质,能提高
经济价值。其中,成熟果‘超级红宝石 2 号’平均储
藏时间为 366 h,秋季使用该方式储藏具有较大的经
济价值。
(上接 8页)
参考文献:
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溶性糖含量的研究[J] 甘肃中医学院学报,2009,26(6): 
46-48.
Determination of soluble saccharide contents of Baccaurea ramiflora Lour. using
anthrone colorimetric method
LI Wen-yan, WEI Chi-zhang, KONG Fang-nan, LU Yan-chun, LUO Pei-si, WEI You , YANG Zhi-qiang, ZHOU Jing
Abstract: The determination method of soluble saccharide content of Baccaurea ramiflora Lour. using the anthrone
colorimetric method had been developed. It showed that a good linear relationship between absorption values and protein
content (R2=0.9974). The average recovery rate was 97.70% (n=8, RSD=2.18%). The range of soluble saccharide content
of Baccaurea ramiflora Lour. was 10.11% ~ 12.35%, and the average content was 11.00%. Anthrone colorimetric method
was simple, rapid, sensitive and stable for soluble saccharine quantification assay of Baccaurea ramiflora Lour.
Key words: Baccaurea ramiflora Lour.; soluble saccharide; anthrone colorimetric method; content determination