全 文 ：收稿日期：2012-03-16
*基金项目：吉林省发改委项目（No.2009002）；吉林省教育厅项目[吉教科合字（2012）第225号]
[通信作者] 刘春明，E-mail：chunmingLiu2000@yahoo.com.cn，Tel：0431-86168777
我国药典中记载白鲜皮为芸香科白鲜属植物白
鲜（Dictamnusdasycarpus Turcz.）和狭叶白鲜（D.an-
gus tifoliusG，Doc）的干燥根皮，现代药理研究发现
白鲜皮提取物具有抑菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤等活
性[1-2]。作者利用高速逆流色谱技术分离纯化白鲜皮
中梣酮单体成分，并利用二甲苯致小鼠耳廓肿胀动
文章编号： 1005-8982（2012）36-0021-05
·论著·
白鲜皮中抗炎有效组分的分离及抗炎活性研究*
时东方 1，宋 策 2，郑梅竹 1，赵立春 3，张红晶 4，刘春明 1
（1.长春师范学院，吉林 长春 130032；2.广西中医学院附属瑞康医院，广西 南宁 530011；3.河北大学
药学院，河北 保定 071002；4.长春迪瑞医疗科技有限公司，吉林 长春 130012）
摘要：目的 对抗炎组分进行提取并对梣酮进行质谱鉴定；对白鲜皮粗提物及梣酮单体进行抗炎效果检
测。方法 采用电喷雾质谱技术对所分离梣酮进行鉴定；利用小鼠耳廓肿胀及小鼠腹腔毛细血管渗透性实验确
定待试物抗炎活性。结果 提出白鲜皮中梣酮的裂解规律；白鲜皮醇提物及梣酮单体各剂量组可显著抑制由二
甲苯引起的小鼠耳廓肿胀，差异显著（P <0.05)，但在抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增高方面，梣酮中、低
剂量组效果明显。结论 建立白鲜皮中梣酮快速分析鉴定方法，白鲜皮醇提物及梣酮单体具有很好的抗炎作
用，但不同抗炎模型对抗炎效果表现具有差异性。
关键词：梣酮；电喷雾质谱；抗炎
中图分类号：R282.5 文献标识码：A
Study on the isolation and anti-inflammatory effect of anti-
inflammatory ingredients extracted from cortex dictamni
SHI Dong-fang1, SONG Ce2, ZHENG Mei-zhu1, ZHAO Li-chun3,
ZHANG Hong-jing4, LIU Chun-ming1
(1.Changchun Normal University, Changchun, Jilin 130032, P.R. China; 2.The Affiliated Ruikang
Hospital of Guangxi Traditional Chinese Medical College, Nanning, Guangxi 530011, P.R. China;
3.College of Pharmacy, Hebei University, Baoding, Hebei 071002, P.R. China; 4.Changchun Dirui
Medical Technology Co, LTD, Changchun, Jilin 130000, P.R. China)
Abstract:【Objective】To detect the anti-inflammatory effects of ethanol extracts and fraxinellone extracted and
isolated from Cortex Dictamni. 【Methods】To identify fraxinellone extracted and isolated from Cortex Dictamni by
electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS), anti-inflammatory effects of ethanol extracts and fraxinellone
were investigated by xylene-induced aruical swelling in mice and the abdominal capillary permeability in mice.
【Results】In this paper EI Mass Spectra of fraxinellone were measured, the results showed that ethanol extracts and
fraxinellone were significantly (P <0.05) suppress the mouse auricle which caused by the xylene swelling. The medi－
um-dosage and low dose group were increased significantly in abdominal capillary permeability in mice compared
with control group.【Conclusions】A method using electrospray ionization tandem mass spectrometry(ESI-MSn) was
established for analysis and identification of fraxinellone from Cortex Dictamni. The results showed that ethanol ex－
tracts and fraxinellone showed differences anti-inflammatory effect in variety of animal models of anti-inflammatory.
Key words: fraxinellone; ESI-MS; anti-inflammatory
第22卷第36期 中国现代医学杂志 Vol. 22 No.36
2012年12月 China Journal of Modern Medicine Dec. 2012
21· ·
物模型及冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高实
验，对不同浓度白鲜皮粗提物、梣酮单体成分抗炎活
性进行研究，以探讨白鲜皮粗提物、梣酮单体的抗炎
药理作用，为开发以白鲜皮为原材料新药提供依据。
1 材料
1.1 药物与试剂
白鲜皮，购于北京同仁堂药店（长春分店）；梣酮
标准品（中国药品生物制品检定所）；正己烷、乙酸乙
酯、无水乙醇及95%乙醇（分析纯，北京化工厂）；色
谱纯甲醇（美国 Fisher 公司）；水为超纯水（18.2
ΩPa）；0.45μm 滤膜（安捷伦公司）；二甲苯（分析
纯，北京化工厂）；冰醋酸（分析纯，北京化工厂）；生
理盐水（浙江济民制药有限公司）；吲哚美辛肠溶片
（山西云鹏制药有限公司）。
1.2 实验仪器
电喷雾离子阱串联质谱（LCQ Fleet，Thermo
Fisher，美国）；HPCPC-80 型高速逆流色谱仪（日
本），UV 检测器；Waters 2695 型高效液相色谱仪
（美国Waters公司）；S180H超声波提取仪（德国El-
ma公司）；Sanorius BSl10S分析天平（北京赛多利斯
有限公司）；HS-Z11-Ⅱ电热蒸馏水器（上海跃进医
疗器械厂）；纯水器（法国 Milli Q公司）；752-紫外
光栅分光光度计（上海精科实业有限公司）。
1.3 动物
昆明种雄性小鼠，18~22g。来自吉林大学实验
动物中心，质量合格证号：SCXK-（吉）2008-0005。
1.4 方法
1.4.1 受试药物的制备 ①白鲜皮粗提物的制备：
精密称取50g经粉碎后过40目筛的白鲜皮药材粉
末，1000mL 85%乙醇溶液浸泡，温度80℃下索氏
提取器回流提取2次，提取时间为6h，旋转蒸发仪
合并滤液至干，真空干燥器中保存。②梣酮单体的
制备：高速逆流色谱分离技术是目前较为理想的天
然药物有效成分的分离手段，它不同于重结晶、柱层
析及高效液相色谱分离方法，短时间内可实现目标
化合物的高效分离和制备，解决了步骤繁琐且操作
周期较长的问题[3]，高速逆流色谱分离技术采用液相
载体作固定相，这就克服了固相载体带来的样品不
可逆吸附、损失、污染等缺点[4]，另外高速逆流色谱技
术对待测样品预处理的要求不高，可直接进行粗提
物的进样分析，经研究发现，高速逆流色谱技术特别
适用于分离一些极性较大、热敏性的化合物，分离得
到的单体化合物具有纯度高，回收率好，可以实现连
续分离等优点，决定了其在天然产物的分离和分析
领域将得到较为广泛的应用。高速逆流色谱
（HPCPC）溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-
水（1∶1∶1∶1，V/V），按比例配制，于分液漏斗振
荡，体系分相平衡后分离出上相（固定相）和下相（流
动相），超声脱气50min后备用。固定相以5mL/min
流速泵入高速逆流色谱仪色谱柱中，待充满后开启
主机使转速逐渐增加至1200r/min，待泵入流动相
且流出口有明显的分层之后，取白鲜皮粗提物用流
动相和固定相溶液各 1 mL 完全溶解，过滤膜
（0.45μm）后进样，柱后流出物以紫外检测器检测，
检测波长为228nm[5]；Waters 2695型高效液相色谱
仪采用C18色谱柱（150×4.6mm），检测波长为228
nm，柱温25℃，样品进样量为10μL，实验中采用等
度洗脱，流动相为甲醇 - 水（58：42，V/V），流速 0.8
mL/ in。经HPCPC分离并HPLC检测，分离组分纯
度可达98%。③电喷雾质谱检测：应用电喷雾质谱
负离子模式对分离出的成分进行检测，质量范围为
50~2000（质量数经过校正），检测条件为负离子扫
描，流动注射泵进样，喷雾电压4.5kV，金属加热毛
细管温度350℃，毛细管电压34.98V，鞘气为N2，碰
撞气为He。
1.5 抗炎活性检测
1.5.1 白鲜皮粗提物及梣酮小鼠耳廓肿胀实验 取
小鼠50只，随机分为五组（正常对照组、阳性对照组
及三个测试组）。分别如表2、3所示不同梯度剂量灌
胃给药，每日1次，连续3d，末次药后1h，各鼠左耳
前后两面涂 0.1 mL的二甲苯（100%），右耳作为自
身对照，4h后颈椎脱臼处死动物，用直径9mm打
孔器，在各鼠左右耳相同部位打下圆耳片，用电子分
析天平精密称重，左右耳片重量差为肿胀程度，计算
肿胀程度及肿胀抑制率。肿胀度为右耳重和左耳重
之差，肿胀抑制率（%）=（对照组平均肿胀度—给药
组平均肿胀度）/对照组平均肿胀度×100%[6]。
1.5.2 白鲜皮粗提物及梣酮小鼠毛细血管渗透性试
验 取雄性小鼠50只，随机分为五组（同上），每组
10只，按表4、5所示剂量对受试小鼠灌胃给药，每
日1次，连续7d。于末次给药后30min，小鼠依次尾
静脉注射0.5% 0.1mL/10g的伊文思蓝生理盐水溶
液，随即依次腹腔注射0.6%醋酸（0.2mL/只），20
min后脱臼处死，腹腔注射生理盐水6mL，轻按小鼠
腹部，抽取腹腔液3mL，3000r/min离心10min，取
中国现代医学杂志 第22卷
22· ·
第36期 时东方，等：白鲜皮中抗炎有效组分的分离及抗炎活性研究
表1 化合物A的质谱数据上清液置于 752-紫外光栅分光光度计，590nm处
测OD值[7]。
1.6 统计学处理
实验数据采用SPSS软件分析，实验结果均用
均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方
差分析，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 梣酮单体成分的分离及纯度检测
接收HPCPC色谱流速1.5mL/min，转速1000
r/min下的色谱峰中流份A，减压浓缩后用甲醇溶
解，过0.45μm微孔滤膜，利用HPLC检测并与梣酮
标准品比对，粗提物经HPCPC分离得到单体化合
物A为梣酮，用峰面积归一法测得峰A接收液纯度
为98%，见图1。
2.2 负离子模式下电喷雾质谱的检测结果
化合物A电喷雾多级串联质谱数据如下，见表1。
对m/z 233离子进行多级串联研究，质谱谱图
如图2所示。在负离子模式下，化合物的分子离子峰
为[M+H]+（m/z233），由此可确定化合物A的分子量
为232，通过与文献对比，与梣酮的分子量一致。在
多级串联质谱中，形成4个碎片离子，分别为m/z
113，159，187，215。
m/z233离子丢失一个质量数为28的羰基和质
量数为18的水分子生成m/z187离子，m/z233离子
丢失一个质量数为18的中性碎片（水分子）生成
m/z215离子，m/z187离子丢失一个质量数为 28 的
羰基生成m/z159离子，m/z159离子丢失一个质量数
为28的羰基生成m/z131离子，根据HPLC的保留
时间与标准品的对比及质谱数据分析结果，可以进
一步确定该化合物为梣酮（3-（3- 呋喃基）-3a，
4，5，6-四氢-3a，7-二甲基苯酞）。
2.3 白鲜皮粗提物及梣酮对二甲苯致小鼠耳肿胀
的影响
化合物 分子量 [M+Na]+（m/z）b [M+H]+（m/z）c MSn（m/z）d
m/z233 232 255 233
图1 峰A与梣酮标准品HPLC比较
图2 化合物A的ESI-MS图
100
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相
对
丰
度
187.02
216.17
233.06
187.02
233.06
131.17
158.06
216.17
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80
70
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50
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20
10
0
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相
对
丰
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100
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相
对
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100
90
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50
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20
10
0
100 200 300
相
对
丰
度
187.62
216.17
233.05
187.62
233.05
187.03
131.67
168.06
216.17
23· ·
与空白对照组比较，80%乙醇提取物能明显减
小鼠耳廓肿胀程度，作用与阳性对照组（吲哚美辛片
组）相似，说明白鲜皮80%乙醇提取物高、中、低三
个剂量组对由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀有明显的
抑制作用，且差异显著（P<0.05），结果见表2。
表2 白鲜皮乙醇提取物对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的影响
与空白对照组比较，各给药组的小鼠耳肿胀的
程度明显低于空白对照组，且差异显著（P<0.01），
作用于吲哚美辛片对照组相似，提示梣酮各剂量组
抗炎作用良好，特别是高、中剂量组作用明显，作用
结果见表3。
表3 梣酮对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的影响
2.4 白鲜皮粗提物及梣酮对小鼠毛细血管渗透性
的影响
为进一步验证白鲜皮醇提物的抗炎作用，采用
小鼠腹腔毛细血管渗透性实验对不同受试物的抗炎
效果进行对比。通过观察白鲜皮不同浓度醇提物及
梣酮单体对醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增加的
影响，得出以下结果，见表4。
表4 白鲜皮提取物对醋酸致小鼠腹腔
毛细血管渗透性增加的影响
初步研究结果表明，与对照组相比，白鲜皮醇提
物中剂量组可抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管渗透
性的增高，但是作用效果与给药剂量未见明显的量
效关系。
梣酮对小鼠毛细血管渗透性的影响效果见表5。
表5 梣酮对醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增加的影响
从表5结果中可以看出，与对照组相比，梣酮中
低剂量组可以明显看到可抑制醋酸所致小鼠腹腔毛
细血管渗透性的增高，但是在高剂量组其效果不是
很明显，且出现了剂量与通透性结果负相关。
3 讨论
实验结果说明可以通过电喷雾多级串联技术可
以获得梣酮分子量信息，另外可以通过中性碎片的
丢失，推断化合物的归属及结构，为梣酮进一步结构
的鉴定提供依据。炎症是机体活组织受损伤因子刺
激所发生的一种防御反应，但当炎症反应过于激烈
时则对机体具有很大危害性。炎症可分为急性和慢
性两种，急性炎症表现为炎症部位红肿、炎性渗出
等；慢性炎症以巨噬细胞、淋巴细胞浸润和小血管、
结缔组织增生为主要特征[8]。笔者分别通过二甲苯
致小鼠耳廓肿胀急性实验和小鼠毛细血管渗透性实
验两种模型来考察白鲜皮乙醇提取物及梣酮单体的
抗炎作用。从急性炎症模型实验结果看，白鲜皮醇提
物及梣酮单体能够显著降低二甲苯致小鼠耳廓肿胀
程度，说明其具有明显的抗炎作用，但是在抑制醋酸
致小鼠腹腔毛细血管渗透性增高效果方面，梣酮中
低剂量组表现有抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管渗
透性的增高的趋势，但是高剂量组出现趋势不是很
明显，其具体量效关系还需进一步验证。
参 考 文 献：
[1] 王 蓉,徐 强,徐丽华.白鲜皮的免疫药理研究[J].中国药科大学
学报,1992,23(4):234.
[1] WANG R, XU Q, XU LH. Immunopharmacological studies of
Cortex Dictamni [J]. Journal of China Pharmaceutical University,
1992, 23(4): 234. Chinese
[2] 李 岩,曲绍春,刘 杰,等.白鲜皮粗多糖升白细胞作用的初步研
究[J].长春医学院学报,1995,11(9):48.
[2] LI Y, QU SC, LIU J, et al. Primary study on Cortex dictamni
coarse polysaccharide of rise leucocyte effect [J]. Academic
组别 剂量/（mg/kg）动物数/n OD值（x±s）
对照组 — 10 0.11±0.078
吲哚美辛片 10 10 0.08±0.053
梣酮 4.6 10 0.11± 052
梣酮 2.3 10 0.07± 67
梣酮 1.2 10 0.08± 100
组别 剂量/（mg/kg）动物数/n
耳肿胀程度/
[mg，（x±s）]
肿胀抑制率
/%
对照组 — 10 6.10±2.42
吲哚美辛片 10 10 3.70±0.82 39.34
白鲜皮提取物 14.04 10 3.40±0.70 44.26
白鲜皮提取物 7.02 10 2.90±0.99 52.46
白鲜皮提取物 3.51 10 3.40±1.26 44.26
组别 剂量/（mg/kg）动物数/n
耳肿胀程度/
[mg，（x±s）]
肿胀抑制
率/%
对照组 — 10 5.10± .79
吲哚美辛片 10 10 2.70±1. 6 47.06
梣酮 4.6 10 2.90±1 1 43.14
梣酮 2.3 10 2.80±1 03 45.10
梣酮 1.2 10 4.40±1 51 13.73
组别 剂量/（mg/kg）动物数/n OD值（x±s）
对照组 — 10 0.11±0.043
吲哚美辛片 10 10 0.08±0.025
白鲜皮提取物 14.04 10 0.11±0.068
白鲜皮提取物 7.02 10 0.10±0.030
白鲜皮提取物 3.51 10 0.11±0.057
中国现代医学杂志 第22卷
24· ·
第36期 时东方，等：白鲜皮中抗炎有效组分的分离及抗炎活性研究
Periodical of Changchun College of Traditional Chinese Medicine,
1995, 11(9): 48. Chinese
[3] ITO Y, CONWAY WD. High speed countercurrent chromatogra-
phy[M]. New York: John Wiley, 1996.
[4] 戴德舜,王义明,罗国安.高速逆流色谱研究进展[J].分析化学,
2001,29(5):586-591.
[4] DAI DS, WANG YM, LUO GA. Recent development in
high-speed countercurrent chromatography [J]. Chinese Journal of
Analytieal Chemistry, 2001, 29(5): 586-591. Chinese
[5] 张红晶,王 琦,时东方,等.高速逆流色谱法分离纯化白鲜皮中梣
酮初步研究[J].浙江林业科技,2010,30(6):52-55.
[5] ZHANG HJ, WANG Q, SHI DF, et al. Preliminary study on
isolation and purification of fraxinellone from dictamnus
dasycarpus by high-speed countercurrent chromatography [J].
Journal of Zhejiang Forestry Science and Technology, 2010, 30
(6): 52-55. Chinese
[6] 徐淑云.药理实验方法学(第三版)[M].北京:人民卫生出版社,1982:
911.
[6] XU SY. Experimental methodology of pharmacology [M]. Beijing:
Peopl s Medical Publishing House, 1982, 911. Chinese
[7] 杨万兴,吕金胜,封永勇,等.天麻醇提液对动物急性炎症的影响[J].
中国药业,2002,11(12):26-27.
[7] YANG WX, LV JS, FENG YY, et al. The influence on the
anti-inflammatory effect of gastrodia elata alcohol [J]. China
Pharmaceuticals, 2002, 11(12): 26-27. Chinese
25· ·