全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊怨冤院员圆苑愿 耀 员圆愿猿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员圆鄄园猿鄄园圆摇 接受日期院圆园员圆鄄园愿鄄员猿
基金项目院河北省高等学校科学技术研究青年基金渊项目编号 圆园员园圆员猿冤袁张家口市科技局课题渊项目编号 员园圆圆园圆猿悦冤
作者简介院魏东渊员怨苑员鄄冤袁男袁河北张家口人袁博士袁副研究员袁研究方向为基础兽医学遥 栽藻造院员愿怨猿员猿员愿缘员远曰耘鄄皂葬蚤造院澡遭扎躁噪憎凿岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院刘英渊员怨缘猿鄄冤袁男袁甘肃兰州人袁博士袁教授袁博士生导师袁研究方向为基础兽医学遥 耘鄄皂葬蚤造院 造蚤怎赠员员岳 早泽葬怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园怨鄄员圆苑愿鄄园远
氟喹诺酮类药物残留多元快速检测试纸条的研制
魏摇 东员袁圆 摇 刘摇 英员
渊 员援 甘肃农业大学袁甘肃 兰州摇 苑猿园园苑园曰 圆援 河北北方学院袁河北 张家口摇 园苑缘园园园冤
摘摇 要院为研制一种快速尧简便的胶体金免疫层析法的试纸条袁用于对动物源食品中氟喹诺酮类药物残留
检测袁研究以沙拉沙星渊杂粤蕴载冤多克隆抗体与胶体金结合为金标抗体袁将纯化好的金标抗体喷涂在玻璃
纤维垫上曰包被抗原 杂粤蕴载鄄韵灾粤和山羊抗兔二抗分别包被在硝酸纤维素膜上袁制成免疫层析快速检测
试纸条袁并对试纸条的性能进行测定遥 结果表明袁该快速检测试纸条的灵敏度为 猿园灶早 辕 皂造袁检测时间为 缘
耀 员园皂蚤灶袁不但可对沙拉沙星残留进行检测袁而且还可对诺氟沙星尧环丙沙星和恩诺沙星的残留进行检
测遥 表明试纸条可对氟喹诺酮残留进行多元快速检测遥
关键词院氟喹诺酮曰残留曰检测曰沙拉沙星多克隆抗体曰胶体金曰试纸条
阅耘灾耘蕴韵孕酝耘晕栽 韵云 粤 砸粤孕陨阅 悦韵蕴蕴韵陨阅粤蕴 郧韵蕴阅 栽耘杂栽 杂栽砸陨孕 云韵砸
阅耘栽耘悦栽陨晕郧 云蕴哉韵砸韵匝哉陨晕韵蕴韵晕耘杂 砸耘杂陨阅哉耘杂
宰耘陨 阅燥灶早员袁 圆 摇 蕴陨哉 再蚤灶早员
渊 员援 郧葬灶泽怎 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 蕴葬灶扎澡燥怎袁 郧葬灶泽怎摇 苑猿园园苑园曰 圆援 匀藻遭藻蚤 晕燥则贼澡 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 在澡葬灶早躁蚤葬噪燥怎袁 匀藻遭藻蚤摇 园苑缘园园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽燥 凿藻增藻造燥责 葬 则葬责蚤凿 葬灶凿 泽蚤皂责造藻 皂藻贼澡燥凿 贼燥 凿藻贼藻糟贼 枣造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻泽 则藻泽蚤凿怎藻泽 蚤灶 葬灶蚤皂葬造鄄凿藻则蚤增藻凿 枣燥燥凿袁 糟燥造造燥蚤凿葬造
早燥造凿 蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 贼藻泽贼 泽贼则蚤责泽 憎藻则藻 责则藻责葬则藻凿援 栽澡藻 糟燥造造燥蚤凿葬造 早燥造凿 憎藻则藻 造葬遭藻造藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 葬灶贼蚤鄄杂粤蕴载 责燥造赠糟造燥灶葬造
葬灶贼蚤遭燥凿赠袁 葬灶凿 贼澡藻灶 蚤贼 憎葬泽 泽责则葬赠藻凿 燥灶贼燥 贼澡藻 早造葬泽泽 枣蚤遭藻则援 栽澡藻 杂粤蕴载鄄韵灾粤 糟燥葬贼蚤灶早 葬灶贼蚤早藻灶 葬灶凿 早燥葬贼 葬灶贼蚤鄄则葬遭遭蚤贼 陨早郧 憎藻则藻
遭燥怎灶凿 燥灶贼燥 葬 灶蚤贼则燥糟藻造造怎造燥泽藻 皂藻皂遭则葬灶藻 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 贼澡怎泽 贼燥 责则藻责葬则藻 蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟 泽贼则蚤责泽 葬灶凿 贼藻泽贼 蚤贼泽
责藻则枣燥则皂葬灶糟藻泽援 栽澡藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 造蚤皂蚤贼 燥枣 贼澡藻 贼藻泽贼 泽贼则蚤责泽 憎葬泽 猿园早 辕 皂造援 栽澡藻 贼藻泽贼 糟燥怎造凿 遭藻 糟燥皂责造藻贼藻凿 憎蚤贼澡蚤灶 缘 耀 员园皂蚤灶 葬灶凿 贼澡藻
泽贼则蚤责泽 糟燥怎造凿 凿藻贼藻糟贼 灶燥贼 燥灶造赠 泽葬则葬枣造燥曾葬糟蚤灶 则藻泽蚤凿怎藻泽袁 遭怎贼 葬造泽燥 灶燥则枣造燥曾葬糟蚤灶袁 糟蚤责则燥枣造燥曾葬糟蚤灶 葬灶凿 藻灶则燥枣造燥曾葬糟蚤灶 则藻泽蚤凿怎藻泽援 栽澡藻
糟燥造造燥蚤凿葬造 早燥造凿 贼藻泽贼 泽贼则蚤责 糟葬灶 遭藻 藻皂责造燥赠藻凿 枣燥则 则葬责蚤凿 葬灶凿 皂怎造贼蚤增葬则蚤葬贼藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 枣燥则 贼澡藻 则藻泽蚤凿怎藻泽 燥枣 枣造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院枣造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻泽渊云匝晕泽冤曰 则藻泽蚤凿怎藻曰 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶曰 葬灶贼蚤鄄杂粤蕴载 责燥造赠糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠曰 糟燥造造燥蚤凿葬造 早燥造凿曰 泽贼则蚤责
摇 摇 氟喹诺酮类渊 枣造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻泽袁云匝晕泽 或 云匝杂冤药物
属第三代喹诺酮类广谱抗菌药袁对革兰氏阳性菌如金
葡球菌尧链球菌尧肺炎球菌袁革兰氏阴性杆菌和球菌以
及淋球菌具有高度的抗菌活性袁同时对衣原体尧螺旋
体尧支原体和某些厌氧菌也有极强的抑制作用袁几乎适
用于临床常见的各种细菌感染性疾病咱员暂 袁已成为继青
霉素类药物和磺胺类药物之后治疗动物疾病的常用抗
生素袁但随着该类药物的广泛使用袁其在动物源食品中
的残留问题也随之而来袁引发一系列的不良反应咱圆暂 遥
因此袁各国政府和组织都规定了 云匝晕泽 在动物源食品
中的最大残留限量渊酝砸蕴冤 咱猿 耀 苑暂 袁为保证广大消费者的
安全袁选择合适的残留检测方法成为各国政府和组织
的重点遥
胶体金免疫层析法渊郧燥造凿 蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠
葬泽泽葬赠袁 郧陨悦粤冤是近年来发展起来的一项基于抗原抗体
反应尧用胶体金作为标记物的检测新技术袁该方法操作
愿苑圆员
摇 怨 期 氟喹诺酮类药物残留多元快速检测试纸条的研制
简单尧快速尧特异灵敏袁不需要仪器袁几分钟内即可通过
目视判断检测结果袁并可保持检测结果咱愿暂 遥 但根据文
献报道袁目前国内研究主要是单一样品的检测咱怨 耀 员猿暂 袁
多元检测技术的研究还处于起步阶段袁主要是在试纸
条上包被多条抗体带的方法袁以检测多种物质遥
本课题组利用胶体金免疫层析技术研制的 云匝晕泽
残留多元快速检测试纸条袁利用一种药物的抗体袁可同
时检测多种 云匝晕泽残留袁缘 耀 员园皂蚤灶即可得到检测结果袁
适合大规模样品筛选等特点袁解决了目前检测工作中
仪器法周期长尧对实验操作人员要求较高及检测成本
昂贵的实际问题遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
沙拉沙星渊杂葬则葬枣造燥曾葬糟蚤灶袁杂粤蕴载冤多克隆抗体渊兔源袁
文中简称野抗体冶冤袁包被抗原渊杂粤蕴载鄄韵灾粤冤渊课题组自
制袁另文发表冤曰诺氟沙星对照品渊怨怨郾 愿豫 冤尧盐酸环丙
沙星对照品 渊 员园园郾 园豫 冤尧甲磺酸达氟沙星对照品
渊怨怨郾 苑豫 冤尧沙拉沙星对照品渊怨怨郾 远豫 冤尧盐酸洛美沙星
对照品渊怨怨郾 愿豫 冤尧甲磺酸培氟沙星渊怨怨郾 怨豫 冤尧恩诺沙
星渊员园园郾 园豫 冤尧氧氟沙星渊怨怨郾 园豫 冤购自中国兽医药品
监察所曰山羊抗兔 陨早郧渊匀 垣 蕴冤渊文中简称野二抗冶冤购自
北京中杉金桥生物技术有限公司曰胎牛血清白蛋白
渊月杂粤冤购自 杂蚤早皂葬公司尧胶体金尧快速诊断试纸耗材套
装购自上海金标生物科技有限公司曰其他试剂均为市
售分析纯级袁试验用超纯水和溶液均为课题组自制遥
恒温摇床袁武汉科学仪器厂曰紫外可见分光光度计
苑缘远孕悦型袁上海光谱仪器有限公司曰阅鄄苑愿缘猿圆 高速冷冻
离心机袁德国 匀藻贼贼蚤糟澡公司曰磁力搅拌器 悦允允鄄苑愿鄄员 型袁金
坛市晨阳电子仪器厂遥 酝蚤造造蚤匝 月蚤燥造 超纯水仪袁美国
酝蚤造造蚤责燥则藻公司产品遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 标记前抗体的处理摇 蛋白质溶液内过高的盐
类物质会降低胶体金颗粒的 在藻贼葬 电位袁影响蛋白质的
吸附袁因此标记之前须彻底除盐咱员源暂 遥
将亲和层析纯化好的 杂粤蕴载 抗体装入透析袋袁在
园郾 园园缘皂燥造 辕 蕴 责匀苑郾 园 的 晕葬悦造溶液中 源益透析过夜袁中间
换液数次袁以除去多余的盐离子袁员园 园园园则 辕 皂蚤灶尧源益离
心 员澡袁去除聚合物袁取上清液遥
员郾 圆郾 圆摇 抗体与胶体金结合的最佳 责匀 确定 摇 取若干
员郾 缘皂造 耘孕 管袁分别加入 员皂造 胶体金袁用 园郾 员皂燥造 辕 蕴 运圆悦韵猿和 园郾 员皂燥造 辕 蕴 匀悦造 调节胶体金溶液 责匀 分别为院源郾 园袁缘郾 园袁远郾 园袁苑郾 园袁愿郾 园袁怨郾 园袁员园郾 园遥 每管加入 员皂早 辕 皂造
的抗体 缘园滋造袁振荡 员园皂蚤灶 后室温放置 员园皂蚤灶袁再加入
员园豫晕葬悦造溶液 员园园滋造袁同时设立对照组袁振荡 员园皂蚤灶 后
室温放置 圆澡袁观察颜色变化袁记录保持红色的最低 责匀
渊载冤遥 见表 员遥 再将 责匀 调为梯度 载 原 园郾 愿袁载 原 园郾 远袁载
原 园郾 源袁载 原 园郾 圆袁载袁载 垣 园郾 圆袁载 垣 园郾 源袁载 垣 园郾 远袁载 垣 园郾 愿袁
重复上述试验遥 记录仍保持红色的最低 责匀袁即为最佳
责匀遥
表 员摇 抗体与胶体金结合的最佳 责匀 确定
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 燥责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 责匀 凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 早燥造凿 糟燥造造燥蚤凿 遭蚤灶凿蚤灶早 葬灶贼蚤遭燥凿赠
编号 晕燥援 管数 贼怎遭藻 灶怎皂遭藻则员 圆 猿 源 缘 远 苑 愿 怨
胶体金
糟燥造造燥蚤凿葬造 早燥造凿渊皂造冤 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园
责匀
责燥贼藻灶贼蚤葬造 燥枣 澡赠凿则燥早藻灶 源郾 园 缘郾 园 远郾 园 苑郾 园 愿郾 园 怨郾 园 员园郾 园 对照 对照
抗体
葬灶贼蚤遭燥凿赠渊滋造冤 缘园郾 园 缘园郾 园 缘园郾 园 缘园郾 园 缘园郾 园 缘园郾 园 缘园郾 园 缘园郾 园 对照
员园豫
晕葬悦造渊滋造冤 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园
员郾 圆郾 猿摇 抗体与胶体金结合的最佳浓度确定摇 参照文
献咱员缘暂方法略加改进袁取若干 员郾 缘皂造 耘孕 管袁按照表 圆
方式设计袁分别加入 员皂造 胶体金袁用 园郾 员皂燥造 辕 蕴 运圆 悦韵猿
和 园郾 员皂燥造 辕 蕴 匀悦陨调节胶体金溶液至最佳 责匀遥 每管分
别加入 源园郾 园尧猿缘郾 园尧猿园郾 园尧圆缘郾 园尧圆园郾 园尧员缘郾 园尧员园郾 园尧缘郾 园
和 园滋早的抗体袁振荡 员园皂蚤灶后室温放置 员园皂蚤灶袁再加入
员园豫晕葬悦造溶液 员园园滋造袁振荡 员园皂蚤灶后室温放置 圆澡袁观察
颜色变化袁记录保持红色的最低抗体浓度遥
员郾 圆郾 源摇 抗体的标记摇 根据上述抗体与胶体金结合的
最佳 责匀 值尧浓度的结果进行抗体的标记袁首先用
园郾 员皂燥造 辕 蕴 运圆悦韵猿和 园郾 员皂燥造 辕 蕴 匀悦陨 溶液调节金溶胶至
所需 责匀曰然后将 员园皂造 胶体金溶液加入 缘园皂造 烧杯中袁
怨苑圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
用电磁搅拌器匀速搅拌袁逐滴加入一定量的抗体溶液曰
最后逐滴加入 缘豫的 月杂粤 至终浓度为 员豫 袁以封闭金
颗粒表面未被占据的位点袁稳定金颗粒的残留表位袁持
续搅拌 员园皂蚤灶遥
表 圆摇 抗体与胶体金结合的最佳浓度确定
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 燥责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 早燥造凿 糟燥造造燥蚤凿 遭蚤灶凿蚤灶早 葬灶贼蚤遭燥凿赠
编号 晕燥援 管数 贼怎遭藻 灶怎皂遭藻则员 圆 猿 源 缘 远 苑 愿 怨
胶体金
糟燥造造燥蚤凿葬造 早燥造凿渊皂造冤 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园 员郾 园
抗体
葬灶贼蚤遭燥凿赠 渊滋早冤 源园郾 园 猿缘郾 园 猿园郾 园 圆缘郾 园 圆园郾 园 员缘郾 园 员园郾 园 缘郾 园 园郾 园
员园豫
晕葬悦造渊滋造冤 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园 员园园郾 园
员郾 圆郾 缘摇 金标抗体的纯化摇 标记好的金标抗体采用低
温超速离心法纯化袁以除去金标抗体混合液中未标记
的抗体和胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚
合物袁最后用于显色遥 首先将金标抗体溶液常温
圆 缘园园则 辕 皂蚤灶离心 圆园皂蚤灶袁取红色上清溶液 员园 园园园则 辕 皂蚤灶
源益离心 源缘皂蚤灶曰此时溶液分为 猿 层院透明上清尧管底可
流动的暗红色沉淀和管底壁上黑色致密的金颗粒层遥
将暗红色沉淀转移到另外一个离心管中袁用含 员豫
月杂粤的 园郾 园员皂燥造 辕 蕴 孕月液重新悬浮至原量袁平衡过夜袁
以员园 园园园则 辕 皂蚤灶离心 源缘皂蚤灶袁重复离心 圆 次遥 最后用含
员豫 月杂粤 的 园郾 园员皂燥造 辕 蕴 孕月 液将沉淀重新悬浮为原体
积的 员 辕 圆园袁源益保存备用遥
员郾 圆郾 远摇 金标抗体的质量鉴定 摇 将二抗点样于 晕悦 膜
上袁直接与金标抗体作用袁观察颜色变化遥 取 员园滋造 金
标抗体袁稀释后进行紫外扫描遥
员郾 圆郾 苑摇 包被抗原浓度的筛选摇 采用直接点样法进行
包被抗原浓度的筛选袁将抗原稀释到 圆皂早 辕 皂造袁再分别
做 员颐 圆尧员颐 源尧员颐 愿稀释袁在 晕悦 膜上点样袁猿苑益温箱中干
燥后浸泡于金标抗体溶液中袁圆皂蚤灶后取出袁用 孕月杂栽洗
涤 猿 遍袁每次间隔 猿皂蚤灶袁观察点样点的显色情况遥
员郾 圆郾 愿摇 二抗包被 晕悦 膜 摇 市场上的二抗往往聚集为
多聚体分子袁而且含有较多的盐分遥 在包被 晕悦 膜时
需要进行解聚和脱盐袁首先将亲和纯化抗体用生理盐
水稀释为 园郾 缘 耀 员皂早 辕 皂造 浓度袁在 猿皂燥造 辕 蕴 运悦晕杂渊硫氰
酸钾冤溶液中透析 员圆澡袁接着在 圆皂皂燥造 辕 蕴 责匀 怨郾 园 的硼
酸缓冲液中透析 员圆澡袁分装备用遥 处理好的二抗稀释
一定倍数后包被在 晕悦膜上作为质控线遥
员郾 圆郾 怨摇 晕悦膜的封闭摇 抗原包被线作为检测线袁二抗
线作为质控线袁将 晕悦 膜浸入到含有 员豫 月杂粤 的 园郾 园员
皂燥造 辕 蕴 责匀苑郾 源 孕月杂液中 圆澡袁封闭其蛋白质的结合位点遥
然后用 孕月杂液洗 圆 次袁每次 缘皂蚤灶袁自然干燥后备用遥
员郾 圆郾 员园摇 免疫层析试纸条的组装摇 分别将样品垫尧胶
体金结合垫尧晕悦 膜尧硬质吸水滤纸在 愿园皂皂 伊 猿园园皂皂
的单面胶 孕灾悦 板上按图 员 正视图装配袁其组装顺序如
下院
淤贴 晕悦膜院如图 圆 原 圆 侧视图袁在 愿园皂皂 伊 猿园园皂皂
的单面胶 孕灾悦板上袁将已固化含有 杂载蕴载鄄韵灾粤 抗原和
二抗的 晕悦膜贴在 孕灾悦板相应位置遥 于贴胶体金结合
垫院将胶体金结合垫的一端与 晕悦 膜的下端相连接袁中
间重叠 员 耀 圆皂皂遥 盂贴样品垫院将胶体金结合垫的下
端与样品垫相连袁中间有重叠遥 榆贴吸水滤纸院将吸水
滤纸与 晕悦膜的上端相连接袁中间重叠 员郾 愿 耀 圆皂皂遥 虞
切条院用切条机将已经装配好 孕灾悦板纵向切成 源皂皂 伊
愿园皂皂的试纸条袁密封袁源益保存备用遥
图 员摇 试纸条装配示意图
云蚤早援 员摇 杂糟澡藻皂葬贼蚤糟 凿蚤葬早则葬皂 燥枣 葬 贼藻泽贼 泽贼则蚤责 泽澡燥憎蚤灶早
蚤贼泽 糟燥皂责燥灶藻灶贼泽
员院 吸水滤纸曰 圆院 固定有抗原和二抗的 晕悦膜曰猿院 质控线曰
源院 检测线曰 缘院 胶体金结合垫曰 远院 样品垫曰 苑院 孕灾悦底板
员院 葬遭泽燥则遭藻灶贼 责葬凿曰 圆院 晕悦 皂藻皂遭则葬灶藻曰 猿院 糟燥灶贼则燥造 造蚤灶藻曰 源院 贼藻泽贼 造蚤灶藻曰 缘院
早燥造凿 糟燥灶躁怎早葬贼藻凿 则藻造藻葬泽藻凿 责葬凿曰 远院 泽葬皂责造藻 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 责葬凿曰 苑院 孕灾悦
摇 摇 摇 泽怎责责燥则贼 遭燥凿赠
员郾 圆郾 员员摇 胶体金免疫层析试纸条评价标准摇 吸取 缘滋造
金标抗体直接滴加到试纸条的胶体金结合垫上袁然后
将试纸条插入待测标准品中袁可见金标抗体通过层析
作用向上移行袁在移行过程中标准品中的抗原与固定
园愿圆员
摇 怨 期 氟喹诺酮类药物残留多元快速检测试纸条的研制
在玻璃纤维上的金标抗体发生抗原抗体反应袁并产生
肉眼可见的红色条带袁圆园 耀 猿园泽 可移行至 悦 线袁于 缘 耀
员园皂蚤灶内观察结果袁结果评价如图 圆 所示遥
图 圆摇 免疫层析检测结果说明
云蚤早援 圆摇 陨造造怎泽贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 蚤皂皂怎灶燥糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟
贼藻泽贼 则藻泽怎造贼泽
若金标抗体与样品发生反应袁且完全被抑制袁则只
有质控线渊悦线冤一条显色为阳性结果袁若金标抗体与
样品发生反应袁没有被完全抑制袁则质控线和检测线
渊栽线冤两条带都显色为阴性结果袁若质控线不显色袁检
测无效遥
员郾 圆郾 员圆摇 试纸条的性能测定摇 淤 灵敏度院将 杂粤蕴载 用
孕月杂液稀释成 园尧员园郾 园尧员缘郾 园尧圆园郾 园尧圆缘郾 园尧猿园郾 园尧源园郾 园尧
缘园郾 园尧员园园郾 园 和 圆园园郾 园灶早 辕 皂造 的标准系列溶液遥 用制备
的金标试纸条测定遥 于 特异性院将沙拉沙星尧诺氟沙
星尧环丙沙星尧恩诺沙星尧培氟沙星尧达氟沙星尧洛美沙
星尧氧氟沙星等药物用 孕月杂 液稀释成 猿园郾 园灶早 辕 皂造 的浓
度袁用制备的金标试纸条测定遥 盂 稳定性院采用破坏
性试验进行试纸条稳定性测定袁即将安装好的胶体金
试纸条用含有干燥剂的塑料袋密封袁避光贮存于 猿苑益
温盒中袁每天固定时间取出进行阴性尧不同浓度阳性条
件下的测试袁观察稳定性测试结果袁共测试 缘凿咱员远暂 遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 抗体与胶体金结合最适 责匀的确定
胶体金对蛋白的吸附主要取决于 责匀 值袁在接近
蛋白质的等电点或偏碱的条件下袁二者容易形成牢固
的结合物咱员苑暂 遥 如果胶体金的 责匀 值低于蛋白质的等
电点袁则会聚集而失去结合能力遥 一般认为袁在比蛋白
质等电点渊孕陨冤略高 园郾 圆 耀 园郾 缘 个 责匀 单位的条件下渊稍
微偏碱冤袁二者易形成牢固的复合物咱员愿暂 遥 经测定袁责匀
在 苑郾 缘 耀 愿郾 园 之间为保持红色的最低 责匀 范围袁因此选
择 责匀为 愿郾 园 作为标记的最适 责匀值遥
圆郾 圆摇 抗体与胶体金结合最佳浓度的确定
结果显示院低于 圆缘郾 园滋早 的胶体金溶液袁均变成灰
黑色袁且有黑色沉聚物袁故 圆缘郾 园滋早 辕 皂造 为最低抗体蛋
白用量遥 而在实际工作中袁为增加稳定性袁一般在胶体
金标记抗体最适稳定量的基础上再加入 员园豫 耀 猿园豫
的抗体即为稳定胶体金的实际抗体需要量袁根据用以
标记的胶体金的总量计算出所需抗体的总量遥 因此选
择 猿园郾 园滋早 辕 皂造为标记的最佳抗体蛋白浓度遥
圆郾 猿摇 金标抗体的质量鉴定
将二抗点样于 晕悦膜上袁直接与金标抗体作用袁可
见有明显的粉红色斑点袁表明金标抗体有活性遥 取
员园滋造沉淀袁稀释后紫外扫描袁结果见图 猿袁胶体金标记
抗体后袁其最大吸收峰出现位移袁由 缘圆园灶皂 移至
缘猿园灶皂处袁由此判断抗体已经标记上胶体金遥
图 猿摇 紫外扫描抗体标记胶体金
云蚤早援 猿摇 哉造贼则葬增蚤燥造藻贼 造蚤早澡贼 葬遭泽燥则遭葬灶糟藻 泽责藻糟贼则怎皂
燥枣 糟燥造造燥蚤凿葬造 早燥造凿 造葬遭藻造藻凿 憎蚤贼澡 孕糟粤遭
圆郾 源摇 包被抗原浓度的确定
测定结果见表 猿遥 从表中可以看出袁包被抗原浓
度为 员皂早 辕 皂造 时袁对 园郾 员尧园滋早 辕 皂造 浓度的样品检测线有
颜色出现袁而浓度为 园郾 缘皂早 辕 皂造 时检测线没有颜色出
现袁故选择 员皂早 辕 皂造 作为 杂粤蕴载鄄韵灾粤 的包被浓度喷涂
到 晕悦膜上遥
表 猿摇 胶体金标记 杂粤蕴载鄄韵灾粤抗原浓度的确定
栽葬遭造藻 猿摇 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 糟燥造造燥蚤凿葬造
早燥造凿 造葬遭藻造藻凿 憎蚤贼澡 杂粤蕴载鄄韵灾粤
杂粤蕴载样品浓度
杂粤蕴载 泽葬皂责造藻
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊滋早 辕 皂造冤
杂粤蕴载鄄韵灾粤浓度
杂粤蕴载 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 渊皂早 辕 皂造冤
园郾 圆缘 园郾 缘 员 圆
园 垣 垣 原 原
园郾 员 垣 垣 原 原
注院 垣 院表示 栽线不显色曰 原 院表示 栽线显色遥
晕燥贼藻院 垣 院栽 造蚤灶藻 糟燥造燥则造藻泽泽曰 原 院栽 造蚤灶藻 糟燥造燥则藻凿
员愿圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
圆郾 缘摇 金标试纸条灵敏度测定结果
检测试纸条的检测限袁对不同批次尧不同重复试验
的结果基本一致渊表 源冤袁试纸条检测 杂粤蕴载 标准液的
含量在 圆缘郾 园灶早 辕 皂造以下时袁检测线渊栽 线冤位置有颜色
变化袁说明结果呈阴性曰当含量在 圆缘郾 园灶早 辕 皂造 以上时袁
检测线没有明显颜色变化袁结果呈阳性遥 为保证测定
结果的有效性袁最终确定试纸条的检测限为 猿园郾 园灶早 辕
皂造遥
圆郾 远摇 金标试纸条特异性测定结果
如表 缘 所示袁试纸条对沙拉沙星尧诺氟沙星尧环丙
沙星和恩诺沙星的标准液特异性测定都显示较强阳性
结果渊悦线为红色袁栽线无色冤袁对培氟沙星和达氟沙星
的标准液显示一般的阳性结果渊悦 线为红色袁栽线有较
弱的粉色冤袁而对洛美沙星和氧氟沙星的标准液显示
阴性结果渊悦线和 栽线为红色冤遥
表 源摇 试纸条检测限的确定
栽葬遭造藻 源摇 栽澡藻 造蚤皂蚤贼 燥枣 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣
贼澡藻 郧陨悦粤 凿蚤责泽贼蚤糟噪泽
杂粤蕴载标准液
杂粤蕴载
泽贼葬灶凿葬则凿
泽燥造怎贼蚤燥灶
渊灶早 辕 皂造冤
圆园园 员园园 缘园 源园 猿园 圆缘 圆园 员缘 员园 园
结果判定
则藻泽怎造贼 躁怎凿早藻 垣 垣 垣 垣 垣 垣 辕 原 原 原 原 原
注院 垣 院表示 栽线无色曰 垣 辕 原 院表示 栽线略有变色曰 原 院表示 栽线红色遥
晕燥贼藻院 垣 院栽 造蚤灶藻 糟燥造燥则造藻泽泽曰 垣 辕 原 院栽 造蚤灶藻 葬 造蚤贼贼造藻 糟燥造燥则曰 原 院栽 造蚤灶藻 则藻凿
表 缘摇 试纸条特异性测定结果
栽葬遭造藻 缘摇 杂责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 燥枣 凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 郧陨悦粤 凿蚤责泽贼蚤糟噪泽
云匝晕泽药物 云匝晕泽 凿则怎早
沙拉沙星 诺氟沙星 环丙沙星 恩诺沙星 培氟沙星 达氟沙星 洛美沙星 氧氟沙星
结果判定
则藻泽怎造贼 躁怎凿早藻 垣垣垣 垣垣垣 垣垣垣 垣垣 垣 垣 辕 原 原 原
注院 垣垣垣 院表示 栽线无色曰 垣垣 院表示 栽线略有变色曰 垣 院表示 栽线有较弱的粉色曰 原 院表示 栽线红色遥
晕燥贼藻院摇 垣垣垣 院栽 造蚤灶藻 糟燥造燥则造藻泽泽曰 垣垣 院栽 造蚤灶藻 葬 造蚤贼贼造藻 糟燥造燥则曰 垣 院栽 造蚤灶藻 憎藻葬噪 责蚤灶噪曰 原 院栽 造蚤灶藻 则藻凿援
圆郾 苑摇 稳定性测试结果
通常认为 猿苑益每稳定 员凿 相当于 源益 耀 员园益保存
源缘凿左右咱员远暂 袁通过测定袁试纸条在 员 耀 圆凿 时检测结果
基本无变化袁从第 猿 天开始袁试纸条的检测效果开始变
弱袁即 栽线开始变色袁呈浅粉色至红色的变化袁这说明
在第 员尧圆 天试纸条稳定性较好袁从第 猿 天开始稳定性
减弱袁可得出结论袁制备的胶体金试纸条在避光 源益保
存袁怨园凿有较强的稳定性袁可以用做实际样品的测定曰
怨园凿后测定效果较差袁不宜进行检测使用遥
猿摇 讨论
猿郾 员摇 竞争法胶体金试纸条的检测原理
在 晕悦膜上的检测区包被完全抗原袁质控区包被
二抗袁点样区的玻璃纤维上包被金标抗体遥 淤当样品
中有待测物渊抗原冤时袁样品中的抗原与玻璃纤维膜上
金标抗体结合形成抗原鄄金标抗体复合物袁抗原鄄金标
抗体复合物沿 晕悦 膜扩散到检测区袁不与检测区的完
全抗原结合袁则此区不显色曰抗原鄄金标抗体复合物继
续扩散至质控区袁与质控区的二抗结合袁在质控区出现
显色带袁即出现一条显色带判为阳性遥 于当样品中没
有待测物渊抗原冤时袁在样品液作用下袁只有膜上金标
抗体向检测区和质控区扩散袁一方面袁与检测区的完全
抗原结合袁出现 员 个显色条带曰另一方面袁可以在质控
区与二抗结合袁又出现 员 个显色条带袁即出现 圆 条显色
条带判为阴性遥 盂如果质控区没有显色条带袁则说明
试纸条失效遥
猿郾 圆摇 试纸条的使用范围
尽管已有一些关于利用一种药物的单克隆抗体进
行药物残留多元检测的报道咱员怨袁 圆园暂 袁但单克隆抗体较多
克隆抗体的制备程序繁琐袁费时费力袁而且单克隆抗体
的优势主要是其特异性强袁而多残留检测需要的是其
较强的广谱性袁因此袁笔者认为袁利用一种抗体进行残
留的多元检测袁应该选择多克隆抗体为最佳遥
本课题组所制备的 云匝晕泽 残留多元检测试纸条袁
可实现对多种 云匝晕泽 残留的快速检测袁特别是对被检
测物中沙拉沙星尧诺氟沙星尧环丙沙星和恩诺沙星的残
留浓度是否超标提供了确切的信息袁可以达到半定量
检测袁但对其他同类药物的检测效果欠佳袁这一方面与
我们所制备的抗体有关袁另一方面与试纸条组装的各
种材料和方法有关遥
目前袁该项目在实际样品检测中的应用研究仍在
进行之中渊相关研究另文发表冤袁今后袁我们将不断进
行改进和完善袁力争使试纸条的检测范围进一步扩大袁
圆愿圆员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊怨冤院员圆苑愿 耀 员圆愿猿
精确度更加完善袁既可定性袁又可定量袁在对动物源食
品中 云匝晕泽残留的实际检测中充分发挥作用遥
源摇 结论
本研究所制备的胶体金试纸条袁利用 杂粤蕴载 多克
隆抗体可实现对多种 云匝晕泽 残留的定性检测袁即多元
检测袁最小检测限为 猿园郾 园灶早 辕 皂造袁符合我国对 云匝晕泽 的
酝砸蕴曰检测时间为 缘 耀 员园皂蚤灶袁且具有较好的稳定性袁可
同时对动物源食品渊肉尧蛋尧奶等冤中的沙拉沙星尧诺氟
沙星尧环丙沙星和恩诺沙星残留进行检测遥
参考文献院
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咱 圆 暂 摇 魏 东袁李振华袁张乃生援 氟喹诺酮类药物的不良反应咱 允暂 援 动物
医学进展袁圆园园远袁圆苑渊苑冤院员园缘 原 员园苑
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悦燥皂皂怎灶蚤贼赠 责则燥糟藻凿怎则藻 枣燥则 贼澡藻 藻泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻灶贼 燥枣 皂葬曾蚤皂怎皂 则藻泽蚤凿怎藻
造蚤皂蚤贼泽 燥枣 增藻贼藻则蚤灶葬则赠 皂藻凿蚤糟蚤灶葬造 责则燥凿怎糟贼泽 蚤灶 枣燥燥凿泽贼怎枣枣泽 燥枣 葬灶蚤皂葬造 燥则蚤早蚤灶
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咱 远 暂摇 占春瑞袁温志海袁卜延刚袁祝建新援鸡肉中多种喹诺酮类兽药残留
量的高效液相色谱测定研究咱允暂 援食品科学袁圆园园缘袁圆远渊员园冤院员苑圆 原
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咱 苑 暂 摇 中华人民共和国农业部援 圆猿缘 号公告援动物性食品中兽药最高残
留限量咱杂暂援 圆园园圆袁员圆
咱 愿 暂摇 张 燕袁王 玮袁刘俊伟袁王 硕援免疫胶体金法快速检测动物源性食
品中氯霉素残留的研究咱 允暂 援 中国食品学报袁圆园园怨袁怨渊员冤院员怨远 原
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咱员员暂摇 张改平袁李学伍袁王选年袁杨艳艳袁邓瑞广援 盐酸克伦特罗快速检
测试纸条咱孕暂援中国专利 悦晕袁员源园猿愿员源袁圆园园圆 原 园员 原 员源
咱员圆暂摇 孙远明袁 雷红涛袁 潘 科袁黄 丽袁黄晓钰袁谌国莲袁吴 青援克伦特罗
快速半定量检测试纸咱孕暂 援中国专利 悦晕袁 圆远缘猿缘员员袁 圆园园猿 原 圆园 原
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咱员猿暂摇 吴 刚袁姜瞻梅袁霍贵成袁田 波援胶体金免疫层析技术在食品检测
中的应用咱允暂 援 食品工业科技袁圆园园苑袁圆愿渊员圆冤院圆员远 原 圆员愿
咱员源暂摇 汪 琳袁周 琦援 免疫胶体金技术及其在检验检疫中的应用咱 允暂 援
检验检疫科学袁圆园园源袁 员源渊源冤院缘远 原 缘愿
咱员缘暂摇 孙艳秋袁赵奎华袁曹远银袁刘长远袁梁春浩援 黄瓜细菌性角斑病免
疫胶体金检测试纸条的研制咱 允暂 援 植物病理学报袁圆园员员袁源员渊 圆冤院
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咱员远暂摇 谢军芳援 栽酝耘灾尧耘糟贼尧蕴悦酝灾尧孕韵蕴再 和 孕灾酝 病毒免疫血清制备及
耘蕴陨杂粤等检测方法的研究咱阅暂 北京院中国协和医科大学袁 圆园园怨
咱员苑暂摇 唐景峰袁李晓艳袁王兴龙袁梅建军援布病胶体金免疫层析检测方法
的建立咱允暂 援中国生物制品学袁圆园园苑袁圆园渊圆冤院员员怨 原 员圆猿
咱员愿暂摇 朱立平袁 陈学清援免疫学常用实验方法咱酝暂援 北京院人民军医出
版社袁 圆园园园院员缘愿
咱员怨暂摇 在澡怎 再袁 蕴蚤 蕴袁 宰葬灶早 在袁 悦澡藻灶 再袁 在澡葬燥 在袁 在澡怎 蕴袁 宰怎 载袁 宰葬灶 再袁
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贼澡藻 砸葬责蚤凿 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 员圆 云造怎燥则燥择怎蚤灶燥造燥灶藻泽 蚤灶 悦澡蚤糟噪藻灶 酝怎泽糟造藻 葬灶凿
蕴蚤增藻则咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 葬灶凿 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁圆园园愿袁 缘远院
缘源远怨 原 缘源苑源
咱圆园暂摇 何丹婷袁李艳伟袁师 伟袁赵 宁袁徐 飞援 牛奶中恩诺沙星和环丙沙
星检测试纸的研制及性能测定咱 允暂 援 中国兽药杂志袁 圆园员员袁 源缘渊
怨冤院 猿远 原 猿怨
渊责任编辑摇 邱爱枝冤
猿愿圆员