全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 22 期 2014 年 11 月

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• 药剂与工艺 •
基于 HPLC-ESI-MS 法续断发汗前后的成分分析
杜伟锋 1，贾永强 2，姜东京 1，蔡宝昌 1, 3
1. 浙江中医药大学 中药炮制技术研究中心，浙江 杭州 311401
2. 中国医学科学院药物研究所 北京协和药厂，北京 102600
3. 南京中医药大学 江苏省中药炮制重点实验室，江苏 南京 210046
摘 要：目的 建立高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-ESI-MS）分析续断发汗前后成分变化的方法。方法 HPLC 采用
Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）色谱柱；流动相为 0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱：0～45 min，6%～
20%乙腈；45～90 min，20%～35%乙腈；90～110 min，35%～70%乙腈；110～120 min，70%乙腈；柱温为 30 ℃，体积流量
为 0.8 mL/min；质谱采用电喷雾离子源，正负离子模式下全扫描检测，并通过 [M－H]−、[M＋HCOO]−、[M＋H]+、[M＋Na]+
等离子信息推断化合物。结果 建立了续断发汗前后的 HPLC-ESI-MS 图谱，均得到 42个色谱峰，通过与对照品和文献对照，
推断出了 31 个化合物；续断经产地加工发汗后，有些成分的量下降，如马钱苷酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、
异绿原酸 B、续断苷 A、续断苷 B 等；有些成分的量升高，如茶茱萸苷、川续断皂苷 X、川续断皂苷 VI、川续断皂苷 VII、
川续断皂苷乙、川续断皂苷 XIII、川续断皂苷 A 等；其他成分的量几乎不变。结论 所建立的 HPLC-ESI-MS 图谱，便于全
面控制续断发汗与未发汗药材的质量。
关键词：续断；产地加工；发汗；高效液相色谱-电喷雾-质谱；成分分析；马钱苷酸；绿原酸；咖啡酸；马钱苷；续断苷；
茶茱萸苷；川续断皂苷
中图分类号：R286.02；R284.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)22 - 3251 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.22.007
Component analysis of crude and sweated Dipsaci Radix based on HPLC-ESI-MS
DU Wei-feng1, JIA Yong-qiang2, JIANG Dong-jing1, CAI Bao-chang1, 3
1. Research Center of Chinese Materia Medica Processing Technology, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 311401, China
2. Institute of Materia, Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Medical Factory, Beijing 102600, China
3. Jiangsu Key Laboratory of Chinese Materia Medica Processing, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China
Abstract: Objective A high performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry (HPLC-ESI-MS) method was
developed for the component analysis of the crude and sweated Dipsaci Radix. Methods Analyses were carried out on an Agilent Eclipse
XDB-C18 (250 mm × 4.6 mm, 5.0 μm) column by gradient elution using (A) 0.1% aqueous formic acid and (B) acetonitrile. The column
was maintained at 30 ℃, and the flow rate was 0.8 mL/min. Chemical characteristics of the crude and sweated Dipsaci Radix were
analyzed by MS techniques with an ESI source, the quasi molecular ions of compounds in both negative and positive modes were observed
for molecule mass information as [M－H]−, [M + HCOO]−, [M + H]+, and [M + Na]+. Results An HPLC-ESI-MS spectrum of the crude
and sweated Dipsaci Radix was established with 42 peaks respectively, and the potential structures of 31 characteristic components were
identified by study on the MS of compounds and comparing with reference data and some of standards. After being sweated, the contents
of some components in Dipsaci Radix decreased, such as loganic acid, 4-O-caffeoylquinic acid, chlorogenic acid, caffeic acid, loganin,
isochlorogenic acid B, dipsanoside A, and dipsanoside B, but some ones increased, such as cantleyoside, dipsacoside X, dipsacoside VI,
dipsacoside VII, dipsacoside B, dipsacoside XIII, and dipsacus saponin A, The amount of other ingredients are almost the same.
Conclusion The HPLC- ESI-MS spectrum could comprehensively control the quality of the crude and sweated Dipsaci Radix.

收稿日期：2014-06-06
基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（81303224）
作者简介：杜伟锋（1984—），男，河北任县人，硕士，助理研究员，从事中药炮制及质量控制研究。
Tel: (0571)87195895 E-mail: duweifeng_200158@sohu.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 22 期 2014 年 11 月

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Key words: Dipsaci Radix; primary processing; sweated; HPLC-ESI-MS; component analysis; loganic acid; chlorogenic acid; caffeic
acid; loganin; dipsanoside; cantleyoside; dipsacoside

续断Dipsaci Radix为川续断科多年生草本植物
川续断 Dipsacus asper Wall. ex Henry 的根，因能“续
折接骨”而得名。《滇南本草》记载：“补肝，强筋
骨，定经络，止经中（筋骨）酸痛……”。临床上用
于腰背酸痛、肢节痿痹、跌扑创伤、损筋折骨、胎
动漏红、血崩、遗精、带下、痈疽疮肿。续断传统
多采用“发汗”的产地加工方法[1]，“发汗”除了干
燥目的外，还伴随着性状的变化，即药材内部变绿，
此多是由于化学成分的变化引起的。相关学者研究
发现，续断经产地加工发汗后，其水溶性浸出物和
药效成分总皂苷及川续断皂苷 VI 均降低，因而对
药材有无必要“发汗”持怀疑态度[2-5]。本课题组前
期比较了不同产地的发汗前后的续断，结果发现，
经发汗加工后，续断中水溶性浸出物、醇溶性浸出
物、总皂苷、绿原酸的量均有所降低，而川续断皂
苷 VI 的量有所升高[6-7]。然而仅凭这几种成分的变
化难以阐明续断发汗的真正机制，应从续断经发汗
产地加工后可能引起系列成分变化的角度，进行整
体药材质量评价。本实验采用 HPLC-ESI-MS 建立
了续断发汗前后的分析方法，并通过与对照品和质
谱信息对照，对部分成分进行了指认，为全面评价
续断发汗前后的药材质量奠定了基础。
1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱-6410 三重四极杆质
谱联用仪，美国 Agilent 仪器公司；AG285 电子天
平，0.01 mg，Mettler，Switzerland；KQ—500E 型
超声清洗器，昆山市超声仪器有限公司。
对照品：马钱苷酸（批号 111865-201102，质量
分数 93.8%）、绿原酸（批号 110753-201314，质量
分数 96.6%）、咖啡酸（批号 110885-200102，质量
分数 100.0%）、马钱苷（批号 111640-201005，质量
分数 99.2%）、川续断皂苷 VI（批号 111685-201003，
质量分数 93.5%），购自中国食品药品检定研究院；
川续断皂苷乙（批号 33289-85-9，质量分数 98.0%），
购自成都曼思特生物技术有限公司；α-常春藤皂苷
（批号 BW60211，质量分数 98.0%）、常春藤皂苷元
（批号 BW6423，质量分数 98.0%），购自北京北研
馨绿生物技术有限公司。甲醇、甲酸为分析纯；乙
腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水。
续断样品采自四川西昌，经浙江中医药大学来
平凡教授鉴定为川续断科植物川续断 Dipsacus
asper Wall. ex Henry 的干燥根；未发汗样品为续断
经采集后于 80 ℃条件下烘干而成，发汗样品为续
断采新后经产地发汗加工后而成。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取对照品（马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、
马钱苷、川续断皂苷乙、川续断皂苷 VI、α-常春藤
皂苷和常春藤皂苷元）各 1.5 mg 于 10 mL 量瓶中，
用甲醇定容，制成质量浓度 0.15 mg/mL 的对照品混
合溶液，0.45 μm 微孔滤膜滤过，备用。
2.2 样品处理
取过 80 目筛的样品粉末 0.5 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，称定
质量，超声（功率 100 W，频率 40 kHz）处理 30 min，
放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，
滤过，取上清液过 0.45 μm 微孔滤膜，即得。
2.3 色谱条件
Agilent 1200 型高效液相色谱仪，色谱柱为
Agilent Eclipse XDB-C18 柱（250 mm×4.6 mm，5.0
μm）；流动相为 0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱：
0～45 min，6%～20%乙腈；45～90 min，20%～35%
乙腈；90～110 min，35%～70%乙腈；110～120 min，
70%乙腈；柱后平衡时间为 10 min；柱温为 25 ℃；
体积流量 0.8 mL/min；检测波长 212 nm；进样量为
10 μL。
2.4 质谱条件
Agilent 6410 三重四极杆质谱仪，离子源：电喷
雾源（ESI）；扫描范围：m/z 100～2 000；干燥气：
氮气，体积流量 10 L/min；雾化气压力 103.44 kPa；
干燥气温度 300 ℃；毛细管电压 4.0 kV；离子检测
模式：全扫描检测；离子极性：正、负离子；扫描
时间 0.5 s；碎裂电压 135 V；增加电压值 400 V。
检测到续断主要的分子离子峰有 [M－H]−、[M＋
HCOO]−、[M＋H]+、[M＋Na]+。
2.5 HPLC-ESI-MS 分析
将续断未发汗和发汗样品按照“2.2”项的方法
制备溶液，采用“2.3”项和“2.4”项的方法进样分
析，所得到的 HPLC-ESI-MS 图谱见图 1，各得到
42 个峰。
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2.6 成分分析
通过质谱分析，得到了各个色谱峰在负离子模
式下（[M－H]−、[M＋HCOO]−）和在正离子模式下
（[M＋H]+、[M＋Na]+）的质谱信息，进而来确定各
个化合物的相对分子质量。通过与 8 个对照品的保
留时间和质谱信息进行对照（图 1），再结合文献信
息，最终推断出了 31 个色谱峰所对应的化合物，结
果见表 1。
从续断发汗前后成分比较中初步得知，续断发
汗后，有些成分的量降低（如马钱苷酸异构体、马
钱苷酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、异
绿原酸 B、续断苷 A、续断苷 B 等）；有些成分的
量升高（如茶茱萸苷、川续断皂苷 X、川续断皂苷
VI、川续断皂苷 VII、川续断皂苷乙、川续断皂苷
VI 同分异构体、川续断皂苷 XIII、川续断皂苷 IV
同分异构体、川续断皂苷 A 等）；其他成分的量几





4-马钱苷酸 6-绿原酸 7-咖啡酸 8-马钱苷 23-川续断皂苷乙 25-川续断皂苷 VI 39-α-常春藤皂苷 42-常春藤皂苷元
4-loganic acid 6-chlorogenic acid 7-caffeic acid 8-loganin 23-dipsacoside B 25-asperosaponin VI 39-α-hederin 42-hederagenin

图 1 8 个对照品的总离子流图 (A-负离子模式，B-正离子模式)、续断的负离子总离子流图 (C-未发汗样品，
D-发汗样品) 和续断的正离子总离子流图 (E-未发汗样品，F-发汗样品)
Fig. 1 TIC of eight reference compounds (A-negative ion mode, B-positive ion mode), negative ion TIC of Dipsaci Radix
(C-crude sample, D-sweated sample), and positive ion TIC of Dipsaci Radix (E-crude sample, F-sweated sample)
表 1 续断的 HPLC-ESI-MS 数据及化合物归属
Table 1 HPLC-ESI-MS data and compounds attribution of Dipsaci Radix
负离子模式 正离子模式
峰号 tR / min
[M－H]− [M＋HCOO]− [M＋H]+ [M＋Na]+
相对分
子质量
分子式 化合物归属
1 2.803 /
2 4.091 /
3 14.183 374.9 399.0 376 C16H24O10 马钱苷酸异构体[8]
4 15.908 374.9 399.0 376 C16H24O10 马钱苷酸*[8]
4
6
7
8
23
25
3942
A B
C D
E F
25
39 42
7
8
23
4
6
16 18
30
9
10
14
15
17
19
25
1
2
3
4
5
6
7 8
12
13
11
34
20～24
26
36
37
31
33
27 29
32 413928
38
35
40 42
9
10
14
15
17
19
25 1
2
3
4
5
6
7
8
12
13
11
34
16 18
20～24
26
36
37
31
33
27 29
32 413928
38
35
40 42
30
1
2
3
4
5
6
8
7
9
10 11
12
13
14
15
16
17
18
19
20～24
25
26
27
28
29
3031
32
33
34 3536
37
38
39
404142
2
1
3
4
56
8
7
9
10
11
12
13
14
1516
17
18
19
20～24 26
25
27
28
29 31
30
32
33
363534
37
38
39 41
40 42
0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 80 100 120
t / min
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续表 1
负离子模式 正离子模式
峰号 tR / min
[M－H]− [M＋HCOO]− [M＋H]+ [M＋Na]+
相对分
子质量
分子式 化合物归属
5 18.326 352.9 377.0 354 C16H18O9 隐绿原酸[9]
6 19.741 352.8 377.0 354 C16H18O9 绿原酸*[9]
7 23.759 178.9 203.0 180 C9H8O4 咖啡酸*[10]
8 27.096 434.9 413.0 390 C17H26O10 马钱苷*[8]
9 44.274 627.2 /
10 48.272 515.0 538.9 516 C25H24O12 异绿原酸 B[11]
11 48.923 761.0 785.1 /
12 50.369 514.9 539.0 516 C25H24O12 异绿原酸 A[11]
13 53.520 745.0 769.0 746 C33H46O19 茶茱萸苷[8]
14 54.563 514.9 539.0 516 C25H24O12 异绿原酸 C[11]
15 56.867 931.0 933.1 /
16 61.278 1 473.2 1 497.5 1 474 C66H90O37 续断苷 A[12]
17 62.135 1 473.2 1 497.4 1 474 C66H90O38 续断苷 B[12]
18 64.738 931.0 933.1 /
19 74.675 1 675.5 1 699.8 1 676 C76H124O40 川续断皂苷 X[13]
20 77.692 1 235.4 1 259.4 1 236 C59H96O27 川续断皂苷 VII[14]
21 78.529 973.2 951.3 928 C47H76O18 川续断皂苷 VI 同分异构体[15]
22 79.066 648.2 /
23 80.150 1 073.3 1 097.4 1 074 C53H86O22 川续断皂苷乙*[16]
24 81.132 973.1 951.3 928 C47H76O18 川续断皂苷 VI 同分异构体[15]
25 81.762 973.1 951.3 928 C47H76O18 川续断皂苷 VI*[15]
26 84.365 1 659.5 1 683.4 1 660 C76H124O39 川续断皂苷 XIII[17]
27 88.673 1 015.2 993.3 970 C49H78O19 川续断皂苷 IV 同分异构体[18]
28 90.925 1 015.2 993.3 970 C49H78O19 川续断皂苷 IV 同分异构体[18]
29 93.114 1 015.2 993.3 970 C49H78O19 川续断皂苷 IV 同分异构体[18]
30 94.375 841.2 819.2 796 C42H68O14 川续断皂苷 A[19]
31 94.953 811.1 789.1 766 C41H66O13 3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-
28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷[20]
32 96.265 957.2 935.3 912 C47H76O17 川续断皂苷 V[18]
33 98.845 1 057.2 1 035.2 /
34 100.645 1 351.5 1 375.4 1 352 C64H104O30 川续断皂苷 IX[13]
35 101.007 1 219.4 1 243.5 1 220 C59H96O26 川续断皂苷 XI[17]
36 101.513 1 057.2 1 035.4 /
37 103.682 911.2 935.3 912 C47H76O17 灰毡毛忍冬次苷 D[20]
38 104.415 881.3 905.2 /
39 106.616 795.3 773.4 C41H66O12 α-常春藤皂苷*[20]
40 109.425 649.1 627.2 604 C35H56O8 3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元[18]
41 110.686 473.1 497.2 /
42 112.690 471.1 495.2 472 C30H48O4 常春藤皂苷元*[21]
*与对照品确认
*to confirm with reference
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乎不变（如异绿原酸 A、异绿原酸 C、3-O-α-L-吡
喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖
苷、川续断皂苷 V、川续断皂苷 IX、川续断皂苷
XI、灰毡毛忍冬次苷 D、α-常春藤皂苷、3-O-α-L-
吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元、常春藤皂苷元等）。
尚未发现新增或消失的成分。也许正是这些变化的
成分在影响着续断发汗前后的质量差异。
3 讨论
本实验采用液质联用方法，结合全扫描的离子
检测模式，建立了续断发汗与未发汗样品的成分分
析图谱，各得到了 42 个色谱峰，推断出了其中的
31 个化合物，较文献报道的多[22]，所得指纹图谱的
成分信息量大，可用作续断“发汗”全面质量控制
的评价依据。
本实验对影响分析方法建立的关键条件进行了
考察。考察了流动相系统甲醇-水、乙腈-水、甲醇-
0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液，最终确定
了乙腈-0.1%甲酸水溶液系统；考察了碎裂电压
100、110、120、130、135、140、150 eV，最终选
择了 135 eV；考察了干燥气的体积流量 6、8、10
L/min，最终选择了 10 L/min；考察了雾化气压力
68.96、103.44、137.92 kPa 等，最终选择了 103.44
kPa；考察了离子化温度 250、300、350 ℃，最终
选择了 350 ℃。
参考文献
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