全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 5 期 2013 年 3 月 ·541·
• 药剂与工艺 •
壳聚糖修饰雷公藤多苷纳米粒的制备及其体外释药研究
魏颖慧 1，赵燕敏 1，李 静 1, 2，徐小玉 1，郭曼曼 1，李范珠 1
1. 浙江中医药大学，浙江 杭州 310053
2. 贵州大学，贵州 贵阳 550025
摘 要：目的 制备壳聚糖修饰雷公藤多苷纳米粒（LMWC-TG-NPs），并研究其体外释药行为。方法 采用改良的自乳化
溶剂扩散法制备 LMWC-TG-NPs；正交试验设计优化雷公藤多苷纳米粒（TG-NPs）处方，单因素试验考察壳聚糖（LMWC）
修饰方式；以含 20%乙醇的 PBS（pH 7.4）为释放介质考察 LMWC-TG-NPs 的体外释药行为。结果 优化的处方工艺：以
1.0% Poloxamer 188、80 mg PLA、12 mL 有机相、丙酮-乙醇（2∶3）制备 TG-NPs 混悬液，以与 TG-NPs 混悬液等体积的
10% LMWC 溶液修饰 TG-NPs 制备 LMWC-TG-NPs；根据优化条件制备的 LMWC-TG-NPs，外观呈圆形或类圆形，平均粒
径为（207.6±3.4）nm，多分散指数（PDI）为 0.078±0.009（n＝3），包封率和载药量分别为（61.83±2.43）%、（10.70±
0.37）%（n＝3）；体外释药符合 Higuchi 方程。结论 所制备的 LMWC-TG-NPs 包封率较高，粒径小，体外释药具有明显
的缓释特征，为后期研究其肾脏靶向和毒性奠定了基础。
关键词：雷公藤多苷；壳聚糖修饰；纳米粒；正交试验设计；体外释药；自乳化溶剂扩散法
中图分类号：R283.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)05 - 0541 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.05.008
Preparation and in vitro release of tripterygium glycosides-loaded nanoparticles
modified by chitosan
WEI Ying-hui1, ZHAO Yan-min1, LI Jing1, 2, XU Xiao-yu1, GUO Man-man1, LI Fan-zhu1
1. Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China
2. Guizhou University, Guiyang 550025, China
Abstract: Objective To prepare tripterygium glycosides-loaded nanoparticles modified by 50% N-acetylated low molecular weight
chitosan (LMWC-TG-NPs) and to investigate their in vitro release behavior. Methods The LMWC-TG-NPs were prepared by
modified self-emulsifying solvent diffusion method; The formulation of TG-NPs was optimized by orthogonal design and the modified
condition of LMWC was determined based on the single factor analysis. The in vitro drug release of LMWC-TG-NPs was
characterized with PBS (pH 7.4) containing 20% ethanol. Results The optimized formulation of TG-NPs was as follows: Poloxamer
188 (1.0%), PLA (80 mg), organic phase (12 mL), and acetone-ethanol (2∶3) were used to prepare TG-NPs suspension. The
LMWC-TG-NPs were prepared by incubating TG-NPs suspension with 10% LMWC solution at the ratio of 1∶1. The shape of the
prepared LMWC-TG-NPs was spherical. The mean particle size, polydispersity index, entrapment efficiency, and drug loading were
(207.6 ± 3.4) nm, 0.078 ± 0.009, (61.83 ± 2.43)%, and (10.70 ± 0.37)% (n＝3), respectively. The in vitro release characteristics of
LMWC-TG-NPs conform to Higuchi equation in PBS buffer composed of 20% ethanol at pH 7.4. Conclusion The prepared
LMWC-TG-NPs show a sustained-release characteristics with well-distributed particle size as well as high entrapment efficiency and
drug loading, which could lay the foundation for the research on kidney targeting and toxicity.
Key words: tripterygium glycosides; chitosan-modified; nanoparticles; orthogonal design; in vitro release; self-emulsifying solvent
diffusion method

收稿日期：2012-08-31
基金项目：国家自然科学基金资助项目（30902007）；浙江省重点科技创新团队资助项目（2012R10044-05）
作者简介：魏颖慧（1976—），女，河北省石家庄人，副教授，研究方向为药物新剂型与新技术。
Tel: 13335711581 (0571)86633173 Fax: (0571)86633030 E-mail: weiyinghui@163.com
网络出版时间：2013-01-09 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20130109.1528.007.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 5 期 2013 年 3 月 ·542·
雷公藤多苷（tripterygium glycosides，TG）系
由卫矛科（Celastraceae）雷公藤属 Tripterygium
Hook. f. 植物雷公藤 Tripterygium wilfordii Hook. f.
根中提取的总苷，由二萜内酯、生物碱、三萜等多
种活性成分组成[1]，具有抗炎、镇痛、抗肿瘤及免
疫调节等作用，临床常用于免疫调节、皮肤炎症、
肾脏疾病及呼吸系统疾病的治疗[2]。特别值得关注
的是近年来凭借多组分协同作用的优势，TG 已成
为临床治疗肾病综合症的有效药物[3]。但长期应用
TG 亦可引起广泛、多系统器官的损害[4]，如消化系
统、造血系统、生殖系统、皮肤、心血管系统、神
经系统，甚至产生一定程度的肾脏毒性，从而影响
了用于肾脏疾病的治疗。
纳米粒作为药物输送载体具有诸多优势，如可
缓慢释放药物、靶向输送药物[5-6]、减轻和避免毒副
作用等。壳聚糖（chitosan）是纳米粒系统常用的一
种载体材料[7-9]，具有良好的生物相容性、生物可降
解性、低免疫原性及无毒副作用等优点，且有研究
发现 50%乙酰度的低相对分子质量壳聚糖（LMWC）
具有较高的肾脏蓄积率和滞留性[10-12]。但研究亦发
现随着壳聚糖脱乙酰度及相对分子质量的降低，将
会导致纳米粒粒径增大，包封率及载药量下降，体
外释药速率加快[13]。因此，考虑到肾脏靶向性和良
好的药物释放控制两个方面，本实验以聚乳酸
（polylactic acid，PLA）为载体材料，LMWC 为修
饰剂制备了 LMWC 修饰的 TG 纳米粒（LMWC-TG-
NPs）；通过正交试验及单因素试验设计对处方工艺
进行了优化，并对所制备 LMWC-TG-NPs 的体外释
药行为进行了考察，以期为 TG 肾脏靶向给药系统
的研究奠定基础。
1 仪器与材料
HJ—6B 多头磁力加热搅拌机（江苏金坛市金
伟实验仪器厂）；RE52CS 旋转蒸发器（上海亚荣生
化仪器厂）；Labconco 冷冻干燥机（美国 Labconco
公司）；马尔文粒度测定仪（英国马尔文公司）；
Optima 超速低温离心机（美国 Beckman 公司）；
Agilent1200 高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）；
CP225D 电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公
司）；JEM—1200EX 透射电子显微镜（日本 Jeol 公
司）；HZ—9212S 水浴恒温振荡器（江苏太仓华利
达实验设备公司）；透析袋（上海绿鸟科技发展有限
公司，截留相对分子质量为 3 000）。
TG（上海诺特生物科技有限公司，含雷公藤酯
甲为 0.56%，批号 090320）；雷公藤酯甲对照品（中
国药品生物制品检定所，批号 111597-200503）；PLA
（批号 09111917，Mw＝10 000，山东岱罡生物科技
有限公司）；50%脱乙酰度低相对分子质量壳聚糖
（批号 09071013，Mr＝19 000，南通绿神生物工程
有限公司）；Poloxamer 188（批号 WPWA544C，德
国 BASF 公司）；乙腈（HPLC 级，美国 Honeywell
Burdick& Jackson 公司）；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 LMWC-TG-NPs 的制备
2.1.1 雷公藤多苷纳米粒（TG-NPs）的制备 取处
方量的TG和PLA溶于适当比例的丙酮-乙醇混合溶
剂中，构成有机相；另取处方量的Poloxamer 188溶
于适量水中，构成水相；在一定转速（500 r/min）
搅拌下将有机相缓慢滴加至水相中，滴毕，继续搅
拌10 min，40 ℃减压蒸去有机溶剂，得到带有淡黄
色乳光的TG-NPs混悬液。
2.1.2 LMWC-TG-NPs 的制备 取一定量 LMWC，
溶于 0.5%醋酸水溶液中，制得 10% LMWC 溶液。
取与 TG-NPs 混悬液等体积的 10% LMWC 溶液，
持续搅拌下滴加至 TG-NPs 混悬液中，充分搅拌，
37 ℃孵育 1 h，得 LMWC-TG-NPs 混悬液。将纳米
粒混悬液冷冻超速离心（30 000 r/min）30 min，沉
淀用蒸馏水洗涤 3次，经水分散并冻干后得LMWC-
TG-NPs 冻干粉。
2.2 LMWC-TG-NPs 中雷公藤酯甲的测定[14]
2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent Extend-C18 柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（85∶
15）；体积流量 1.0 mL/min；柱温 25 ℃；检测波长
210 nm；进样量 20 μL。
2.2.2 线性关系考察 精密称取减压干燥至恒定质
量的雷公藤酯甲对照品适量，置 5 mL 量瓶中，用
甲醇溶解并稀释至刻度，得质量浓度为 0.32 mg/mL
的雷公藤酯甲对照品储备液。分别精密量取储备液
适量，加流动相稀释为 0.32、1.60、3.20、6.40、12.80、
25.60 μg/mL 的系列对照品溶液，按“2.2.1”项下色
谱条件测定，以峰面积积分值（Y）对质量浓度（X）
进行线性回归，得回归方程 Y＝7.339 4 X＋4.764 6，
r＝0.999 8，表明雷公藤酯甲在 0.32～25.60 μg/mL
与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密吸取制备好的
LMWC-TG-NPs 混悬液 1 mL 置 10 mL 量瓶中，加
甲醇适量，超声，并用甲醇稀释至刻度，得破乳
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 5 期 2013 年 3 月 ·543·
LMWC-TG-NPs，将其加至已处理好的含水分 3%的
中性氧化铝柱（100～200 目，5.0 g，内径 1 cm，湿
法装柱）上，用丙酮 10 mL 洗脱，收集洗脱液，蒸
干，残渣用甲醇溶解，转移至 1 mL 量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.2.4 精密度试验 取低、中、高（1.60、6.40、25.60
μg/mL）质量浓度的雷公藤酯甲对照品溶液，分别
于 1 d 内测定 5 次，连续测定 5 d，得日内 RSD 分
别为 1.41%、1.36%、1.34%；日间RSD分别为 1.29%、
1.65%、1.62%。
2.2.5 回收率试验 按“2.1”项下方法操作，不加
TG，制备空白纳米粒混悬液，吸取适量，加入雷公
藤酯甲储备液适量，加甲醇稀释为低、中、高（1.60、
6.40、25.60 μg/mL）3 个质量浓度的供试品溶液（各
质量浓度供试品溶液平行制备 3 份），按“2.2.3”项
下方法处理，进样测定，计算得雷公藤酯甲的平均
回收率分别为（99.25±1.70）%、（97.95±2.21）%、
（95.59±1.29）%。
2.2.6 重复性试验 取同一批次制备的 LMWC-
TG-NPs 混悬液 6 份，精密吸取 1 mL 置 10 mL 量瓶
中，加甲醇稀释至刻度，按“2.2.3”项下方法处理，
进样测定峰面积，计算得雷公藤酯甲质量浓度的
RSD 为 1.90%。
2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液于室温下放
置，分别于制备后 0、2、4、8、12 h 进样测定，测
得雷公藤酯甲峰面积的 RSD 为 1.57%。
2.3 包封率和载药量测定
精密量取 LMWC-TG-NPs 混悬液 1 mL，加入
具塞离心管中，4 ℃ 10 000 r/min 离心 30 min，取
上清液按“2.2.3”项下方法处理，进样测定雷公藤
酯甲的量，记作 m1；另精密量取 LMWC-TG-NPs
混悬液 1 mL，置于 10 mL 量瓶中，加入甲醇适量
超声，并稀释至刻度，同上处理，测定纳米粒中总
的雷公藤酯甲的量，记作 m0；分别计算包封率和载
药量。
包封率＝(m0－m1) / m0
载药量＝(m0－m1) / mt
m0 为纳米粒混悬液中总药物量，m1 为纳米粒混悬液中游离
药物量，mt 为载药纳米粒的总质量
2.4 LMWC-TG-NPS的处方工艺优化
预试验考察中发现壳聚糖的修饰会使纳米粒的
粒径增大，但对包封率和载药量几乎无影响，因此
为了用较少的试验得到最佳的试验结果，本研究拟
首先采用正交试验设计对 TG-NPS 的处方进行优
化，再结合单因素考察试验结果，确定壳聚糖的修
饰条件，进而确定LMWC-TG-NPS的最优处方工艺。
2.4.1 正交试验设计优化 TG-NPs 处方 本实验选
择 Poloxamer 188 用量（A）、PLA 用量（B）、有机
相体积（C）、丙酮与乙醇的体积比（D）为考察因
素，每个因素选取 3 个水平（因素水平表见表 1），
按 L9(34) 正交设计表进行试验，以粒径（y1）、包封
率（y2）和载药量（y3）为指标筛选最佳处方组成。
采用综合加权评分法对正交试验结果进行综合分
析，y1、y2、y3 分别按 40%、30%、30%的系数积分，
综合评分（y）＝40×(1－y1/y1max)＋30×y2/y2max＋
30×y3/y3max。正交试验设计与结果见表 1。
采用直观分析法，由表 1 中极差值可知在以粒
径、包封率和载药量为考察指标的各因素中，影响
程度大小依次为 A＞C＞D＞B，即 Poloxamer 188
用量＞有机相体积＞丙酮与乙醇的体积比＞PLA
用量，各因素最佳水平为 A2B1C1D2。由方差分析结
果（表 2）可知，因素 A、C 对粒径、包封率和载
药量影响显著（P＜0.05），而因素 D 对其影响不显
著。通过综合分析，本试验选择最佳处方组成为
A2B1C1D2，即 Poloxamer 188 用量为 1.0%，PLA 用
量为 80 mg，有机相体积为 12 mL，丙酮与乙醇的
体积比为 2∶3。
2.4.2 单因素试验确定壳聚糖的修饰条件 以未修
饰壳聚糖的 TP-NPs 为参照，考察两种壳聚糖修饰
方式（同时修饰和后修饰）对纳米粒粒径、Zeta 电
位、包封率及载药量的影响。其中未修饰壳聚糖的
TP-NPs 的制备按“2.1.1”项下方法进行；同时修饰
即在“2.1.1”项下所述的水相中加入壳聚糖；后修
饰即按“2.1.2”项下方法。结果（表 3）发现，未
修饰壳聚糖的 TP-NPs 的 Zeta 电位为负值，修饰后
均转为正值，且经壳聚糖修饰后粒径明显变大；壳
聚糖修饰对包封率及载药量几无影响。考虑到同时
修饰方式可能会使纳米粒具有较高的突释效应[15]，
本实验采用后修饰的方式制备 LMWC-TP-NPs。
2.4.3 LMWC-TG-NPs 最佳处方工艺 按正交试验
优化所得的 TG-NPS 最佳处方组成，根据单因素试
验所确定的壳聚糖修饰条件，以 10%壳聚糖为修饰
剂，确定 LWMC-TG-NPs 的最佳处方工艺，即：称
取 10.0 mg TG 和 80 mg PLA 溶于 12 mL 混合溶剂
（丙酮与乙醇体积比为 2∶3）中，构成有机相；以
1.0% Poloxamer 188 为水相（30 mL）；在一定转速
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表 1 L9(34) 正交试验设计方案和结果 (n＝3)
Table 1 Results of L9(34) orthogonal design (n＝3)
试验号 A / % B / mg C / mL D y1 / nm y2 / % y3 / % y
1 0.5 (1) 80 (1) 12 (1) 1∶1 (1) 184.7 74.07 12.16 52.86
2 0.5 (1) 100 (2) 15 (2) 2∶3 (2) 164.1 78.53 9.14 52.93
3 0.5 (1) 120 (3) 18 (3) 3∶2 (3) 134.7 56.93 5.94 44.58
4 1.0 (2) 80 (1) 15 (2) 3∶2 (3) 158.6 66.89 13.48 58.43
5 1.0 (2) 100 (2) 18 (3) 1∶1 (1) 128.0 59.54 7.12 49.41
6 1.0 (2) 120 (3) 12 (1) 2∶3 (2) 156.1 60.00 14.85 59.12
7 1.5 (3) 80 (1) 18 (3) 2∶3 (2) 149.0 52.52 7.64 43.22
8 1.5 (3) 100 (2) 12 (1) 3∶2 (3) 165.3 67.86 9.42 49.15
9 1.5 (3) 120 (3) 15 (2) 1∶1 (1) 124.5 52.74 7.29 47.91
K1 150.37 154.51 161.13 150.18
K2 166.96 151.49 159.27 155.27
K3 140.28 151.61 137.21 152.16
R 26.68 3.02 23.92 5.09

表 2 方差分析
Table 2 Analysis of variance
方差来源 离差平方和 自由度 F 值 显著性
A 120.984 2 62.075 P＜0.05
C 118.030 2 60.559 P＜0.05
D 4.389 2 2.252
B (误差) 1.949 2
F0.05(2, 2)＝19.00 F0.01(2, 2)＝99.00

表 3 壳聚糖修饰方式对纳米粒的影响 (n＝3)
Table 3 Influence of chitosan-modified methods
on nanopaticles (n＝3)
修饰方式 粒径 / nm
Zeta 电位 /
mV
包封率 /
%
载药量 /
%
未修饰壳
聚糖
127.4±1.7 −22.6±0.29 63.08 10.60
同时修饰 183.9±1.2 9.65±0.34 66.20 9.90
后修饰 204.5±1.9 9.90±0.87 60.81 10.25

（500 r/min）搅拌下将有机相缓慢滴加至水相中，滴
毕，继续搅拌 10 min，40 ℃减压蒸出有机溶剂，得
到带有淡黄色乳光的 TG-NPs 混悬液。取与上述混
悬液等体积的 10% LMWC-0.5%醋酸水溶液，持续
搅拌下滴加至 TG-NPs 混悬液中，充分搅拌，37 ℃
孵育 1 h，得 LMWC-TG-NPs 混悬液。将纳米粒混
悬液冷冻超速离心（30 000 r/min）30 min，沉淀用
蒸馏水洗涤 3 次，经水分散并冻干后得 LMWC-TG-
NPs 冻干粉。
2.5 LMWC-TG-NPs 外观形态、粒径及其分布
吸取少量 LMWC-TG-NPs 胶态混悬液滴至铜
网上，静置 10 min 后用滤纸片吸干，再滴加 2.0%
磷钨酸溶液于铜网上负染 3 min，自然挥干，用透
射电子显微镜观察并摄制照片，见图 1。由透射电
镜照片可知，LMWC-TG-NPs 呈圆形或类圆形，大
小及分布较均匀，粒子之间未见粘连和聚集现象。
取 LMWC-TG-NPs 混悬液用适量蒸馏水稀释
后，采用激光粒径测定仪测定平均粒径及粒径分布，
结果分别见表 4 和图 2。
2.6 验证试验
按“2.4.3”项下 LMWC-TG-NPs 最佳处方工艺，
制备了 3 批 LMWC-TG-NPs 混悬液，分别测定其粒
径、多分散指数（polydispersity index，PDI）、包封
率和载药量，结果粒径、PDI、包封率和载药量分别

图 1 LMWC-TG-NPs 透射电镜照片
Fig. 1 TEM photograph of LMWC-TG-NPs
0.1 μm
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表 4 验证试验结果
Table 4 Results of verification test
批次 粒径 / nm PDI 包封率 / % 载药量 / %
1 208.3 0.077 61.32 10.75
2 203.9 0.069 64.47 11.04
3 210.6 0.088 59.69 10.31



图 2 LMWC-TG-NPs 的粒径分布
Fig. 2 Particle size distribution of LMWC-TG-NPs

为（207.6±3.4）nm、0.078±0.009、（61.83±2.43）%、
（10.70±0.37）%（n＝3）。
2.7 体外释药研究
分别精密称取 TG 原药粉末、LMWC-TG-NPs
干粉适量，分散于 2 mL 含 20%乙醇的 pH 7.4 PBS
中，装入预先处理好的透析袋中，密封后置于 50 mL
含 20%乙醇的 pH 7.4 PBS 中，于（37±0.5）℃恒
温水浴振荡（75 r/min），定时取样 1 mL，并立即补
加等量同温释放介质，样品用 0.22 μm 微孔滤膜滤
过，取续滤液按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算
累积释药率（Q），绘制释药曲线，结果见图 3。
Q＝(V0×ρt＋V×∑−
=
1
1
t
n
ρn) / w
ρt 为 t 时间点测得释放介质中的药物质量浓度（μg/mL），V
为每次取样体积（mL），V0 为释放介质的总体积（mL），w
为纳米粒的载药量（μg），ρn 为各取样时间点的药物质量浓
度（μg/mL）
由图 3 可知，TG 原药在释放介质中释放很快，
1.5 h 累积释药率达到 60.0%，至 6 h 时药物已基本
释放完全，累积释药率达 96.1%；由释药曲线直接
提取参数得 t0.5 为 1.14 h。LMWC-TG-NPs 在 6 h 时
累积释药率为 57.8%，24 h 时累积释药率为 68.0%，
t0.5为 4.43 h，显示出明显的缓释特征。分别用零级
动力学模型、一级动力学模型和 Higuchi 模型对
LMWC-TG-NPs 体外释药行为进行了拟合，结果表
明 LMWC-TG-NPs 在 pH 7.4 PBS（含 20%乙醇）中
的释药行为符合 Higuchi 方程：Q＝0.195 1 t1/2－
0.039 2，r＝0.824 7。



图 3 LMWC-TG-NPs 体外释药曲线 (n＝3)
Fig. 3 In vitro release curves of LMWC-TG-NPs (n＝3)

3 讨论
本实验制备的纳米粒系采用改良的自乳化溶剂
扩散法（M-SESD）制备。根据 M-SESD 法制备 NPs
的形成机制，有机溶剂只有充分自发扩散至水相自
乳化成较小的乳滴，才能形成大小均匀、圆整光滑
的 NPs。实验结果表明，处方因素中有机相体积和
Poloxamer 188 用量对纳米粒形成过程影响显著。本
实验中固定水相，发现随着有机相体积从 5 mL 增
加至 15 mL（即有机相/水相的相体积比由 1∶6 增
加至 1∶2），NPs 的粒径和 PDI 逐渐减小，包封率
也略有下降；但随着有机相体积进一步增大为 20～
25 mL（相体积比增至 2∶3～5∶6），NPs 粒径和
PDI 反而趋向增大，同时包封率显著降低。其原因
可能为随着有机相体积的增大，使得载体材料
（PLA）的浓度减小，有机相的黏度降低。当有机相
向水相中扩散时，有机相在乳化剂的作用下，分散
为均匀细小的乳滴，形成了相对稳定的分散体系，
乳滴间团聚的机会减少，形成的 NPs 粒径越小且相
对稳定。但是随着有机相体积进一步增加，则会使
得有机相不易充分分散至水相，乳滴发生聚集，造
成 NPs 的粒径和 PDI 增大；同时有机相体积过大，
使得有机相的黏度显著降低，对药物分子扩散的阻
力减小，增加了其向水相扩散的速率，从而使包封
率降低。
本实验中采用的乳化剂 Poloxamer 188 兼具乳
化和稳定的双重功能，在一定用量范围内（0.25%～
1.0%），随着其用量增加，使体系的表面张力逐渐
降低，有利于有机相在水相中的分散，且在有机相
和水相界面形成了较厚的亲水性膜，可阻止粒子间
的团聚，增强体系的稳定性，使 NPs 粒径减小；但
若其用量过大，常会造成外水相过于黏稠，此时表
面活性剂并不完全具有降低表面张力的特性，NPs
20 50 100 200 500 1 000
粒径 / nm
0 5 10 15 20 25
t / h
Q
/
%

TG
LMWC-TG-NPs
100
80
60
40
20
0
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 5 期 2013 年 3 月 ·546·
反而趋向于聚集，致使 NPs 粒径增大。
本实验采用直接吸附法制备了壳聚糖修饰的
TG-NPs，考察了壳聚糖质量分数对纳米粒 Zeta 电
位的影响。结果表明，随着壳聚糖质量分数的增大
（0～10%），纳米粒 Zeta 电位明显增大，但随着壳
聚糖质量分数进一步增大（10%～40%），Zeta 电位
几乎不再变化，表明壳聚糖在纳米粒表面的修饰已
达到饱和，因此本实验选择 10%壳聚糖为修饰剂。
实验亦考察了壳聚糖溶液与 TG-NPs 混悬液体积
比，发现二者体积比为 1∶1 时可制得性质稳定的纳
米粒，大于 1∶1 时即出现浑浊，因此本实验选择二
者的体积比为 1∶1。
制备 LMWC-TG-NPs 的过程实质上是壳聚糖与
TG-NPs 通过静电作用而结合的过程，最终壳聚糖
以环状和尾状物的方式吸附到纳米粒表面[16]。与未
修饰的 TG-NPs 相比，壳聚糖修饰的纳米粒粒径明
显增大，粒径分布变宽 [TG-NPs 平均粒径及 PDI
分别为（133.9±3.6）nm 和 0.064±0.006；LMWC-
TG-NPs 平均粒径及 PDI 分别为（207.6±3.4）nm
和 0.078±0.009]。Zeta 电位由负值转为正值（电位
的转变亦证实了壳聚糖的确包裹在纳米粒表面），而
包封率和载药量几无变化。壳聚糖修饰使得纳米粒
粒径增大的原因主要是壳聚糖表面修饰增加了纳米
粒的黏性，从而使其更容易发生聚集的缘故[17]。壳
聚糖修饰后纳米粒的 Zeta 电位的转变是由于
TG-NPs 表面带负电荷，壳聚糖带正电荷，水合作
用时由于静电吸附作用，壳聚糖可以紧密吸附在纳
米粒外表面所致。
文献报道 TG 在水、生理盐水及 PBS（pH 6.4、
7.4）中的溶解度均较低，但在含有一定体积分数乙
醇的 pH 7.4 PBS 中溶解性能较好[14]。因此结合预试
验结果，本实验选用含有体积分数 20%乙醇的 pH
7.4 PBS 为释放介质进行了 LMWC-TG-NPs 的体外
释药研究。结果表明，TG 原药 6 h 时已基本释放完
全，透析袋对 TG 几乎无吸附；LMWC-TG-NPs 中
TG 释放呈现明显的缓释特征。这可能是由于载体
材料 PLA 的降解速度较慢，同时在释放过程中 NPs
内部结构逐渐变得紧密而使释放介质渗入受阻导致
药物释放缓慢。LMWC-TG-NPs 的缓释特征可能会
与其体内毒性的降低有关[18]，对本实验所制备的纳
米粒的肾脏靶向性和毒性还有待于进一步深入研究。
参考文献
[1] 阙慧卿, 耿莹莹, 林 绥, 等. 雷公藤化学成分的研究
[J]. 中草药, 2005, 36(11): 1624-1625.
[2] 冯先礼, 岑国栋. 雷公藤多苷对小鼠细胞免疫功能的
影响 [J]. 现代药物与临床, 2009, 24(5): 289-291.
[3] 陈志强, 曹 枫, 黄怀鹏, 等. 雷公藤多苷对肾小球细
胞外基质以及TGF-β1的影响 [J]. 中草药, 2003, 34(6):
548-549.
[4] 郭雪红. 雷公藤多苷的药理研究及临床应用概述 [J].
中成药, 2010, 32(7): 1199-1202.
[5] Guzmán M, Aberturas M R, Rodríguez-Puyol M, et al.
Effect of nanoparticles on digitoxin uptake and
pharmacologic activity in rat glomerular mesangial cell
cultures [J]. Drug Deliv, 2000, 7(4): 215-222.
[6] Choi C H J, Zuckerman J E, Webster P, et al. Targeting
kidney mesangium by nanoparticles of defined size [J]. P
Nat Acad Sci USA, 2011, 108(16): 6656-6661.
[7] 赵 静, 曾建国, 邹剑锋, 等. 黄芩苷-血根碱离子对壳
聚糖纳米粒的制备及表征 [J]. 中草药, 2012, 43(4):
676-682.
[8] 周闻舞, 顾海铮. 壳聚糖微/纳米粒在定向给药系统中
的应用研究 [J]. 药物评价研究, 2010, 33(4): 290-295.
[9] 仲 博, 张 岭, 张 莉, 等. 麻黄碱壳聚糖修饰脂质
体凝胶剂的制备及体外透皮研究 [J]. 中草药, 2012,
43(1): 70-73.
[10] Onishi H, Machida Y. Biodegradation and distribution of
water-soluble chitosan in mice [J]. Biomaterials, 1999,
20(2): 175-182.
[11] Yuan Z X, Sun X, Gong T, et al. Randomly 50% N-
acetylated low molecular weight chitosan as a novel renal
targeting carrier [J]. J Drug Target, 2007, 15(4): 269-278.
[12] Yuan Z X, Zhang Z R, Zhu D, et al. Specific renal uptake
of randomly 50% N-acetylated low molecular weight
chitosan [J]. Mol Pharm, 2009, 6(1): 305-314.
[13] 何 文, 匡长春, 张 洪, 等. 壳聚糖的分子参数对载
药壳聚糖纳米粒体外性质的影响研究 [J]. 中国药学杂
志, 2005, 40(6): 438-453.
[14] 舒 薇, 刘继勇, 杨帝顺. 雷公藤多苷纳米乳的制备及
体外透皮特性研究 [J]. 中国药学杂志, 2011, 46(21):
1651-1655.
[15] 陈红丽, 吕洁丽, 晏 杰, 等. 壳聚糖修饰的 PLGA 纳
米粒作为蛋白多肽类药物载体的研究 [J]. 功能材料,
2011, 42(2): 202-205.
[16] Qu G W, Wu X L, Yin L F, et al. N-octyl-O-sulfate
chitosan-modified liposomes for delivery of docetaxel:
Preparation, characterization, and pharmacokinetics [J].
Biomed Pharmacother, 2012, 66(1): 46-51.
[17] Chen H L, Yang W Z, Chen H, et al. Surface modification
of mitoxantrone-loaded PLGA nanospheres with chitosan
[J]. Colloids Surf B Biointerfaces, 2009, 73(2): 212-218.
[18] 刘明星, 董 静, 杨亚江, 等. 雷公藤甲素聚乳酸纳米
粒的制备及毒性 [J]. 药学学报, 2004, 39(7): 556-560.