全 文 ：[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ¤¥¶²µ³·¬²± ° ¦¨«¤±¬¶° ²©⁄¤±¶«¨ ±¶∏¥¼ ∏¶¬±ª≤¤¦²2u °²±²¯¤¼¨ µ°²§¨ ¯q Μετηοδ : ≤¤¦²2u
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[ Κεψ ωορδσ] ⁄¤±¶«¨ ±¶∏~ ≤¤¦²2u ¦¨¯¯ °²±²¯¤¼¨ µ°²§¨ ~¯ ¤¦·¬√¨·µ¤±¶³²µ·¤·¬²±
≈责任编辑 刘  
≈收稿日期   ussy2st2sy
≈基金项目   湖北省计划生育委员会资助项目 k≥ ussv p stl
≈通讯作者   3 熊承良 o ר¯} ksuzl {vy|uyxto ƒ¤¬} ksuzl
{vyvwvzwo∞2°¤¬¯} ¦¯¬¬²±ªƒ °¤¬¯¶q·­°∏q §¨∏q¦±
野山楂根拮抗雷公藤多苷对雄性大鼠生殖
损伤作用的研究
胡 廉 o徐惠敏 o熊锦文 o田永红 o明 钰 o熊 芬 o熊承良 3
k华中科技大学 同济医学院 计划生育研究所 生殖医学中心 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要   目的 }观察中药野山楂根水煎剂对雷公藤多苷所致雄性不育大鼠生育力的影响 ∀方法 }将成年雄性
大鼠随机分组 o分别给予雷公藤多苷片溶液 kts °ª# ®ªpt lo野山楂根水煎剂 kt1{ox1wot{ ª# ®ªpt l n雷公藤多苷
片溶液 kts °ª# ®ªpt l和蒸馏水 kt °# ®ªpt l灌胃 o{周后停用雷公藤多苷 o中药组继续行野山楂根灌胃 ∀ w周后
各组动物与成年雌性大鼠交配 o观察交配雌鼠妊娠率和平均胚胎 !黄体数 ∀测定雄鼠生殖器官性腺脏器指数 !附睾
精子计数 !活力 !存活率 o观察各组动物睾丸 !附睾组织病理和超微结构改变 o放射免疫法测定血清和睾丸组织睾酮
k×lo血清卵泡刺激素 kƒ≥‹ l和促黄体生成素 k‹ l含量 ∀结果 }与雷公藤多苷模型组比较 o野山楂根组交配雌鼠
妊娠胎数 !雄鼠睾丸 !附睾脏器指数以及附睾精子计数 !活力均有提高 kΠ  s1sxl~野山楂根组精子超微结构较模型
组有明显恢复 ~睾丸组织匀浆 ×显著高于模型组 kΠ  s1stl∀结论 }野山楂根能够拮抗雷公藤多苷对雄性大鼠的
生殖损伤作用 o提高不育症模型雄鼠的生育力 ∀
≈关键词   野山楂根 ~雷公藤多苷 ~精子发生 ~下丘脑 2垂体 2睾丸轴 ~大鼠
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt{2txut2sx
野山楂 Χραταεγυσχυνεατα ≥¬¨¥1 ·¨∏¦¦1又名南
山楂 !小叶山楂 !红果子 o是山楂属植物的一种 ∀通
过对不同品种山楂的比较研究发现 o野山楂中的黄
酮含量较高 o其主要药理活性存在于心血管系统 o抗
心肌缺血和降低胆固醇作用强于北山楂 k商品山
楂 l≈t  ∀目前 o用山楂制成的中成药已达五六十种
之多 o但多以北山楂的果实 !叶等入药 o野山楂应用
很少 o且大多都是局限于消化系统或者心血管系统 o
生殖系统的研究鲜有报道 ∀本实验在民间验方及前
期预实验基础上 o观察野山楂根对不育症动物模型
生育功能的影响 o探讨其对雄性生殖功能的作用 ∀
1 材料与方法
111 动物
成年 • ¬¶·¤µ大鼠 o雄 !雌性各 xs只 o体重 uss ∗
uxs ªots ∗ tu周龄 ∀合格证号 ≥≤÷Žk鄂 l ussw2
ssszo购于华中科技大学同济医学院实验动物中心 ∀
112 药品与试剂
野山楂根 o由京山县计划生育委员会提供 ∀切
片洗净晾干 o双蒸水常压下煎煮 u次 o制成生药为 u
ª# °pt的水煎剂 ∀雷公藤多苷片 kŠ×• o规格每
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第 vt卷第 t{期
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∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t{
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片 ts °ªo批号 swststl购于上海复旦复华药业有限
公司 ∀将 Š×• 研成粉末 o溶于双蒸水中制成 x °ª
# °pt的混悬液 ∀考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒 k南
京建成生物工程研究所 lo睾酮 k×l!卵泡刺激素
kƒ≥‹ l!黄体生成素 k‹ l放射免疫分析试剂盒 k上
海生物制品研究所 l∀
113 方法
11311 动物分组及给药 xs只雄性大鼠随机分为
野山楂根高 !中 !低剂量组 !Š×• 模型组 !空白对照
组 o每组 ts只 ∀除空白组外 o其余 w组每天给予
Š×• ts °ª# ®ªpt灌胃 ∀同时实验组分别给予野山
楂根水煎剂 t1{ox1wot{ ª# ®ªpt k相当于 tovots倍
临床等效剂量 ≈u  l灌胃 ∀ Š×• 灌胃 {周后停用 o实
验组继续灌服中药 w周 oŠ×• 组给予双蒸水 t °#
®ªpt灌胃 ∀空白组常规摄食饮水 tu周 ∀大鼠每周
称重 t次 o调整给药剂量 ∀
11312 交配实验 给药第 {周及第 tu周后 o各组
雄鼠与动情前期雌鼠 tΒt合笼 w §∀每天做阴道细
胞涂片查精子 o以查到精子作为 ⁄to⁄tw解剖孕鼠 o
记录雌鼠妊娠胚胎和黄体数目 ∀
11313 性腺脏器指数 交配结束后处死动物 o睾
丸 !附睾 !前列腺 !精囊称重 ∀
脏器指数 kh l € 器官重 kªl Α体重 kªl ≅ tssh
11314 附睾精子活动力 !存活率 !计数 取附睾尾
部组织少许 o按照文献记载方法 ≈v 计数附睾精子 o
测定精子活动力以及存活率 ∀
11315 睾丸 !附睾形态学 睾丸 !附睾组织用 wh
多聚甲醛固定 o常规石蜡包埋 !‹∞染色 o光镜下观
察组织病理改变 ∀另取少量组织戊二醛固定 o电镜
观察超微结构变化 ∀
11316 血清 !睾丸匀浆激素测定 动物股动脉取
血 o分离血清 p us ε 保存 ∀睾丸组织制备匀浆液 ∀
考马斯亮蓝法测定组织匀浆蛋白含量 o放免法测定
血清中 ×oƒ≥‹ o‹水平和睾丸组织匀浆 ×的含量 ∀
114 统计学处理
除妊娠率外 o其余实验数据均用 cξ ? σ表示 o采
用 ≥„≥ts1s软件处理数据 o妊娠率的比较采用 ςu分
析 o其余进行方差分析 k„‘’∂ „lo各组间比较采用
⁄∏±± ·¨检验 ∀
2 结果
211 雌鼠妊娠情况
动物给药 {周后 o各组所交配雌鼠妊娠胎数均
明显降低 o组间比较无统计学差异 ∀给药 tu周后 o
野山楂根实验组交配雌鼠妊娠率略高于模型组 o但
无统计学差异 ∀而雌鼠胎数明显高于 Š×• 模型组
kΠ s1sxlo接近空白组胚胎数 ∀低剂量山楂组黄
体数与模型组差异具有显著意义 kΠ  s1sxl k表
tl∀
表 t 各组交配雌鼠平均胎数和黄体数
的比较 kcξ ? σ, ν € tsl
分组
剂量
rª# ®ªpt
妊娠率
r h
胎数
r个
黄体
r个
Š×• 模型 p yvqyw zqtw ? wqz{vl ttqt{ ? u1w{
野山楂根 t{ zzqz{ tuqxz ? tq|stl ttqyz ? u1xx
xqw zuqzv tuq{{ ? vqsstl tuqxx ? t1|u
tq{ zs tuqtz ? vqyytl tw ? v1tytl
空白 p tss tuqtw ? uq{x ttq{y ? u1yt
注 }与模型组比较 tl Π  s1sx, u) Π  s1st;与空白组比较 v) Π 
s1sx, w) Π  s1stk表 t ∗ w同 l
212 性腺脏器指数
各组动物体重于实验结束时无明显差异 ∀但在
睾丸指数和附睾指数上 o野山楂根各组均高于 Š×•
模型组 kΠ  s1sxlo与空白组接近 ∀而精囊腺和前
列腺脏器指数各组差异无显著性 k表 ul∀
213 附睾精子活动力 !存活率 !计数
表 u 各组大鼠性腺脏器指数的比较 k cξ ? σ, ν € tsl
组别 剂量 rª# ®ªpt 体重 rª 睾丸指数 rh 附睾指数 rh 精囊腺指数 rh 前列腺指数 rh
Š×• 模型 p vvsqx ? wtq|v sqxz ? sqt|wl squs ? sqsvwl sqvw ? sqts sqtv ? sqsv
野山楂根 t{ vxxqs ? wsq{| sq{{ ? sqs|ul squ{ ? sqsvul sqwt ? sqsz sqtu ? sqsu
xqw vyzq{ ? v|q| sq{s ? sqtxul squx ? sqswtl sqwt ? sqtu sqtt ? sqsw
tq{ vwzqs ? uzq|t sq{s ? squutl squz ? sqsxul sqwt ? sqsx sqtu ? sqsu
空白 p vxyqx ? tzqvv sq{u ? sqtt squy ? sqsw sqvv ? sqsw sqtu ? sqsu
用药结束后 o各组附睾精子存活率无显著差异 o
但野山楂组精子活力和计数均较 Š×• 模型组有明
显改善 kΠ s1sxl∀其中野山楂中剂量组精子活力
与模型组差异有显著性 kΠ  s1stlo与空白组无明
显差异 ∀高剂量组精子计数除显著高于 Š×• 组外
kΠ s1stlo与空白组比较差异也具有显著性 kΠ 
s1sxlo而低剂量组精子计数虽然高于 Š×• 组 kΠ 
s1sxlo但低于空白组 kΠ s1sxlk表 vl∀
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≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
表 v 各组大鼠附睾精子活动力 !存活率和精子计数的比较 kcξ ? σ, ν € tsl
组别 剂量 rª# ®ªpt 精子活动力 rh 存活率 rh 精子计数 r≅ tsw # °ªpt
Š×• 模型 p uwqv|w ? usq|uwwl v{qzs{ ? tuqxws tyqvy ? |qyxvwl
野山楂根 t{ wuqyuz ? tuq|xztl wvqwz{ ? tuqytv yxqw ? twqtwyuovl
xqw w{qw|v ? |qszvul w|qxsx ? twqzt{ wwqt| ? {quvxul
tq{ v|q{|u ? tsqwswtl wvqyu{ ? yqwt| vuq{{ ? tuq{vvto vl
空白 p wxquuv ? |qswz wyq|{y ? zqxzs w|q{t ? txqw{|
214 睾丸 !附睾形态学
21411 光镜观察结果 用药 tu周后各实验组睾
丸 !附睾组织变化不明显 ∀ Š×• 模型组睾丸部分曲
细精管生精细胞排列稍紊乱 o少数附睾管腔内精子
稍减少 ∀野山楂根各组睾丸 !附睾形态结构与空白
组类似 ∀
21412 电镜观察结果 给药 tu周后 Š×• 模型组
睾丸生精上皮层变薄 o各级生精细胞胞质疏松伴有
空泡形成 o胞质内出现较多的脂滴和溶酶体 ∀附睾
上皮纤毛排列密集规则 o结构正常 o管腔内可见脱落
的晚期精子细胞 ∀精子头部核染色质疏松 o呈明显
的 /空泡海绵状 0o部分精子核出现固缩 !坏死现象 o
核膜不连续 o结构模糊 ∀精子尾部中段胞质消失 o粗
纤维及轴丝暴露 ∀线粒体肿胀 o排列紊乱 o部分线粒
体鞘崩解 !脱落 k图 t ∗ vl∀野山楂根各剂量组睾
丸 !附睾以及精子形态均较 Š×• 模型组好 ∀曲细
精管管壁上各级生精细胞排列正常 o结构连续 o可见
已形成的精子嵌入生精层内 k图 wl∀附睾上皮纤毛
排列规则 !密集 o上皮细胞形态未见明显异常 ∀管腔
内见密集分布的精子 o精子核致密 o形态正常 o膜形
结构完整清晰 ∀中段线粒体排列规则 o/ | n u0微管
结构形态正常 k图 xl∀
图 t Š×• 模型组睾丸生精上
皮超微结构 k ≅ w sssl
215 血清 !睾丸组织匀浆激素测定结果
与空白组相比 oŠ×• 模型组睾丸组织匀浆 ×显
著降低 kΠ  s1sxlo且仅为野山楂根实验组的
xu1xh ∗ yu1{h o差异具有显著性 kΠ  s1stl∀野

图 u Š×• 模型组附睾管脱落精子
细胞超微结构 k ≅ ts sssl
图 v Š×• 模型组精子超微结构 k ≅ { sssl
图 w 野山楂根低剂量组 kt1{ ª# ®ªpt l
生精上皮超微结构 k ≅ w sssl
山楂根组血清 ƒ≥‹与空白组无明显差异 o而显著高
于 Š×• 模型组 kΠ  s1stl∀各组血清 ×和 ‹未
见统计学差异 k表 wl∀
3 讨论
Š×• 对睾丸生精上皮损伤的严重程度与用药
剂量大小和给药时间长短成正比 ≈w  ∀本研究造模
所采用的 ts °ª# ®ªpt的剂量连续灌胃 {周 o动物能
良好耐受 ∀与空白组相比 o模型大鼠交配雌鼠妊娠
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图 x 野山楂根高剂量组 kt{ ª# ®ªpt l
精子超微结构 k ≅ { sssl
胎数减少 o雄鼠精子活力 !精子计数下降 o尽管停药
w周仍未恢复正常 o表明该模型已经造成大鼠生殖
系统的显著损伤 ∀在运用野山楂根水煎剂予以恢复
后 o雌鼠妊娠胎数和雄鼠精子活力 !精子计数均较模
型组有不同程度的提高 o表明野山楂根对 Š×• 所
致的雄性生殖损伤具有一定的拮抗作用 ∀值得注意
的是 o在精子计数这一指标上 ov个剂量的野山楂根
组恢复作用出现了明显的剂量 2效应的不同 ∀中剂
量组精子计数与空白组相近 kww1t| o w|1{tlo高剂
量组比空白组高 vt1vh o而低剂量组虽高于模型
组 o但仍低于空白组约 vwh ∀这表明在同期恢复的
表 w 各组大鼠血清 !睾丸组织匀浆激素的比较 kcξ ? σ, ν € tsl
分组
剂量
rª# ®ªpt
睾丸组织匀浆 ×
r±ª# ªpt
血清
× r±ª# §pt ƒ≥‹ r ˜# °pt ‹ r˜# °pt
Š×• 模型 p xyuqttu ? tyvqtztvl tswqyyx ? vuqwy{ zqt{w ? vqtuu tq|uv ? sqv|v
野山楂根 t{ t ssuqz|u ? uysq|t{ul tuvqxs{ ? uuqvsu tsqxz| ? tq|z|ul uqwsy ? sqwww
xqw t szsqsx| ? utwquuvuovl tvtq|{y ? xsqswu tuqsvz ? uqt{ul uqutz ? sqxst
tq{ {|wqv|v ? uxxqut|ul txzqx|{ ? y{qw|u zq{z{ ? tq|zy uqszx ? sqwys
空白 z|wq|z ? usxqyyt tvuqz|z ? wyq{|w zqzx{ ? tqy|u uqwsv ? sqxxy
情况下 o野山楂根较自然恢复效果理想 o且作用效果
随用药剂量的增加而增强 ∀
目前研究普遍认为 oŠ×• 作用于精子细胞的变
态期 o抑制晚期精子细胞精核蛋白转化和精子在附
睾中的成熟 ≈x  o影响精子核的浓缩 ∀结合本实验超
微病理学观察 o野山楂根组精子核较 Š×• 模型组
明显致密 o核膜结构完整 o表明野山楂可能对精子
⁄‘„具有某种保护功能 o可促进精子核浓缩以及在
附睾中的进一步凝集 o稳定精子结构 o从而保证精子
的受精能力和胚胎的正常发育 ∀已有研究证实 o山
楂可拮抗丝裂霉素 ≤诱导的细胞致突变毒性 ≈y  o对
环磷酰胺致小鼠精子畸变也有明显抑制作用 ≈z  ∀
这些均与山楂抗外来物损伤 o保护细胞遗传物质的
作用相关 ∀
关于 Š×• 对雄性生殖内分泌激素影响目前的
研究结果众说不一 ∀实验结果显示 oŠ×• 模型组血
清 ×oƒ≥‹和 ‹与空白组无显著性差异 o这与大多
数研究认为的 Š×• 不影响下丘脑 2垂体 2睾丸轴一
致 ≈{o |  ∀尽管如此 o模型组睾丸组织匀浆 ×仅为空
白组的 zs1zh o表明 Š×• 对于睾丸局部雄激素合
成及分泌可能具有抑制作用 o通过降低睾丸高浓度
的 ×水平 o使得生精过程受到抑制 o导致雄鼠生育
力下降 ∀本实验观察到 o野山楂根对动物精囊腺和
前列腺脏器指数无明显提高 o血清 ×值与空白组及
Š×• 模型组均无显著差异 o考虑野山楂根并无雄激
素样作用 ∀但是值得注意的是 o野山楂组睾丸匀浆
×值较模型组提高 x|1th ∗ |s1wh o中剂量组比空
白组高 vw1yh o表明野山楂根的抗 Š×• 作用可能
与局部 ×的维持有关 ∀此外 o野山楂根高 !中剂量
组血清 ƒ≥‹与模型组差异显著 kΠ  s1stlo虽然与
空白组差异无统计学意义 o但仍比正常组提高
vy1wh和 xx1uh o表明野山楂根对下丘脑 2垂体 2睾
丸轴可能具有一定的影响作用 o通过提高垂体 ƒ≥‹
的分泌 o促进睾丸支持细胞合成 „…°o拮抗 Š×• 的
睾丸局部 ×抑制作用 o维持曲细精管内高浓度的 ×
值 o促进精子的发生和成熟 o增进细胞生理代谢和增
生发育 o提高睾丸 !附睾脏器指数 ∀
目前用于临床的许多男性促生育中药被证实含
有性激素成分或具有性激素样作用 o因而它们的生
殖药理功效主要是通过激素样作用促进生殖腺的发
育及睾酮的合成 ≈tso tt  ∀而现有的研究文献及实验
均表明 o山楂类植物并无激素样作用 o因此其对生殖
激素的影响可能是针对性腺轴以及睾丸生精内环境
的调节实现的 ∀已有实验表明 o一些补肾方剂可促
进性腺轴各水平细胞增生 o改善细胞代谢 o修复细胞
形态结构的异常 o调节激素受体和相关基因的表达 o
从而保证器官发挥正常的生理功能 ≈tu  ∀因此认为
野山楂可能也是通过以上途径 o多环节 !多层次的调
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节生殖内分泌轴 o改善雄性生殖功能 o促进 Š×• 模
型大鼠生育能力的恢复 ∀
总之 o本实验初步表明野山楂根能提高 Š×•
模型大鼠睾丸生精功能 o修复精子的形态损伤 o改善
雄性生殖系统内分泌轴的调节 o拮抗 Š×• 的生殖
损伤作用 o使不育症模型大鼠的生育能力得到恢复 o
其具体作用机制尚有待进一步的实验研究 ∀
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的影响 ≈ 1河北医科大学学报 o usswo uxkvl} t{x1
Ρ εσισταντ εφφεχτ οφ ωατερ δεχοχτιον οφ ροοτ οφ Χραταεγυσ χυνεατα ον
µ αλε ινφερτιλιτψ ινδυχεδ βψ Γ ΤΩ ιν ρατσ
‹˜ ¬¤±o ÷ ˜ ‹∏¬2°¬±o ÷ Œ’‘Š ¬±2º ±¨o ׌„‘≠²±ª2«²±ªo  Œ‘Š ≠∏o ÷ Œ’‘Š ƒ ±¨o ÷ Œ’‘Š ≤«¨ ±ª2¯¬¤±ª
(Χεντεροφ Ρεπροδυχτιϖε Μεδιχινε, Φαµ ιλψ Πλαννινγ Ρεσεαρχη Ινστιτυτε, Τονγϕι ΜεδιχαλΧολλεγε, Ηυαζηονγ Υνιϖερσιτψ οφ
Σχιενχε & Τεχηνολογψ, Ωυηαν wvssvs, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·¶²©º¤·¨µ§¨ ¦²¦·¬²± ²©·«¨ µ²²·²©Χραταεγυσχυνεατα ²± ¬±©¨µ·¬¯¬·¼ ¬±§∏¦¨§¥¼ °∏¯·¬2
ª¯∏¦²¶¬§¨ ²©Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι kŠ×• l ¬± µ¤·¶1Μετηοδ :  ¤¯¨¤§∏¯·µ¤·¶º µ¨¨ µ¤±§²° ¼¯ §¬√¬§¨ §¬±·²©¬√¨ªµ²∏³¶o º«¬¦«º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§
√¬¤ª¤¶·µ¬¦ª¤√¤ª¨ ²©§¬¶·¬¯¯ §¨º¤·¨µkt °# ®ªpt lo ¶²¯∏·¬²± ²©Š×• kts °ª# ®ªpt l ¤±§·«µ¨¨§²¶¨¶²©º¤·¨µ§¨ ¦²¦·¬²± ²©µ²²·²©Χ1
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[ Κεψ ωορδσ] µ²²·²©Χραταεγυσχυνεατα~ °∏¯·¬2ª¯∏¦²¶¬§¨ ²©Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι kŠ×• l~ ¶³¨ µ°¤·²ª¨ ± ¶¨¬¶~ «¼³²·«¤¯¤°∏¶2³¬2
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≈责任编辑 刘  
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第 vt卷第 t{期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
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