全 文 ：动物医学进展 , 2003, 24( 3): 98-99
Prog ress in Ve terinar y M edicine
封闭群东方田鼠染色体制备中刀豆素的应用技术研究
俞远京 ,苏志杰 ,丁志刚
(中南大学湘雅医学院实验动物学部 ,湖南长沙 410078)
中图分类号: Q343　　　　　　　　　　　　　　　文献标识码: A 文章编号: 1007-5038( 2003) 03-0098-02
摘　要: 在按常规技术制备东方田鼠染色体前
24 h,腹腔注射 20μg /g体重的刀豆素 ,并记数
随机显微视野中 ,分裂相的多少 ,发现用刀豆素
处理的东方田鼠骨髓细胞中 ,分裂相大大多于
未经刀豆素处理的东方田鼠。按此剂量处理的
东方田鼠 ,染色体形态与未经刀豆素处理的东
方田鼠没有明显的差别。因此 ,刀豆素的处理便
于对东方田鼠染色体的分析。
关键词:东方田鼠 ;刀豆素 ;染色体
东方田鼠是我国农作区的害鼠 ,许多学者在对东方
田鼠的生态学等方面进行了研究 [1 ] ;又因为这种动物具
有自然疫源性疾病特征 ,国外学者主要集中注意这种动
物在传播人兽共患病方面的意义 [2 ]。东方田鼠除了具有
以上特征外 ,早在 50年代我国学者就观察到这种动物
具有对日本血吸虫的天然的抗感染性 [ 3] ,近年进一步证
实了东方田鼠对日本血吸虫有的天然抗性 [4-5 ] ,这对研
发高效的疫苗 ,有十分重要的作用。要达到以上目的 ,必
须首先对东方田鼠进行实验动物化 ,近年作者对东方田
鼠进行了遗传学特征的研究 [6-8] ,本文作为这项工作的
一部分 ,报道对东方田鼠染色体制备中刀豆素 ( ConA)
的应用技术。
1　材料与方法
1. 1　封闭群东方田鼠繁殖和建立
1994年 ,中国科学院长沙农业现代化研究所研究
人员从湖南省洞庭湖区 ,捕获了 40余对野生东方田鼠
(长江亚种 ) ,饲养在该所的动物室内 ,经过几年对人工
环境的适应 ,东方田鼠已驯化 ,能进行稳定的繁殖。1998
年 12月中南大学湘雅医学院实验动物学部从该所引进
20对东方田鼠 ,饲养在 40 cm× 28 cm× 15 cm的塑料
大鼠笼内 ,按随机交配法 ,对东方田鼠进行交配 ,保证其
近交系数每代上升不超过 1 ,连续繁殖 4代以上。除用
锯木屑作垫料外 ,再加少许干稻草和少许硬木块以利于
动物磨牙 ;饮水供应充足 ;饲料中粗蛋白 22%、粗脂肪
3. 19% 、粗纤维 8. 41%。光照周期为 12 h明亮、 12 h黑
暗 ;室温长期保持为 23℃。
1. 2　染色体的制备
1. 2. 1　常规染色体制备 [ 9]　健康成年东方田鼠 ,按
收稿日期: 2002-10-08
基金项目: 国家“九· 五”攻关项目 ( 96-A23-06-04) ;湖南省科技
厅实验动物专项基金
作者简介:俞远京 ( 1959- ) ,男 ,江苏镇江人 ,中南大学湘雅医学
院实验动物学部副研究员 ,主要从事研究野生动物实验动物化
研究工作。
2. 5μg /g体重的剂量 ,腹腔注射 0. 05%秋水仙素 ,无痛
处死动物 ,取后肢双侧股骨 ,用 9 g /L NaCl溶液冲洗骨
髓腔 ,收集洗液 , 1 000 r /min离心 10 min,弃上清 ,加入
0. 075 mol /L KCl溶液于 37℃水浴中低渗处理
20 min, 800 r /min离心 5 min,弃上清 ,加入新配的固
定液固定 20 min, 1 000 r /min离心 10 min,收集细胞。
重复固定两次 ,轻轻打散细胞 ,然后将细胞滴在的 4℃
的湿冷载玻片上 ,置 70℃烤箱中烤片 ,用姬姆萨染液染
片 30 min,部分滴片后的染色体标本 ,按常规用胰蛋白
酶处理后 ,再进行姬姆萨染液染色 ,制备分带染色体。
1. 2. 2　 ConA处理的染色体制备　在制备常规染色体
标本前 24 h,对成年健康东方田鼠 ,按 20μg /g体重的
剂量腹腔注射 ,然后按上述常规染色体制备方法制备染
色体和分带染色体。
1. 3　染色体的观察
对上述两种方法制备的染色体样品 ,观察随机视野
中分裂相的多少以及染色体的形态特征。
2　结果
2. 1　在随机显微视野中 ,用 ConA处理的东方田鼠骨
髓细胞分裂相多于未经 ConA处理的东方田鼠 ,即在
1 000个随机显微视野中 ,能看见大量骨髓细胞分裂相
的 80个数 ,而未经处理的为 12个。
2. 2　染色体的形态特征 ,用 ConA处理的和未经
ConA处理的染色体 ,染色体形态看不出明显的差别。
如图 1,图 2所示。
经 ConA处理后东方田鼠的染色体 ,其着丝点、长短臂等清晰可见。
The cent romere and arm ( p and q) can be di fferen tiated af ter t reating
wi th ConA of ch romosome inMicotus for its .
图 1　 ConA处理的染色体
Fig. 1　 Ch romosome in t reating wi th ConA
DOI : 10. 16437 /j . cnki . 1007 -5038. 2003. 03. 033
经 ConA处理后东方田鼠的染色体 ,其分带染色很好 ,能分辨各条带纹。
Th e G-bands can be s tained and dis ting uished well af ter treating w ith
ConA in Micotus for it s .
图 2　 ConA处理的 G带染色体
Fig. 2　 Th e G-band af ter t reating w ith ConA
3　讨论
3. 1　人类染色体的制备 ,常常采用外周血培养技
术 [9 ] ,但啮齿动物的外周血培养以获得制备染色体的中
期淋巴细胞比较困难 ,其原因不明。因此 ,啮齿动物的染
色体制备较多通过秋水仙素的作用 ,控制正在分裂的骨
髓细胞 ,以获得中期分裂相的骨髓细胞 ,通过骨髓细胞
来制备染色体。虽然这种方法简便 ,但作者发现用这种
方法制备东方田鼠的染色体时 ,骨髓中处于中期分裂状
况的中期细胞较少 ,不便于分析染色体。
3. 2　 ConA是一种常用的有丝分裂刺激素 ,能有效地
诱导 T细胞增殖和分裂 ,是体外刺激小鼠等啮齿动物
T细胞分裂的必不可少的有丝分裂原。这种丝裂原在体
内 ,特别是在东方田鼠体内 ,能否发挥同样作用?作者进
行了一些探讨 ,正如作者的研究结果那样 , ConA能在
体内刺激东方田鼠骨髓细胞的分裂 ,在此基础上按啮齿
动物常规的染色体制备技术 ,可以使骨髓中大量的细
胞 ,中止在细胞分裂的中期 ,从而获得大量清晰可辨的
染色体 , ConA技术不但便于对染色体的计数 ,而且便
于进行染色体的分带处理 ,分带数有 300条 [10 ]。
3. 3　 ConA虽然能刺激东方田鼠体内骨髓细胞的分
裂 ,但 ConA也有一定的毒性 ,剂量掌握不准 ,可能会造
成染色体形态改变 ,使染色体分析结果有误 ,作者通过
探索 ,认为用 20μg /g体重剂量的作用于东方田鼠 ,不
会造成染色体的任何改变 ,不失为一种大量获得东方田
鼠中期染色体的好方法。
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Application of Preparation Chromosome with ConA
in Closed Breeding Microtus Fortis
YU Yuan-jing , SU Zhi-jie, DING Zhi-gang
(X ian Ya Medical Col lege,Central South Un iversity,Changsha , Hunan , 410078,China )
Abstract: ConA( 20μg /g ) w as injected to abdomen cav ity o f clo sed breeding Microtus fo rtis and af ter 24 h Mi-
crotus fo rti chromosomes w as made through i ts ma rrow cells in general. The resul t show ed there were mo re
cells in spli ting than that i t w as no t injected ( control g roup) to clo sed breeding Microtus fo rtis . In addition, i t
w as not dif ferent in shape of ch romosome bo th the g roup ConA and the control g roup.
Key words: Microtus f ort is ; ConA; chromosome
99俞远京等: 封闭群东方田鼠染色体制备中刀豆素的应用技术研究